氣體成分分析高效液相色譜法

8-1-01高效液相色譜8-1-02高效液相色譜的類型8-2-01液相色譜儀器8-2-02輸液泵8-2-03輸液泵8-2-04活塞型往復(fù)泵8-2-05脫氣裝置8-2-06梯度脫氣裝置目錄本文檔共78頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\2點31分8-2-07進(jìn)樣器8-2-08色譜柱8-2-09數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)與自動控制單元8-3-01液相色譜分離模式8-3-02分配色譜8-3-03凝膠色譜8-3-04離子色譜法8-4-01液相色譜檢測技術(shù)8-4-02紫外-可見光（UV-VIS）檢測器8-4-03示差折光檢測器8-4-04熒光檢測器本文檔共78頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\2點31分8-4-05電導(dǎo)檢測器8-4-06蒸發(fā)光散射檢測器8-5-01其它色譜方法8-5-02毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電色譜8-5-03親和色譜8-5-04激光色譜8-6-01液相色譜的應(yīng)用8-6-02液相色譜分離模式的選擇

本文檔共78頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\2點31分概述（一）高效液相色譜的發(fā)展

液相色譜法（liquidchromatography，LC）是最早（1903年）發(fā)明的，此之前紙色譜法、氣相色譜法和薄層色譜法是色譜分析法的主流。20世紀(jì)60年代后期，液相色譜得到了迅速的發(fā)展。特別是填料制備技術(shù)、檢測技術(shù)和高壓輸液泵性能的不斷改進(jìn)，使液相色譜分析實現(xiàn)了高效化和高速化。液相色譜法于1969年商品化。這種分離效率高、分析速度快的液相色譜就被稱為高效液相色譜法（HPLC），也稱高壓液相色譜法或高速液相色譜法。

本文檔共78頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\2點31分氣相色譜只適合分析較易揮發(fā)、且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的有機化合物，而HPLC則適合于分析那些用氣相色譜難以分析的物質(zhì)，例如揮發(fā)性差、極性強、具有生物活性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)?，F(xiàn)在，HPLC的應(yīng)用范圍已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過氣相色譜，位居色譜法之首。本文檔共78頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\2點31分高效色譜的類型HPLC分配色普法離子色譜法吸附色譜法凝膠色譜法本文檔共78頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\2點31分HPLC按分離機理的分類本文檔共78頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\2點31分液相色譜儀器高壓輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)系統(tǒng)

最基本組件線脫氣裝置、梯度洗脫裝置、自動進(jìn)樣系統(tǒng)、柱后反應(yīng)系統(tǒng)和全自動控制系統(tǒng)等配置組件本文檔共78頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\2點31分

輸液泵將流動相以穩(wěn)定的流速（或壓力）輸送至分析體系，在色譜柱之前通過進(jìn)樣器將樣品導(dǎo)入,流動相將樣品帶入色譜柱,在色譜柱中各組分因在固定相中的分配系數(shù)或吸附力大小的不同而被分離，并依次隨流動相流至檢測器，檢測到的信號送至數(shù)據(jù)系統(tǒng)記錄、處理或保存。圖8-1

液相色譜儀的工作過程本文檔共78頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\2點31分輸液泵

◆流量準(zhǔn)確可調(diào)。對于一般的分析工作而言，流動相的流速在0.5-2mL/min，輸液泵的最大流量一般為5-10mL/min。輸液泵的流量控制精度通常要求小于±0.5%。

◆耐高壓。通常要求泵的輸出壓力達(dá)到30-60MPa的高壓。

◆液流穩(wěn)定。輸液泵輸出的液流應(yīng)無脈動，或配套脈沖抑制器。

1.對輸液泵的基本要求本文檔共78頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\2點31分◆泵的死體積小。為了快速更換溶劑和適于梯度洗脫，泵的死體積通常要求小于0.5mL。泵的結(jié)構(gòu)材料應(yīng)耐化學(xué)腐蝕。本文檔共78頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\2點31分

