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文檔簡介

第26 離心：2000g×5min，500μl10%FBS（inPBS）交聯(lián)：每1×107細胞中加9.5ml1%多聚，室溫交聯(lián)10min1.425ml冰的1M甘氨酸冰上5min。2000g×5min4℃離心，棄上清細胞裂解：5mllysisbuffer10min2000g×5min4℃離心，棄上清。此步所得細胞核可凍存在-80℃數(shù)月酶切：0.5ml1.2buffer重懸沉淀；再加7.5μl20%SDS，37℃，900rpm振蕩1h50μl20%TritonX-10037℃，900rpm1h5μl樣品UND400U37℃，900rpm振蕩孵育過夜，取5μl樣品記為D。40μl20%SDS，65℃，900rpm20-25min6.125ml1.15ligationbuffer，加375μl20%TritonX-100；37℃輕柔振蕩孵育1h；100UT4DNA連接酶，16℃4h1h。解交聯(lián)：加300μgPK，65℃孵育過夜。10%FBS(in0.25%37%formaldehyde(vol/vol;476291M Lysisbuffer(10mMTris-HCl,pH7.5;10mMNaCl;5mMMgCl2;0.1MmEGTA;1×completeproteaseinhibitor;11836145001Roche)20%20%TritonX-High-concentrationrestrictionenzyme(40T4DNAligase,highconcentration(20 10×ligationbuffer(660mMTris-HCl,pH7.5;50mMDTT;50mMMgCl2;10mMRibonucleaseA(RNaseA),1ProteinaseK(PK),10PKbuffer(5mMEDTA,pH8.0;10mMTris-HCl,pH8.0;0.5%DNA300μgRNaseA，37℃混勻，-80℃沉淀1h；10ml70%2200g檢測酶切效率：UNDD500μl1×PKbuffer20

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