ImageLab中文操作手冊

ImageLab ?中文操作手冊FastandReliableImageLab 全自動圖像獵取和分析軟件用于MolecularImagerChemiDoc?XRS+ 、MolecularImagerGelDoc?XR+ 和CriterionStainFree TM 成像系統(tǒng)，可應(yīng)用于凝膠電泳和轉(zhuǎn)印膜的數(shù)字成像和分析，而自動化的工作流程能加速圖像獵取步驟及參數(shù)優(yōu)化，并針對調(diào)整好的凝膠或轉(zhuǎn)印膜影像進(jìn)展系統(tǒng)性分析，進(jìn)而得到所需的分析數(shù)據(jù)結(jié)果。一、軟件操作界面主窗口工具列啟動精靈分析工具列程序桌面狀態(tài)列主窗口工具列檔案治理 分析數(shù)據(jù)ResultsData顯示工具列圖放縮全亮改轉(zhuǎn)圖像大小窗度變換像顯口明圖3D信示 大 暗 像 成 息設(shè) 小 度 色 模定 轉(zhuǎn) 彩 式換 像分析工具列〔1〕圖像工具〔ImageTools〕〔2〕泳道及條帶工具〔LaneandBandTools 〕〔3〕分子量工具〔MWMolecularWeight〕〔4〕自動定量工具〔QuantityTools〕〔5〕注釋工具〔AnnotationTools〕〔6〕手動定量工具〔VolumeTools〕二、使用ImageLab 軟件進(jìn)展化學(xué)發(fā)光圖像獵取流程建立圖像獵取程序：在凝膠成像〔GelImaging〕對話框中選擇Chemi〔化學(xué)發(fā)光〕應(yīng)用程序在成像區(qū)域〔ImagingArea 〕對話框中的下拉式選單中選擇適宜的樣品大小〔非必需，可之后通過PositionGel 選擇〕選擇成像曝光〔ImageExposure 〕方法，可以人為評估曝光時間并以手動設(shè)定〔 ManualExposure 〕，或是使用信號累積模式〔SignalAccumulationMode ，SAM〕來進(jìn)展操作。在建立一個化學(xué)發(fā)光的程序時最難的任務(wù)就是圖像曝光確實(shí)定，由于您想獲得一個充分利用了相機(jī)大的動態(tài)范圍的圖像。過短的圖像曝光時間可能使高于膜背景的微弱信號不能被識別；過長的圖像曝光時間能夠使得某些條帶飽和〔也就是說，超出了相機(jī)準(zhǔn)確報告信號的力氣〕。假設(shè)這是您第一次用 ChemiDoc XRS+分析化學(xué)發(fā)光樣品，您需要在使用手控或信號累積模式〔SAM〕之前打算一個適宜的成像時間框架。獲得這個信息的最好的方式是取得一個相對短的手工曝光并利用ImageLab 里的工具估量最適的曝光時間。手動曝光選擇手動設(shè)定曝光時間〔Manuallysetexposuretime〕10秒。選擇Highlightsaturatedpixels 。把膠置于透射箱的中心位置。在程序窗口中點(diǎn)擊 按鈕。觀看顯示器中樣品的實(shí)時圖像，翻開照膠系統(tǒng)的門并移動樣品直到位于視野的中心區(qū)域?？衫谜障鄼C(jī)的變焦滑板小。

調(diào)整成像區(qū)域的大選擇 按鈕獲得你的第一個圖像。假設(shè)所需的圖像消滅在計算機(jī)的顯示器上，確認(rèn)圖像中是否包含紅色的飽和區(qū)域。假設(shè)有飽和區(qū)域存在，請重以較短的曝光時間來獵取圖像。假設(shè)無飽和區(qū)域存在，則可移動鼠標(biāo)置于最暗的條帶之上，在較低的右下角ImageLab窗

