純培養(yǎng)與顯微技術(shù)演示文稿

純培養(yǎng)與顯微技術(shù)演示文稿本文檔共56頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分（優(yōu)選）純培養(yǎng)與顯微技術(shù)本文檔共56頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分微生物個(gè)體：小利用群體研究屬性群體形式繁衍、保存人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)繁殖得到的微生物群體為培養(yǎng)物本文檔共56頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分培養(yǎng)物純培養(yǎng)物混合培養(yǎng)物純培養(yǎng)能較好地得到重復(fù)結(jié)果，是微生物研究的重要技術(shù)之一本文檔共56頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分顯微技術(shù)是微生物研究的另一項(xiàng)重要技術(shù)個(gè)體小本文檔共56頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)無菌技術(shù)（aseptictechnique)

分離、轉(zhuǎn)接、純化時(shí)防止其他微生物污染的技術(shù)本文檔共56頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分試管、燒瓶、培養(yǎng)皿等常用器皿滅菌方法有：高壓蒸汽滅菌、高溫干熱、煮沸一、微生物的分離和純培養(yǎng)微生物培養(yǎng)常用器皿及滅菌本文檔共56頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分接種針或接種環(huán)分離或?qū)⑽⑸飶囊粋€(gè)培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)接到另一個(gè)，無菌操作?；鹧媾赃?、超凈臺(tái)或無菌室進(jìn)行。接種環(huán)采用迅速加熱和冷卻的鎳鉻合金制備液體培養(yǎng)物用無菌移液管或移液器一、微生物的分離和純培養(yǎng)接種操作，最基本技術(shù)本文檔共56頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)超凈臺(tái)火焰旁無菌區(qū)本文檔共56頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)各種菌落一、微生物的分離和純培養(yǎng)菌落(colony)：?jiǎn)蝹€(gè)微生物在固體培養(yǎng)基或內(nèi)層）生長(zhǎng)繁殖形成肉眼可見的，有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長(zhǎng)群體。菌落連成片為菌苔（lawn）本文檔共56頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），是微生物分類、鑒定的重要依據(jù)。本文檔共56頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共56頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落一、微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共56頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分克?。╟lone)：一個(gè)單細(xì)胞繁殖形成的菌落，即一個(gè)純種細(xì)胞群或克隆。固體培養(yǎng)基：瓊脂或其他凝膠物質(zhì)固化的培養(yǎng)基。平板：即培養(yǎng)平板（cultureplate)。融化的固體培養(yǎng)基倒入無菌平皿冷卻凝固后即為平板，用于分離、培養(yǎng)微生物。一、微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共56頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分稀釋平板法（pourplatemethod)

將細(xì)菌或其他微生物無菌水梯度稀釋，取少量與冷卻至50℃固體培養(yǎng)基混合，搖勻，倒入培養(yǎng)皿，凝固，倒置培養(yǎng)24小時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)菌落。一、微生物的分離和純培養(yǎng)常用固體分離純培養(yǎng)方法：本文檔共56頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)稀釋平板法本文檔共56頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分涂布平板法（spreadplatemethod)

稀釋平板法因?yàn)榧?xì)菌與50℃培養(yǎng)基混合導(dǎo)致某些熱敏感菌死亡，及好氧菌埋在培養(yǎng)基中缺乏氧氣影響生長(zhǎng)，所以更常用涂布平板法。一、微生物的分離和純培養(yǎng)常用固體分離純培養(yǎng)方法：本文檔共56頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)涂布平板法本文檔共56頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分平板劃線分離法（streakplatemethod）

