液質(zhì)聯(lián)用儀原理及操作注意事項安捷倫64

液質(zhì)聯(lián)用儀原理及操作注意事項LDD本文檔共24頁；當前第1頁；編輯于星期一\16點51分高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC/MS）是指高效液相色譜與質(zhì)譜串聯(lián)的技術(shù)，是將應(yīng)用范圍極廣的高效液相分離方法與靈敏、專屬、能夠提供分子量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法結(jié)合起來的一種現(xiàn)代分析技術(shù)。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)簡介本文檔共24頁；當前第2頁；編輯于星期一\16點51分HPLC-MS主要由HPLC儀、接口離子源（LC與MS連接裝置）、質(zhì)量分析器、真空系統(tǒng)、計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。過程：混合樣品通過液相色譜系統(tǒng)進樣，由色譜柱分離，從色譜儀流出的被分離組分依次通過接口進入MS儀的離子源處被離子化，然后離子被聚焦于質(zhì)量分析器中，根據(jù)質(zhì)荷比而分離，分離后的離子信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，傳送至?shù)據(jù)處理系統(tǒng)，對樣品進行定性定量分析。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)簡介本文檔共24頁；當前第3頁；編輯于星期一\16點51分質(zhì)譜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)介紹（ESI、庫倫爆炸）定量方法的開發(fā)液質(zhì)聯(lián)用各系統(tǒng)的操作注意事項質(zhì)譜系統(tǒng)的維護主要內(nèi)容本文檔共24頁；當前第4頁；編輯于星期一\16點51分一、質(zhì)譜的系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖本文檔共24頁；當前第5頁；編輯于星期一\16點51分質(zhì)譜系統(tǒng)各部件介紹1.離子源：產(chǎn)生離子化，并將產(chǎn)生的離子在電場的作用下進入毛細管

3.離子光學組件：包括skimmer1，八級桿以及Len1和Len2,進一步除去溶劑和中性分子，高效的離子傳輸組件，聚焦隨機運動的離子進入四級桿。2.毛細管：離子導入通道，將離子源產(chǎn)生的離子傳輸進入質(zhì)譜，同時隔離外部的常壓與質(zhì)譜內(nèi)部的高真空4.四級桿MS1和MS2：質(zhì)量過濾器，優(yōu)化離子傳輸和質(zhì)譜分辨率，可以選擇讓某些質(zhì)荷比的離子一次通過或者所有離子全通過。5.碰撞池：高壓碰撞池，優(yōu)化裂解，六級桿設(shè)計有助于捕獲碎片離子6.檢測器：包括高能打拿級和電子倍增器，增強信號，高增益毛細管電壓CapillaryVoltage毛細管出口電壓Fragmentor碰撞能Collisionenergy電子倍增電壓EMV本文檔共24頁；當前第6頁；編輯于星期一\16點51分ESI離子源的原理ESI將溶液中的離子轉(zhuǎn)變?yōu)闅庀嚯x子三大步驟：1.在噴霧毛細管尖端產(chǎn)生帶電霧滴2.通過溶劑蒸發(fā)和霧滴分裂使帶電霧滴變小，這一過程反復(fù)進行，直至生成很小的帶電霧滴3.由很小帶電霧滴產(chǎn)生氣相離子特點1.直角噴霧離子源設(shè)計，大大減少了未離子化的中性液滴進入質(zhì)譜中，降低噪音，保證毛細管和離子光路更干凈，抗污染2.反吹干燥系統(tǒng)，加速噴霧的溶劑揮發(fā)，減少溶劑簇和流動相的附加離子，在standby狀態(tài)時，仍維持一定的干燥氣溫度和流量，避免空氣吸入質(zhì)譜真空系統(tǒng)，極大的減少了污染本文檔共24頁；當前第7頁；編輯于星期一\16點51分庫倫爆炸原理：帶有被測物質(zhì)離子的流動相在霧化針尖端發(fā)生霧化，液滴表面富集帶同種電荷的離子，內(nèi)部帶相反電荷聚集，形成帶電液滴細的噴霧，在電場的作用下，飛向毛細管。加熱的氮氣干燥氣體反向流動，帶走液滴中的中性溶劑分子，從而收縮液滴，直至排斥的靜電力超過液滴表面張力，引起庫倫爆炸，過程不斷重復(fù)，待分析物離子最終變成氣態(tài)進入毛細管。本文檔共24頁；當前第8頁；編輯于星期一\16點51分1.全掃描scan,確認得到化合物離子質(zhì)量數(shù)2.選擇離子模式，優(yōu)化毛細管出口電壓(fragmentor),保證母離子的傳輸效率3.子離子掃描，使用優(yōu)化好的fragmentor,選擇定量離子，優(yōu)化碰撞能量，優(yōu)化子離子的響應(yīng)4多重反應(yīng)監(jiān)測MRM定量，使用已優(yōu)化好的fragmentor,優(yōu)化每個子離子的碰撞能MS2ScanMS2SIMProductIonScanMRM二、定量方法的開發(fā)邏輯順序：本文檔共24頁；當前第9頁；編輯于星期一\16點51分1.MS2Scan確定待測物的分子離子本文檔共24頁；當前第10頁；編輯于星期一\16點51分2.MS2SIM優(yōu)化待測物的fragmentor本文檔共24頁；當前第11頁；編輯于星期一\16點51分3.ProductIonScan確定定性定量離子本文檔共24頁；當前第12頁；編輯于星期一\16點51分4.MRM

