分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器操作簡介

關(guān)于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器操作簡介第1頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1.微量移液器第2頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三

微量移液器有數(shù)字可調(diào)式和固定式兩種型號(hào)，是計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)?！涛⒘恳埔浩饔卸喾N規(guī)格，在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)調(diào)節(jié)讀數(shù)?！獭獭獭痰?頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三量液的操作步驟：第一停點(diǎn)第二停點(diǎn)A保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一停點(diǎn)；B微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；C保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢慢壓下按鈕至第一停點(diǎn)；D壓至第二停點(diǎn)把溶液完全釋放出；E釋放按鈕回原狀。第4頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1．未裝吸嘴的微量移液器絕對(duì)不可用來吸取任何液體。

2．一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會(huì)造成損壞。

3．不要橫放或倒拿帶有殘余液體吸嘴的移液器。

4．不要用大量程的移液器移取小體積樣品。

5.移液器使用完后，將刻度調(diào)到最大刻度，收藏。

量液操作注意問題：第5頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三2.臺(tái)式高速離心機(jī)離心機(jī)的分類

低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn)

高速：每分鐘1~3萬轉(zhuǎn)

超速：每分鐘3萬轉(zhuǎn)以上第6頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三低速：細(xì)胞等大分子

高速：DNA，蛋白等

超速:

病毒，蛋白，細(xì)胞器等基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中都離不開低溫離心技術(shù)離心機(jī)的功能：分離純化第7頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺(tái)上，檢查離心機(jī)是否放置平穩(wěn)。2、將離心管對(duì)稱放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，且要事先平衡。3、鎖緊門蓋。4、插上電源插座，按下電源開關(guān)。5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、時(shí)間.注意：對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)子不可超速使用，否則對(duì)試管或轉(zhuǎn)子有損壞。6、當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，打開門蓋取出離心管，關(guān)斷電源開關(guān)。臺(tái)式高速離心機(jī)使用步驟第8頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三注意事項(xiàng)：1、離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)，不要打開門蓋。2、安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。3、離心管加液要平衡，若加液差異過大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查，使加液符合要求，離心試管必須對(duì)稱放入。4、若運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。5、離心機(jī)徹底停止后，才可開蓋，取樣。第9頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三低溫冷凍離心機(jī)1.把離心機(jī)水平安放于地面2.使用前開機(jī)預(yù)冷3.對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)子重量要平衡4.按操作規(guī)程操作第10頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三3.PCR儀第11頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三PCR儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等。PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，能使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括DNA變性、復(fù)性、延伸三個(gè)反應(yīng)。第12頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三操作程序:1）開機(jī)：打開電源，顯示主界面；2）創(chuàng)建程序：使用”create”輸入新程序（包括PCR循環(huán)數(shù)，預(yù)變性、變性、復(fù)性、延伸的時(shí)間和溫度），保存程序（包括用戶名和方法名）;3）放入樣品，蓋上蓋子;4）在所建用戶名下按“run”鍵，找到設(shè)定的程序，按“start”鍵啟動(dòng)程序;5）運(yùn)行結(jié)束后按“stop”鍵停止運(yùn)行，取出樣品，關(guān)閉電源。第13頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三

1、預(yù)變性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

2、變性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

3、退火：溫度自定，30s~2min。

4、延伸：72℃，對(duì)于(1kb=1min,每增加1kb加1min)。

5、循環(huán)數(shù)：一般25～35個(gè)循環(huán)(2,3,4步循環(huán)）。

6、最終延伸：72℃，5～15min。

7、保存：4℃，時(shí)間設(shè)為0-60min。

8、END。如何設(shè)置PCR程序：第14頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三4.電泳圖像分析系統(tǒng)第15頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第16頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三系統(tǒng)簡介：系統(tǒng)可以通過紫外/可見光分析裝置及透光掃描儀直接獲得核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳圖像。系統(tǒng)配置有SmartView生物電泳圖像分析軟件，可以進(jìn)行密度掃描、密度定量、分子量計(jì)算等電泳分析。此外，該系統(tǒng)含有多種圖像濾波器，可降低圖像的噪音，從而獲得較清晰的圖像。第17頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三操作步驟：1）將電泳樣品放入分析裝置中2）打開電腦，運(yùn)行SmartView軟件，單擊“Import”鍵進(jìn)入