▲輸出液恒定的因素恒壓泵恒流泵

▲工作方式氣動泵機械泵螺旋傳動注射泵單活塞往復(fù)泵雙活塞往復(fù)泵往復(fù)式隔膜泵2.輸液泵本文檔共78頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\2點31分本文檔共78頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\2點31分

●單活塞往復(fù)泵：在活塞柱的一端有一偏心輪，偏心輪連在電動機上，電動機帶動偏心輪轉(zhuǎn)動時，活塞柱則隨之左右移動。在活塞的另一端有上下兩個單向閥，各有1-2個藍(lán)寶石或陶瓷球，由其起閥門的作用。▲下面的單向閥與流動相連通，為活塞的溶液入口；▲上面的單向閥與色譜柱相連，為活塞的溶液出口?！钊蛲庖苿訒r，出口單向閥關(guān)閉，入口單向閥打開，溶液（流動相）抽入活塞缸?！钊蚶镆苿訒r，入口單向閥關(guān)閉，出口單向閥打開，流動相被壓出活塞缸，流向色譜柱。圖8-2(1)活塞型往復(fù)泵本文檔共78頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\2點31分

有一個精心設(shè)計的偏心凸輪，用同步電機或變速直流電機驅(qū)動偏心凸輪，偏心凸輪再推動兩活塞作往復(fù)運動。偏心凸輪短半徑端對應(yīng)的活塞向外伸，使該活塞的下單向閥打開吸入流動相，同時，半徑端所對應(yīng)的另一活塞被推入，使其上單向閥打開，并將流動相送至色譜柱。兩活塞交替伸縮，往復(fù)運動，這樣避免單活塞泵液流脈沖的問題。

不必使用消除脈沖的阻尼器，避免了阻尼器的壓力消耗，但缺點是設(shè)備成本較高，流量調(diào)節(jié)也比單活塞泵復(fù)雜。

圖8-3優(yōu)點：構(gòu)造：雙活塞往復(fù)泵本文檔共78頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\2點31分隔膜型往復(fù)泵也是一種恒流泵，一塊隔膜將泵缸分為兩部分，一部分充滿了油，另一部分充滿了流動相?；钊c油接觸，當(dāng)活塞往復(fù)運動時，隔膜受到油壓的作用，對流動相部分產(chǎn)生“吸引”或“推壓”，使流動相部分的單向閥吸液或排液，從而獲得穩(wěn)定的液流。通過調(diào)節(jié)泵活塞的沖程即可進(jìn)行流量調(diào)節(jié)。

隔膜泵的活塞不直接與流動相接觸，故不存在活塞密封墊磨損對流動相的污染。隔膜泵的死體積?。s0.1mL），因此，更換流動相后平衡快，有利于梯度洗脫。隔膜泵的缺點是結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，價格較貴，和單活塞機械往復(fù)泵一樣，也產(chǎn)生脈沖，也需要配置阻尼裝置來消除脈沖。圖8-4(2)隔膜型往復(fù)泵本文檔共78頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\2點31分

泡沫為什么要脫氣噪音峰基線起伏排氣費時熒光淬滅

pH變化。本文檔共78頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\2點31分脫氣方法超聲波振蕩惰性氣體鼓泡吹掃真空脫氣圖8-5本文檔共78頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\2點31分梯度洗脫裝置

在進(jìn)行多成分的復(fù)雜樣品的分離時，經(jīng)常會碰到前面的一些成分分離不完全，而后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰型較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并達(dá)到相互分離，往往要用到梯度洗脫技術(shù)。

1.為什么要進(jìn)行梯度洗脫？本文檔共78頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\2點31分

在液相色譜中流速（壓力）梯度和溫度梯度效果不大，而且還會帶來一些不利影響，因此，液相色譜中通常所說的梯度洗脫是指流動相梯度，即在分離過程中改變流動相的組成或濃度。

2.梯度洗脫操作本文檔共78頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\2點31分★線性梯度：在某一段時間內(nèi)連續(xù)而均勻增加流動相強度