1994，照相機(jī)能記錄的最大值的 32分之一〔最大值為65,535〕。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相機(jī)的最大動態(tài)范圍四周成像你的樣品。假設(shè)你只需針對單一圖像的成像時間進(jìn)展評估，可直接在手動曝光區(qū)域中輸300。信號累積模式〔Signal Accumulation Mode，SAM〕假設(shè)預(yù)估方法缺乏以準(zhǔn)確滿足您的目的，請選擇SAM按鈕，然后按Setup按鈕。一個的對話框會跳出來，其包含有可輸入細(xì)分的成像時間的領(lǐng)域。在這個例子中，我們已經(jīng)輸入了小于和大于我們原始的 300秒曝光估量時間，由于我們有理由信任準(zhǔn)確的成像時間將會在這些時間之中。我們總共想要

5個成像，推想其中一個將會與最正確成像極為接近。一個您的 SAM設(shè)定的圖像顯示消滅在對話框里。而SAM設(shè)定的影像顯示對話窗口，在您選擇 按鈕后再點(diǎn)選 窗口會顯示相關(guān)進(jìn)度圖標(biāo)來說明整體圖像獵取的時間。在 250秒獵取第一個圖像，同時一個小的縮略圖會消滅在窗口的下方，以此類推整個過程將持續(xù)到獵取全部的圖像。就像前面做過的那樣，通過移動鼠標(biāo)在圖像上，您能判定強(qiáng)度值。您也可以通過使用位于程序窗口左邊的圖像轉(zhuǎn)換窗口〔 ImageTransform 〕中的調(diào)整劃片轉(zhuǎn)變圖像的表觀。在SAM程序中的任何地方您都能通過點(diǎn)擊縮略圖查看圖像。假設(shè)確定調(diào)整到符合您要求的圖像時，點(diǎn)擊 按鈕舍棄其它不適合的圖像來完成獵取圖像的程序。也可在 SAM獵取圖像的過程中或之后來保存需要的全部圖像，直接點(diǎn)選右鍵單點(diǎn)縮圖窗口內(nèi)的圖像即可進(jìn)展存盤保存下來。在打算獵取圖像的數(shù)量時，記住增加 SAM圖像會導(dǎo)致背景信號的平均。當(dāng)較多的圖像被獲得時，在背景強(qiáng)度水平四周的弱的信號將會變得難以識別。假設(shè)區(qū)分最弱的信號很重要，我們推舉在適宜的時間下獲得單一的成像。三、建立全自動圖像獵取及分析程序 〔Creating Protocols 〕啟動分析精靈窗口 --STEP1.GELIMAGING〔1〕依據(jù)應(yīng)用〔NucleicAcid/Protein/Blots 〔2〕選擇成像區(qū)域〔ChoosetheImagingArea 〕〔3〕選擇成像曝光時間〔ChooseImage ExposureTime 〕

Chooseanapplication 〕〔4〕選擇顯示設(shè)定〔ChooseDisplayOptions,HighlightsaturatedpixelsandImageColor〕圖像自動分析〔Analyze Image〕--STEP2.DETECTLANESANDBANDS設(shè)定DETECTLANESANDBANDS的參數(shù)〔LowBandDetectionSensitivity 〔Lowsensitivity=25 〕、HighBandDetectionSensitivity 〔Highsensitivity=75 設(shè)定靈敏度。分子量分析〔Analyze WEIGHT