圖像獲取項(xiàng)目欄，選擇“獲取視頻圖像”鍵，進(jìn)行圖像采集3）選

擇紫外或可見光源，在圖像采集窗口中調(diào)節(jié)好圖像大

小、亮度及焦距4）單擊“采集圖像”鍵，根據(jù)圖像質(zhì)量選擇好優(yōu)化攝影時(shí)間

（一般情況下在12秒左右），即開始采集。1、圖像采集第18頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第19頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三2、圖像保存

單擊“System鍵”選擇“另保存圖像為”鍵，出現(xiàn)一個(gè)“圖像文件登記”窗口，輸入標(biāo)題，實(shí)驗(yàn)人，實(shí)驗(yàn)日期，實(shí)驗(yàn)摘要等信息，按“保存”鍵完成圖像文件登記，同時(shí)出現(xiàn)“另保存圖像為”窗口，輸入圖像名，保存圖像至桌面。3、關(guān)閉操作系統(tǒng)（1）關(guān)閉紫外/可見光。（2）退出軟件界面。（3）關(guān)閉紫外與可見分析裝置的電源。第20頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三注意事項(xiàng)：1、不要戴“臟”手套觸摸電腦鼠標(biāo)、鍵盤及其它位置；

2、不要戴“臟”手套觸摸倉門和燈箱電源開關(guān)；

3、不要戴“臟”手套觸摸外接電源開關(guān)；

4、在圖像獲取過程中，若通過軟件打開紫外/可見光，則必須再通過軟件關(guān)閉，若通過紫外與可見分析裝置上打開紫外/可見光，則從分析裝置上關(guān)閉，嚴(yán)禁互用，導(dǎo)致紫外燈長亮。第21頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三5.電泳儀DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）第22頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三操作程序：1）電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端連接（極性不要接反）；2）打開電源，設(shè)置參數(shù)（選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍）；3）按“啟動(dòng)”啟動(dòng)程序（輸出為高電壓，注意安全）；4）電泳結(jié)束，按“停止”鍵終止程序。第23頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三注意事項(xiàng)1、電泳儀工作時(shí)，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，以免觸電，同時(shí)要求儀器有良好接地端，以防漏電。2、儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路。3、由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳所通過的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。4、使用過程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外。

第24頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三使用及性能：搖床（振蕩器）廣泛用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體搖勻，微生物、細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)。

6.恒溫氣浴搖床SHK-99-Ⅱ型臺(tái)式空氣恒溫?fù)u床第25頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1）樣品瓶牢固放入彈簧夾中；2）接通電源開關(guān)，設(shè)定參數(shù)（溫度、時(shí)間、轉(zhuǎn)速等）；3）按啟動(dòng)鍵啟動(dòng)儀器，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉(zhuǎn)；4）按下控制面板的電源鍵兩秒，顯示屏顯示消失，關(guān)閉電源總開關(guān)。操作程序：第26頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三7.超凈工作臺(tái)使用及性能：超凈工作臺(tái)為分子生物學(xué)無菌操作提供可能，分為垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)兩種。第27頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級(jí)濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，能夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，同時(shí)也不會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，可以保持無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。第28頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三臺(tái)面清潔消毒紫外燈滅菌30分鐘進(jìn)行無菌操作清理工作臺(tái)面紫外消毒30分鐘關(guān)閉紫外燈、電源操作程序：1）工作臺(tái)面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。2）操作時(shí)一定注意關(guān)掉紫外燈，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害。注意事項(xiàng)：第29頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三8.滅菌鍋使用及性能：細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌；對(duì)于經(jīng)過導(dǎo)入DNA重組分子的菌株，操作后必須進(jìn)行嚴(yán)格的高壓消毒滅活處理。第30頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1）開蓋：轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上；2）通電：打開控制面板上電源開關(guān)，若水位低則紅燈亮；3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不宜過大，各包裝之間留有間隙，利于蒸汽穿透，提高滅菌效果；3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，壓緊鍋蓋；4）滅菌：121℃，20min；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，不宜超過2/3；5）滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣。操作