★線性梯度：

在某一段時間內(nèi)連續(xù)而均勻增加流動相強度。

梯度洗脫時，流動相的輸送就是要將幾種組成的溶液混合后送到分離系統(tǒng)，因此，梯度洗脫裝置就是解決溶液的混合問題，其主要部件除高壓泵外，還有混合器和梯度程序控制器。根據(jù)溶液混合的方式可以將梯度洗脫分為高壓梯度和低壓梯度。本文檔共78頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\2點31分高壓梯度：一般只用于二元梯度，即用兩個高壓泵分別按設(shè)定的比例輸送A和B兩種溶液至混合器，混合器是在泵之后，即兩種溶液是在高壓狀態(tài)下進(jìn)行混合的。只要通過梯度程序控制器控制每臺泵的輸出，就能獲得任意形式的梯度曲線，而且精度很高，易于實現(xiàn)自動化控制。使用了兩臺高壓輸液泵，使儀器價格變得更昂貴，故障率也相對較高，而且只能實現(xiàn)二元梯度操作。圖8-6主要優(yōu)點：主要缺點：本文檔共78頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\2點31分低壓梯度：只需一個高壓泵，在泵前安裝了一個比例閥，混合就在比例閥中完成。比例閥在泵在常壓（低壓）下混合，混合往往容易形成氣泡，所以低壓梯度通常配置在線脫氣裝置。來自于四種溶液瓶的四根輸液管分別與真空脫氣裝置的四條流路相接，經(jīng)脫氣后的四種溶液進(jìn)入比例閥，混合后從一根輸出管進(jìn)入泵體。多元梯度泵的流路可以部分空置。圖8-7主要裝置本文檔共78頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\2點31分進(jìn)樣器

進(jìn)樣器是將樣品溶液準(zhǔn)確送入色譜柱的裝置，分手動和自動兩種方式。

密封性好，死體積小，重復(fù)性好，進(jìn)樣時引起色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動要很小?，F(xiàn)在采用的手動進(jìn)樣器幾乎都是耐高壓、重復(fù)性好和操作方便的六通閥進(jìn)樣器，其原理與氣相色譜中的相同。

特點本文檔共78頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\2點31分色譜柱構(gòu)成色譜填料色譜柱管色譜柱1.色譜柱的構(gòu)成圖8-8本文檔共78頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\2點31分

在硬臺面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺面墩10-20次。

又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。圖8-9

2.色譜柱的填充干法填充濕法填充本文檔共78頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\2點31分

常稱作載體或擔(dān)體，通常制備成數(shù)微米至數(shù)十微米粒徑的球形顆粒，它具有一定的剛性，能承受一定的壓力，對分離不起明顯的作用，只是作為功能基團(tuán)的載體。常用來作基質(zhì)的有硅膠和有機高分子聚合物微球。3.填料的結(jié)構(gòu)基質(zhì)本文檔共78頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\2點31分

是通過化學(xué)或物理的方法固定在基質(zhì)表面的、對樣品分子的保留起實質(zhì)作用的有機分子或功能團(tuán)。如圖8-10是硅膠基質(zhì)的冠醚大分子固定相的結(jié)構(gòu)示意圖，功能層冠醚分子吸附或鍵合在硅膠基質(zhì)的表面。功能層本文檔共78頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\2點31分微孔型（或凝膠型）大孔型（全多孔型）薄殼型表面多孔型圖8-113.填料的物理結(jié)構(gòu)本文檔共78頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\2點31分?jǐn)?shù)據(jù)處理系統(tǒng)與自動控制單元

又稱色譜工作站。它可對分析全過程（分析條件、儀器狀態(tài)、分析狀態(tài)）進(jìn)行在線顯示，自動采集、處理和儲存分析數(shù)據(jù)。一些配置了積分儀或記錄儀的老型號液相色譜儀在很多實驗室還在使用，但近年新購置的色譜儀，一般都帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，使用非常方便。

