飼料脫霉劑霉菌毒素吸附率測(cè)定-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

飼料脫霉劑霉菌毒素吸附率測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了飼料脫霉劑霉菌毒素吸附率測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的術(shù)語(yǔ)和定義、原理、試劑與材料、儀器設(shè)備、樣品、試驗(yàn)步驟等技術(shù)操作。本文件適用于各種飼料脫霉劑黃曲霉毒素（AFB）B1、B2、G1和G2，玉米赤霉烯酮（ZEA）、伏馬毒素和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）吸附率的測(cè)定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14699.1飼料采樣NY/T3803飼料中37種霉菌毒素的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法術(shù)語(yǔ)和定義飼料脫霉劑吸附率：在模擬胃腸道pH=3的緩沖溶液飼料脫霉劑與已知濃度毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)1小時(shí)后，吸附前后標(biāo)準(zhǔn)溶液中毒素濃度的差值與吸附前毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度之比。原理在模擬胃腸道pH=3的緩沖溶液中飼料脫霉劑與毒素標(biāo)準(zhǔn)液反應(yīng)1小時(shí)后，離心取上清測(cè)定其中毒素的濃度，計(jì)算吸附前后標(biāo)準(zhǔn)溶液毒素濃度之差與吸附前標(biāo)準(zhǔn)溶液毒素濃度的比值。試劑與材料所用試劑除另有規(guī)定，均使用分析純?cè)噭?。水符合GB/T6682中一級(jí)水的規(guī)定。5.1氯化鉀：分析純；5.2磷酸二氫鉀：分析純；5.3十二水磷酸氫鈉：分析純；5.4氯化鈉：分析純；5.5鹽酸溶液（0.2mol/L）：準(zhǔn)確移取18mL鹽酸于1L容量瓶中，加水定容至刻度，混勻后備用；5.6磷酸緩沖液（pH=3）：準(zhǔn)確稱取0.2g氯化鉀（5.1），0.2g磷酸二氫鉀（5.2），2.92g十二水磷酸氫二鈉（5..3），8g氯化鈉（5.4），加950mL水溶解，使用2N鹽酸（5.5）調(diào)整至pH=3，最后用純水定容到1000mL；5.7吸附操作溶液：分別準(zhǔn)確稱取適量的AB組或CD組混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（5.8），AB組用磷酸緩沖液（5.7）配置成AB混合吸附操作液，其中吸附操作液濃度中A組毒素濃度為30ng/mL，B組毒素濃度為100ng/mL；CD組用甲酸銨溶液（5.8）配制成CD混合吸附操作液，其中吸附操作液濃度中C組毒素濃度為150ng/mL，D組毒素濃度為300ng/mL；5.8其余同NY/T3803飼料中37種霉菌毒素的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。儀器設(shè)備同NY/T3803飼料中37種霉菌毒素的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。試驗(yàn)步驟取樣按GB/T14699.1的規(guī)定均勻取樣后，放入烘箱37℃烘干24小時(shí)，干燥器中冷卻后，密封袋封裝，置于陰涼干燥處。吸附平行做2份試驗(yàn)。稱取1g（精確至0.0001g）試樣于10ml的離心管中，準(zhǔn)確加入5ml吸附操作溶液（5.7），渦旋混勻，置于恒溫?fù)u床中37℃，200rpm條件下，反應(yīng)60min；于8000rpm/min離心5min，立即移取上清液，于60℃真空濃縮或氮吹至近干，備用。測(cè)定同NY/T3803飼料中37種霉菌毒素的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。結(jié)果計(jì)算飼料脫霉劑毒素吸附率按下式計(jì)算：X=式中：X飼料脫霉劑毒素吸附率%；C標(biāo)準(zhǔn)溶液中毒素濃度（ng/mL）；C0重復(fù)性在重復(fù)條件下，獲得的2次獨(dú)立測(cè)XX果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算數(shù)平均值的10%。附錄A（規(guī)范性附錄）本標(biāo)準(zhǔn)所測(cè)霉菌毒素分組、中文名稱、英文名稱、分子式、分子量、標(biāo)準(zhǔn)品純度與檢出限見(jiàn)表A.1分組序號(hào)中文名稱英文名稱分子式分子量CAS號(hào)純度%檢出限μg/kgA1黃曲霉毒素B1AflatoxinB1C17H12O6312.31162-65-89922黃曲霉毒素B2AflatoxinB2C17H14O6314.37720-81-7993黃曲霉毒素G1AflatoxinG1C17H12O7328.31165-39-5994黃曲霉毒素G2AflatoxinG2C17H14O7330.37241-98-799B5玉米赤霉烯酮ZearalenoneC18H22O5318.417924-92-499206赭曲霉毒素AOchratoxinAC20H18ClNO6403.8303-47-9997赭曲霉毒素BOchratoxinBC20H19NO6369.44825-86-9988T-2毒素T-2toxinC24H34O9466.521259-20-199C9脫氧雪腐鐮刀菌烯醇DeoxynivalenolC15H20O6296.351481-10-899401015-乙?；撗跹└牭毒┐?5-AcetylDeoxynivalenolC17H22O7338.488337-96-699113-乙?；撗跹└牭毒┐?-AcetylDeoxynivalenolC17H22O7338.450722-38-89912伏馬霉素B1FumonisinB1C34H59NO15721.8116355-83-09913伏馬霉素B2FumonisinB2C34H59NO14705.8116355-84-19914伏馬霉素B3FumonisinB3C34H59NO14705.8136379-59-495

附錄B（資料性附錄）霉菌毒素掃描時(shí)間、保留時(shí)間、電離方式、監(jiān)測(cè)離子對(duì)、錐孔電壓和碰撞能量信息序號(hào)中文名稱掃描時(shí)間min備留時(shí)間min電離方式監(jiān)測(cè)離子對(duì)m/z錐孔電壓V碰撞能量eV1黃曲霉毒素B18.0～8.68.25[M+H]+313.1>284a；313.1>241.04626；402黃曲霉毒素B27.6～8.47.92[M+H]+312.2>287.1a；315.2>259.04630；323黃曲霉毒素G17.4～8.27.73[M+H]+329.1>242.9a；329.1>200.04228；424黃曲霉毒素G27.1～7.87.89[M+H]+331.1>189.0a；331.1>245.04843；345玉米赤霉烯酮10.6～11.210.83[M+H]+317.2>131.0a；317.2>175.14835；306脫氧雪腐鐮刀菌烯醇4.0～4.74.38[M+H]+296.9>249.1a；296.9>203.01510；15715-乙?；撗跹└牭毒┐?.4～7.16.75[M+H]+338.6>137.0a；338.6>321.02522；1583-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇6.4～7.16.75[M+H]+339.0>231.0a；339.0>203.12816；229伏馬霉素B18.69[M+H]+7