Weight 〕--STEP3.ANALYZEMOLECULAR設(shè)定AnalyzeMolecularWeightSettings 的分子量標(biāo)準(zhǔn)品〔MolecularWeightStandard 〕Bio-Rad的各類標(biāo)準(zhǔn)品〔包括核酸、蛋白〕均已預(yù)存。固然，您也可以依據(jù)您的試驗(yàn)設(shè)置您自定義的分子量標(biāo)準(zhǔn)品。并同時設(shè)定分子量標(biāo)準(zhǔn)品的泳道及回歸方式。報告輸出設(shè)定〔Report Settings 〕--STEP4.SPECIFYCONTENT OFREPORTS結(jié)果〔Results Overview〕及報告〔Report 〕〔1〕數(shù)據(jù)顯示信息〔Displaying Data〕〔2〕分析表格設(shè)定〔AnalysisTableOptions 〕〔3〕Lane 信息〔LaneProfile 〕〔4〕標(biāo)準(zhǔn)曲線〔StandardCurve 〕四、建立圖像分析程序 〔Creating ImagesAnalyzing Protocols 〕圖像分析〔Analyzing Images 〕〔1〕AnalysisToolBox〔A〕自動分析〔AutoAnalysis 〕點(diǎn)選 進(jìn)入DetectionSettings 窗口設(shè)定Detectlanesandbands 的參數(shù)〔LowBandDetection Sensitivity〔Lowsensitivity=25 〕、HighBand DetectionSensitivity 〔Highsensitivity=75 〕或自行設(shè)定靈敏度〕，接著再設(shè)定Molecular WeightAnalysisSettings 的MolecularWeightStandard 、StandardLanes 及RegressionMethod 參數(shù)。圖像工具〔Image Tools〕可進(jìn)展水平或垂直翻轉(zhuǎn)、左右旋轉(zhuǎn)90℃或自由旋轉(zhuǎn)〔Rotate〕、裁剪〔Crop〕、反轉(zhuǎn)〔InvertData 〕及迭合〔Merge〕。Lanes 及Bands 工具〔Lane andBand Tools〕LaneTab使用自動〔Automatic〕或手動〔Manual〕Lane功能針對全部的Lanes〔AllLanes〕進(jìn)展大小調(diào)整〔Resize 〕、〔Adjust〕及刪除〔Delete〕等參數(shù)調(diào)整。針對單一Lane〔SingleLane 進(jìn)展增加〔Add〕、彎曲〔Bend〕、移動〔Move〕、寬度〔Width〕及刪除〔Delete〕等參數(shù)調(diào)整。利用LaneBackgroundSubtraction 進(jìn)展背景值的扣抵，并可點(diǎn)選〔ApplytoselectedLane 〕Lane進(jìn)展調(diào)整。-可以藉由RollingDisk參數(shù)設(shè)定〔1-99mm〕來去除背景值?！?〕BandsTab通過DetectBands 進(jìn)展自動搜尋Bands 功能或手動進(jìn)展增加〔Add〕、刪除〔Delete〕及〔Adjust〕等參數(shù)調(diào)整。分子量分析工具〔 Molecular Weight Analysis Tools〕此工具可由的標(biāo)準(zhǔn)品測算相對的分子量或堿基對〔定量工具〔Quantity Tools〕〔1〕相對定量〔RelativeQuantityTab 〕

basepairs 〕。從圖像中選擇的標(biāo)準(zhǔn)品〔referenceband 〕及其標(biāo)準(zhǔn)品濃度〔以綠色R表示〕，其分析結(jié)果可從Analysistable 觀看。確定定量〔AbsoluteQuantityTab 〕通過選擇標(biāo)準(zhǔn)品濃度的bands 〔至少兩個以上,以R表示〕，并設(shè)定適宜的回歸參數(shù)計算所得之標(biāo)準(zhǔn)曲線來推算目標(biāo)bands 確實(shí)定濃度〔回歸參數(shù)設(shè)定如Linear(較常用)、Point-to-Point 或Cubicspline〕。RegressionMinimumnumberMinimumnumberwithMethodofstandardForceThroughOptionLinearbands21Point-to-Point21CubicSpline54注釋工具〔Annotation Tools〕可以通過AddAnnotations 工具增加文字批注及箭頭批注，并可調(diào)整批注相對位置〔Alignment〕、文字屬性、顏色及旋轉(zhuǎn)方向等參數(shù)定量工具〔Volume Tools〕按下 選擇較適合的Ban