數(shù)據(jù)控制系統(tǒng)本文檔共78頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\2點31分將各部件與控制單元連接起來，在計算機上通過色譜軟件將指令傳給控制單元，對整個分析實現(xiàn)自動控制，從而使整個分析過程全自動化。也有的色譜儀沒有設(shè)計專門的控制單元，而是每個單元分別通過控制部件與計算機相連，通過計算機分別控制儀器的各部分。

自動控制單元本文檔共78頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期二\2點31分液相色譜分離模式吸附色譜原理固定相流動相基于被測組分在固定相表面具有吸附作用，且各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產(chǎn)生保留和實現(xiàn)分離。固定相通常是活性硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固體吸附劑。弱極性有機溶劑或非極性溶劑與極性溶劑的混合物本文檔共78頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期二\2點31分硅羥基呈微酸性，易與氫結(jié)合，是吸附的活性點.。流動相溶劑在吸附劑表面形成單分子或雙分子吸附層，當(dāng)樣品分子進(jìn)入色譜柱，樣品主要靠氫鍵結(jié)合力吸附到硅羥基上，與流動相分子競爭吸附點。樣品分子反復(fù)地被吸附，又反復(fù)地被流動相分子頂替解吸，隨著流動相的流動而在柱中向前移動。因為不同的樣品分子在固定相表面的吸附能力不同，因而吸附-解吸的速度不同，被洗脫的時間也就不同，使得各組分相互分離。

應(yīng)用分離過程吸附色譜在早期的HPLC中應(yīng)用得最多，現(xiàn)在，很多以前用吸附色譜分離的物質(zhì)被更方便和更有效的化學(xué)鍵合相反相分配色譜所代替。由于硅羥基活性點在硅膠表面常按一定幾何規(guī)律排列，因此吸附色譜用于結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離和族分離仍是最有效的方法。如農(nóng)藥異構(gòu)體分離、石油中烷、烯、芳烴的分離。

本文檔共78頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期二\2點31分（一）分配色譜原理基于樣品分子在流動相和固定相間的溶解度不同鍵合固定相以化學(xué)鍵合將功能分子結(jié)合到惰性載體上。極性鍵合固定相鍵合在載體表面的功能分子極性基團(tuán)的有機分子本文檔共78頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期二\2點31分非極性鍵合固定相鍵合在載體表面的功能分子是非極性有機分子。正相HPLC由極性固定相和非極性流動相所組成的HPLC體系。反相HPLC

非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系本文檔共78頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期二\2點31分（二）凝膠色譜（gelchromatography）以多孔性物質(zhì)作固定相，樣品分子受固定相孔徑大小的影響而達(dá)到分離的分離模式。樣品分子與固定相之間不存在相互作用力（吸附、分配和離子交換等）。比固定相孔徑大的溶質(zhì)分子不能進(jìn)入孔內(nèi)，迅速流出色譜柱，不能被分離。比固定相孔徑小的分子進(jìn)入孔內(nèi)而產(chǎn)生保留，溶質(zhì)分子體積越小，進(jìn)入固定相孔內(nèi)的機率越大，停留（保留）的時間也就越長圖8-12原理本文檔共78頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期二\2點31分◆固定相：化學(xué)惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝膠、親水凝膠、無機多孔材料?！袅鲃酉啵?/p>

在凝膠色譜中，流動相的作用不是為了控制分離，而是為了溶解樣品或減小流動相粘度?！裟z過濾色譜（gelfiltrationchromatography,GFC）：以水或緩沖溶液作流動相的凝膠色譜法。主要適合于水溶性高分子的分離?！裟z滲透色譜（gelpermeationchromatography,GPC）：

以有機溶劑作流動相的凝膠色譜法。主要適合于脂溶性高分子的分離。如甲苯和四氫呋喃能很好地溶解合成高分子，所以GPC主要用于合成高分子的分子量（分布）的測定。本文檔共78頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期二\2點31分（三）離子色譜（ionchromatography,IC）