優(yōu)化子離子碰撞能本文檔共24頁；當前第13頁；編輯于星期一\16點51分過膜處理流動相以及樣品必須過膜（有機濾膜、水系膜）流動相應(yīng)超聲脫氣10~20min,否則壓力易波動（裝有在線脫氣機，影響會小一些）流動相每兩天至少更換緩沖鹽的使用反相常用流動相為甲醇、乙腈、水以及緩沖鹽溶液。注意：LC中常采用無機緩沖鹽，LC/MS中則應(yīng)該使用揮發(fā)性的緩沖鹽，如甲酸銨、乙酸銨；或揮發(fā)性酸堿甲酸、乙酸、氨水等調(diào)節(jié)pH三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項不能使用的溶劑添加劑LC/MS中不能使用磷酸鹽、硼酸鹽、硫酸鹽、三氟乙酸、三乙胺，易殘留，會形成強離子對，產(chǎn)生離子抑制，降低靈敏度溶劑截止波長溶劑的截止波長：乙腈/190nm,甲醇/210nm,水/190nm.一般分析時樣品檢測波長應(yīng)至少大于所用溶劑的截止波長20nm以上，否則背景較高。1234流動相本文檔共24頁；當前第14頁；編輯于星期一\16點51分色譜柱根據(jù)鍵合相的不同可分為氨基柱、C8、C18、C30柱等等色譜柱使用完要沖洗，特別是使用緩沖鹽分析樣品時，原則上用于沖洗的流動相中水的比例應(yīng)該等于或高于分析時所用流動相中水的比例。

嚴禁用純水沖洗柱子，易造成固定相的流失和鍵合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱，因具有三相鍵合相，所以高耐水性，用于分析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項123反相色譜柱本文檔共24頁；當前第15頁；編輯于星期一\16點51分紫外檢測器UV二極管陣列檢測器DAD熒光檢測器FLD蒸發(fā)光散色檢測器ELSD示差檢測器RID質(zhì)譜檢測器MS三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項檢測器的選擇本文檔共24頁；當前第16頁；編輯于星期一\16點51分適用于堿性樣品，可用乙酸或甲酸對樣品甲乙酸化。樣品中含有仲氨或叔氨時可優(yōu)先考慮使用正離子模式（如磺胺類、喹諾酮類物質(zhì)）適合于酸性樣品，可用氨水對樣品進行堿化，樣品中含有較多的強負電性基團，如含氯、含溴和多個羥基時可嘗試使用負離子模式（如氯霉素）三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項正離子模式負離子模式正負離子模式選擇的一般原則：本文檔共24頁；當前第17頁；編輯于星期一\16點51分四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維護及故障排除維護周期本文檔共24頁；當前第18頁；編輯于星期一\16點51分四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維護及故障排除1.沖洗霧化氣組件樣品運行結(jié)束后，可以使用90%乙腈/10%水,把質(zhì)譜設(shè)置on,沖洗三分鐘，可以有效除去霧化器以及質(zhì)譜切換閥內(nèi)痕量的樣品殘留。當霧化器較臟時，可取下霧化器，使用合適的，可以充分溶解可能的樣品殘留的溶劑超聲（霧化器尖端不可接觸到容器壁）本文檔共24頁；當前第19頁；編輯于星期一\16點51分四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維護及故障排除2.清洗電噴霧霧化室將儀器設(shè)置為standby,待離子源溫度冷卻后，用50%異丙醇-水溶液浸濕無塵布，擦拭弧形電極和噴霧擋蓋以及周圍。（切禁直接對著毛細管末端沖洗，壓力會增大，造成渦輪泵負載急劇增加，容易損壞渦輪泵）本文檔共24頁；當前第20頁；編輯于星期一\16點51分四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維護及故障排除3.打開氣鎮(zhèn)閥必須每周逆時針擰開氣鎮(zhèn)閥到底，維持20-30min，把油氣分離器內(nèi)多余的泵油放回泵內(nèi)，然后順時擰緊，關(guān)閉氣鎮(zhèn)閥。關(guān)機前務(wù)必確認氣鎮(zhèn)閥處于關(guān)閉狀態(tài)，否則泵油可能因此回流到質(zhì)譜的真空腔內(nèi)，損壞儀器本文檔共24頁；當前第21頁；編輯于星期一\16點51分四、故障排除1.檢查溶液化學性質(zhì)，確定樣品溶劑是合適的2.保證用新樣品，并且正確存儲樣品3.檢查霧化器條件4.清潔毛細管入口5.檢查毛細管有無損壞和污染1.重新校正質(zhì)量軸

2.確定調(diào)諧用離子，估計樣品離子的質(zhì)量范圍并顯示強穩(wěn)定的信號1.確保霧化氣壓設(shè)定足夠高以利液相色譜流動相氣化2.檢查霧化器中針頭的位置3停止溶劑流動，卸下霧化裝置，檢查霧化器末端是否損壞1.確保LC

在工作，在正確的瓶中有足夠溶劑2.檢查LC

故障提示3.檢查阻塞情況4.修理或更