接種環(huán)沾取少許微生物，在無菌平板扇形、平行等劃線，隨劃線次數(shù)增加而分散開，得到單菌落。平板劃線分離一、微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共56頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分本文檔共56頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分稀釋搖管法(dilutionshakeculturemethod）厭氧微生物可用此法進(jìn)行純培養(yǎng)分離。操作：盛培養(yǎng)基試管加熱融化，冷卻至50℃，待分離材料用這些試管梯度稀釋，搖勻，冷凝，石蠟封口一、微生物的分離和純培養(yǎng)本文檔共56頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分厭氧微生物分離裝置：一、微生物的分離和純培養(yǎng)厭氧罐厭氧手套箱本文檔共56頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)：一、微生物的分離和純培養(yǎng)有些微生物液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)，原生動(dòng)物、藻類。方法稀釋法：接種物在液體培養(yǎng)基中順序稀釋，高度稀釋，每個(gè)試管中分配不到一個(gè)。若稀釋后同一梯度的平行試管中大多數(shù)（>95％）沒有，那么有微生物的可能是純培養(yǎng)，否則可能性下降。本文檔共56頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分顯微分離法直接分離單細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)一、微生物的分離和純培養(yǎng)單細(xì)胞（單孢子）顯微分離：稀釋法缺點(diǎn)分離的優(yōu)勢(shì)菌顯微操作儀，專業(yè)程度高本文檔共56頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分對(duì)某微生物生長(zhǎng)需要了解后，設(shè)計(jì)適合其生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基，抑制其他菌生長(zhǎng)，即使該微生物在混雜群體中很少也可分離。一、微生物的分離和純培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離方法：本文檔共56頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分選擇培養(yǎng)基直接分離一、微生物的分離和純培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離方法：如：耐高溫菌采用高溫篩選；蛋白酶產(chǎn)生菌加牛奶篩選；抗抗生素可采用加抗生素篩選待分離的微生物生長(zhǎng)，其它微生物的生長(zhǎng)被抑制本文檔共56頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離方法：富集培養(yǎng)特定的環(huán)境條件僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加從自然界中分離到所需的特定微生物本文檔共56頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分根據(jù)微生物的特殊要求，從自然界分離出特定已知微生物種類分離培養(yǎng)在特定環(huán)境中能生長(zhǎng)的微生物富集培養(yǎng)本文檔共56頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)二元培養(yǎng)物：培養(yǎng)物只含兩種微生物，并有意識(shí)保持兩者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物為二元培養(yǎng)物。如：病毒－－宿主，原生動(dòng)物－－細(xì)小微生物本文檔共56頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)微生物菌種保藏技術(shù)：為何保藏如何保藏性狀穩(wěn)定的菌種是微生物學(xué)工作最重要的基本要求，否則生產(chǎn)或科研都無法正常進(jìn)行。要求：菌種不死，不污染，不變中國微生物菌種保藏委員會(huì)（CCCCM)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），美國典型菌種保藏中心（ATCC）等本文檔共56頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)微生物菌種保藏技術(shù)：如何保藏根據(jù)菌種特性和保藏目的不同，給特定環(huán)境使其存活而得以保存連續(xù)移種或改變環(huán)境條件：干燥、低溫、缺氧、避光、缺乏營養(yǎng)等本文檔共56頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分斜面：可保存數(shù)周至數(shù)年，可用石蠟或橡皮塞封口，低溫延長(zhǎng)保存時(shí)間液體：菌苔制成菌懸液，低溫（懸液保藏法）缺點(diǎn)：繁瑣、易污染、變異喪生原有特性一、微生物的分離和純培養(yǎng)微生物菌種保藏技術(shù)：傳代保藏斜面、半固體瓊脂柱、液體本文檔共56頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)微生物菌種保藏技術(shù)：冷凍保藏液氮保藏、低溫冰箱等液氮可達(dá)－196℃，效果較好注意：速凍，減少冰晶損傷細(xì)胞本文檔共56頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分一、微生物的分離和純培養(yǎng)微生物菌種保藏技術(shù)：干燥保藏沙土管保藏、冷凍真空干燥保藏沙土管：產(chǎn)孢子菌。制成孢子懸液，加無菌沙土管，減壓抽干水分，石蠟封口，冰箱保存。冷凍真空干燥：加保護(hù)劑樣品預(yù)先冷凍，真空冰升華去水，低溫保存，保存數(shù)十年，目前最普遍、最重要的方法，菌種保藏中心多采用此法。菌種保藏時(shí)采用不同手段保藏，防止某種方法失敗導(dǎo)致菌種喪失。本文檔共56頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)決定顯微觀察效果重要因素：分辨率和反差分辨率：辨別兩點(diǎn)之間最小距離的能力反差：樣品與背景區(qū)別程度普通顯微鏡機(jī)械裝置：鏡座、支架、載物臺(tái)、調(diào)焦螺旋光學(xué)系統(tǒng)：物鏡、目鏡、聚光器

普通顯微鏡結(jié)構(gòu)示意圖顯微鏡種類和原理：本文檔共56頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)光學(xué)顯微鏡一般配置的最大放大倍數(shù)是多少？為什么？目鏡：10~15╳；物鏡：100╳；總放大倍數(shù)1000~1500╳；如何實(shí)現(xiàn)光學(xué)顯微鏡一般配置的最大放大倍數(shù)？其原理？使用油鏡，即在100╳物鏡和載玻片之間滴加香柏油；香柏油與玻璃折射率相近本文檔共56頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)