IEC使用的是低交換容量的離子交換劑，這種交換劑的表面有離子交換基團(tuán)。帶負(fù)電荷的交換基團(tuán)（如磺酸基和羧酸基）可以用于陽離子的分離，帶正電荷的交換基團(tuán)可以用于陰離子的分離。圖8-131離子交換色譜法本文檔共78頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期二\2點31分

ICE的分離機理是以樹脂的Donnan排斥為基礎(chǔ)的分配過程。分離陰離子用強酸性高交換容量的陽離子交換樹脂，分離陽離子用強堿性高交換容量的陰離子交換樹脂。

圖8-142離子排斥色譜法本文檔共78頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期二\2點31分

離子對色譜(IPC)也稱離子相互作用色譜，是在流動相中加入適當(dāng)?shù)木哂信c被測離子相反電荷的離子，即"離子對試劑"，使之與被測離子形成中性的離子對化合物，此離子對化合物在反相色譜柱上被保留。保留的大小主要取決于離子對化合物的解離平衡常數(shù)和離子對試劑的濃度。離子對色譜也可采用正相色譜的模式，即可以用硅膠柱，但不如反相色譜效果好，多數(shù)情況下采用反相色譜模式，所以也常稱反相離子對色譜。3離子對色譜法本文檔共78頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期二\2點31分紫外-可見光二極管陣列熒光檢測器電導(dǎo)檢測器示差折光蒸發(fā)光散射檢測器液相色譜檢測技術(shù)本文檔共78頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期二\2點31分本文檔共78頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期二\2點31分

原理：基于Lambert-Beer定律，即被測組分對紫外光或可見光具有吸收，且吸收強度與組分濃度成正比。

很多有機分子都具紫外或可見光吸收基團(tuán)，有較強的紫外或可見光吸收能力，因此UV-VIS檢測器既有較高的靈敏度，也有很廣泛的應(yīng)用范圍。由于其對環(huán)境溫度、流速、流動相組成等的變化不是很敏感，所以還能用于梯度淋洗。

紫外-可見光檢測器本文檔共78頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期二\2點31分用UV-VIS檢測時，為了得到高的靈敏度，常選擇被測物質(zhì)能產(chǎn)生最大吸收的波長作檢測波長，但為了選擇性或其它目的也可適當(dāng)犧牲靈敏度而選擇吸收稍弱的波長，另外，應(yīng)盡可能選擇在檢測波長下沒有背景吸收的流動相本文檔共78頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期二\2點31分

以光電二極管陣列（或CCD陣列，硅靶攝像管等）作為檢測元件的UV-VIS檢測器。它可構(gòu)成多通道并行工作，同時檢測由光柵分光，再入射到陣列式接受器上的全部波長的信號，然后，對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到的是時間、光強度和波長的三維譜圖。二極管陣列UV-VIS檢測器是先讓所有波長的光都通過流動池，然后通過一系列分光技術(shù)，使所有波長的光在接受器上被檢測。圖8-15二極管陣列檢測器本文檔共78頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期二\2點31分

◆原理：基于樣品組分的折射率與流動相溶劑折射率有差異，當(dāng)組分洗脫出來時，會引起流動相折射率的變化，這種變化與樣品組分的濃度成正比。

示差折光檢測法也稱折射指數(shù)檢測法。對于那些無紫外吸收的有機物（如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴）是比較適合的。在凝膠色譜中是必備檢測器。RI檢測器根據(jù)其設(shè)計原理可分為反射型（根據(jù)Fresnel定律）、折射型（根據(jù)Snell定律）和干涉型三種類型。

示差折光檢測器本文檔共78頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期二\2點31分

◆原理：許多有機化合物，特別是芳香族化合物、生化物質(zhì)，如有機胺、維生素、激素、酶等，被一定強度和波長的紫外光照射后，發(fā)射出較激發(fā)光波長要長的熒光。熒光強度與激發(fā)光強度、量子效率和樣品濃度成正比。有的有機化合物雖然本身不產(chǎn)生熒光，但可以與發(fā)熒光物質(zhì)反應(yīng)衍生化后檢測。熒光檢測器◆特點：有非常高的靈敏度和良好的選擇性，靈敏度要比紫外檢測法高2-3個數(shù)量級。而且所需樣品量很小，特別適合于藥物和生物化學(xué)樣品的分析。本文檔共78頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期二\2點31分

◆原理：基于離子性物質(zhì)的溶液具有導(dǎo)電性，其電導(dǎo)率與離子的性質(zhì)和濃度相關(guān)。電導(dǎo)檢測器是離子色譜中必備的檢測器。

◆電導(dǎo)檢測器的構(gòu)成：由電導(dǎo)池、測量電導(dǎo)率所需的電子線路、變換靈敏度的裝置和數(shù)字顯示儀等幾部分組成，電導(dǎo)池是其核心。

◆電導(dǎo)池的結(jié)構(gòu)：檢測體積可達(dá)到微升甚至納升級。其基本結(jié)構(gòu)是在柱流出液中放置兩根電極，然后通過適當(dāng)?shù)碾娮泳€路測量溶液的電導(dǎo)。電導(dǎo)檢測器本文檔共78頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期二\2點31分◆電導(dǎo)檢測器工作原理：電導(dǎo)池工作時，電極間及電極附近溶液中所發(fā)生的電化學(xué)過程可以用圖8-18表示。當(dāng)向電導(dǎo)池的兩個電極施加電壓時，溶液中的陰離子向陽極移動，陽離子向陰極移動。在電解質(zhì)溶液中的離子數(shù)目和離子的移動速率決定溶液的電阻大小，離子的遷移率或單位電場中離子的速率取決于離子的電荷及其大小、介質(zhì)類型、溶液溫度和離子濃度。離子的遷移速率取決于施加電壓的大小。所施加的電壓既可以是直流電壓，也可以是正弦波或方波電壓。當(dāng)施加的有效電位確定后，即可測量出電路中的電流值，即能測出電導(dǎo)值。圖8-18本文檔共78頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期二\2點31分

◆構(gòu)成：ELSD是基于溶質(zhì)的光散射性質(zhì)的檢測器。由霧化器、加熱漂移管（溶劑蒸發(fā)室）、激光光源和光檢測器（光電轉(zhuǎn)換器）等部件構(gòu)成。◆流程：色譜柱流出液導(dǎo)入霧化器，被載氣（壓縮空氣或氮氣）霧化成微細(xì)液滴，液滴通過加熱漂移管時，流動相中的溶劑被蒸發(fā)掉，只留下溶質(zhì)，激光束照在溶質(zhì)顆粒上產(chǎn)生光散射，光收集器收集散射光并通過光電倍增管轉(zhuǎn)變成電信號。蒸發(fā)光散射檢測器本文檔共78頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期二\2點31分◆適用范圍：適合無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測。其靈敏度與載氣流速、汽化室溫度和激光光源強度等參數(shù)有關(guān)。與示差折光檢測器相比，它的基線漂移不受溫度影響，信噪比高，也可用于梯度洗脫。圖8-19

本文檔共78頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期二\2點31分其它色譜方法

超臨界流體：指高于臨界壓力和臨界溫度時的一種物質(zhì)狀態(tài)，它既不是氣體，也不是液體，但它兼具氣體的低粘度和液體的高密度以及介于氣體和液體之間的較高擴散系數(shù)等特征。

SFC：以超臨界流體作流動相，以固體吸附劑（如硅膠）或鍵合在載體（或毛細(xì)管壁）上的有機高分子聚合物作固定相的色譜方法。

1.超臨界流體色譜本文檔共78頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期二\2點31分▲常用流動相：

超臨界狀態(tài)下的、氧化亞氮、乙烷、三氟甲烷等。最常用，因為它的臨界溫度低（31℃）、臨界壓力適中（7.29MPa）、無毒、便宜，但其缺點是極性太低，對一些極性化合物的溶解能力較差，所以，通常要用另一臺輸液泵往流動相中添加1-5％的甲醇等極性有機改性劑。