0.5l分辨率（最小可分辨距離）=————nsinq分辨率與所用波長(zhǎng)成反比！本文檔共56頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)分辨率與所用波長(zhǎng)成反比！本文檔共56頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分N：玻片與物鏡間介質(zhì)的折射率空氣（n=1.0）、水（n=1.33）、香柏油（n=1.52）顯微觀察時(shí)可根據(jù)物鏡的特性而選用不同的介質(zhì)二、顯微鏡和顯微技術(shù)本文檔共56頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)光線在穿過折射率不同的介質(zhì)時(shí)發(fā)生折射本文檔共56頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)浸沒油與玻璃的折射率相近很多原來由于在透鏡及載片表面的反射和折射而損失的光線可以進(jìn)入物鏡，使照明亮度提高，改善觀察效果。本文檔共56頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分暗視野顯微鏡二、顯微鏡和顯微技術(shù)活細(xì)菌在普通顯微鏡下是透明，觀察不清，采用暗視野顯微鏡，如：黑夜看星星就很清楚。

暗視野顯微鏡結(jié)構(gòu)與照明示意圖本文檔共56頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分暗視野顯微鏡二、顯微鏡和顯微技術(shù)特殊聚光器實(shí)現(xiàn)斜射照明，給樣品照明的光線不直接穿過物鏡，而經(jīng)樣品反射或折射后進(jìn)入物鏡，使樣品與背景差別大，可以清楚看到透明微小顆粒。用于：生活細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性觀察。本文檔共56頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分相差顯微鏡二、顯微鏡和顯微技術(shù)本文檔共56頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分相差顯微鏡二、顯微鏡和顯微技術(shù)光線透過透明標(biāo)本，波長(zhǎng)（顏色）和振幅（亮度）沒有多大變化，用普通顯微鏡觀察透明標(biāo)本，其形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)難以分辨。細(xì)胞各部分折射率和厚度不同，當(dāng)光線通過時(shí)，直射光和衍射光光程有差別，而人眼看不到，但是可通過相差顯微鏡看到。相差顯微鏡采用特殊光學(xué)裝置：環(huán)狀光闌和相差板，利用光的干涉，將光的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭梢姷恼穹睿靼担?，使能不染色而看到活?xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的某些顯微結(jié)構(gòu)。其發(fā)明人F.Zernike因此獲1953年諾貝爾物理獎(jiǎng)。本文檔共56頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分熒光顯微鏡二、顯微鏡和顯微技術(shù)熒光素吸收uv放出波長(zhǎng)較長(zhǎng)的可見光，因此在uv照射下，發(fā)熒光的物體會(huì)在黑暗背景顯現(xiàn)為光亮有色物體，為熒光顯微技術(shù)原理。在免疫學(xué)和分子生物學(xué)應(yīng)用廣泛。本文檔共56頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)熒光顯微鏡本文檔共56頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分二、顯微鏡和顯微技術(shù)透射電子顯微鏡（簡(jiǎn)寫TEM）用波長(zhǎng)短的電磁波取代可見光，使分辨率提高。工作原理類似，因光源不同，有區(qū)別:電子若遇空氣中分子會(huì)發(fā)生偏轉(zhuǎn)使物象不清楚，因此鏡筒高真空2)電子帶電荷，電鏡是用電磁圈使之聚焦3)電子像人眼看不到，用熒光屏顯示或感光膠片記錄本文檔共56頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分大腸桿菌透射電子顯微鏡圖本文檔共56頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分掃描電子顯微鏡（SEM）掃描電子顯微鏡大腸桿菌掃描電鏡圖二、顯微鏡和顯微技術(shù)工作原理與光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡不同，是電子束掃描，激發(fā)樣品表面放出二次電子，電子產(chǎn)生多少與標(biāo)本表面立體形貌有關(guān)。電子經(jīng)探測(cè)器收集，經(jīng)光電倍增管和放大器，產(chǎn)生樣品立體圖像于熒光屏上。主要用于：樣品表面結(jié)構(gòu)本文檔共56頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\15點(diǎn)49分掃描隧道顯微鏡（STM）二、顯微鏡和顯微技術(shù)80年代出現(xiàn)的，原理：利用量子力學(xué)中的隧道效應(yīng)。其橫向分辨率：0.1～0.2nm，縱向分辨率：0.001nm這種分辨率足以對(duì)單個(gè)原子觀察。利用這種顯微鏡直接觀察蛋白質(zhì)、DNA、RNA等以及CM、virus等結(jié)構(gòu)。本文檔共56頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\1