本文檔共78頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期二\2點31分▲色譜柱：液相色譜的填充柱和氣相色譜的毛細(xì)管柱都可以使用，但由于超臨界流體的強溶解能力，所使用的毛細(xì)管填充柱的固定相必須交聯(lián)▲應(yīng)用：從理論上講，SFC既可以象液相色譜一樣分析高沸點和難揮發(fā)樣品，也可象氣相色譜一樣分析揮發(fā)性成分。不過，超臨界流體色譜更重要的應(yīng)用是用來作分離和制備，即超臨界流體萃取。本文檔共78頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期二\2點31分

毛細(xì)管電泳（capillaryelectrophoresis,CE）：以高壓電場為驅(qū)動力，以電解質(zhì)為電泳介質(zhì)，以毛細(xì)管為分離通道，樣品組分依據(jù)淌度和分配行為的差異而實現(xiàn)分離的一種色譜方法。它有多種分離模式，可以采用液相色譜中的各種檢測方法。CE既可以分離帶電荷的溶質(zhì)，也可以通過毛細(xì)管膠束電動色譜等分離模式分析中性溶質(zhì)，CE的高分離效率、高檢測靈敏度，樣品用量極少等特點使它在生物醫(yī)藥樣品的分析中顯示出突出的優(yōu)越性。

2.毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電色譜本文檔共78頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期二\2點31分

毛細(xì)管電色譜（capillaryelectrochromatography,CEC）：以電滲流（或電滲流結(jié)合高壓輸液泵）為流動相驅(qū)動力的微柱色譜法。CEC是液相色譜與毛細(xì)管電泳相結(jié)合的產(chǎn)物，它的分離機理包含有電泳遷移和色譜固定相的保留機理，一般而言，溶質(zhì)與固定相間的相互作用對分離起主導(dǎo)作用。所用色譜柱為填充了HPLC填料的填充型毛細(xì)管柱和管內(nèi)壁涂漬了固定相功能分子的開管毛細(xì)管柱。CEC還處在發(fā)展階段，目前主要應(yīng)用在藥物、手性化合物和多環(huán)芳烴的分離分析。另外CEC與質(zhì)譜聯(lián)用既可解決LC/MS的分離效率不高的問題，又可克服CE/MS中質(zhì)量流量太小的缺陷。

本文檔共78頁；當(dāng)前第56頁；編輯于星期二\2點31分3親和色譜定義：利用蛋白質(zhì)或生物大分子等樣品與固定相上生物活性配位體之間的特異親和力進(jìn)行分離的液相色譜方法。固定相：將具有生物活性的配位體以共價鍵結(jié)合到不溶性固體基質(zhì)上制得。生物活性配位體：常用的有酶（如底物及其類似物）、輔酶（如類固醇）、抗體（植物激素）、激素（如糖和多糖）、抗生素（核苷酸）等。

本文檔共78頁；當(dāng)前第57頁；編輯于星期二\2點31分基質(zhì)：通常為凝膠，許多無機和有機聚合物都可形成凝膠，如瓊脂糖衍生物、多孔玻璃。

分離過程：在分離過程中涉及疏水相互作用、靜電力、范德華力和立體相互作用。在鍵合了某類配體的親和色譜柱上加入含生物活性大分子的樣品，只有柱中配位體有明顯親和性的生物大分子才會被吸附，這些生物分子只有在改變流動相的組成時才會被洗脫。

應(yīng)用：親和色譜主要用于蛋白質(zhì)和生物活性物質(zhì)的分離與制備。本文檔共78頁；當(dāng)前第58頁；編輯于星期二\2點31分

以激光的輻射壓力為驅(qū)動力，將待分離組分（或物質(zhì)顆粒）按幾何尺寸大小予以分離的一種色譜分離技術(shù)。

激光色譜是1995年剛剛提出的新的色譜方法，盡管尚無商品儀器