抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)

縮寫：ATCC，美國模式菌種保藏所；CAMHB，調(diào)節(jié)過陽離子的Mueller-Hinton肉湯；FDA，美國食品和藥品管理局；MHA，Mueller-Hinton瓊脂；MIC，最低抑菌濃度；MRS，耐甲氧西林葡萄球菌；MRSA，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌；MOD-SA，修飾的金黃色葡萄球菌；PBP，青霉素結(jié)合蛋白；PCR，聚合酶鏈反應(yīng)；QC，質(zhì)量控制；VRSA，耐萬古霉素金黃色葡萄球菌；vanA，萬古霉素耐藥基因。BHI，腦心浸液；AST，抗菌藥物敏感性試驗；ATCC，美國模式菌種保藏所；BSC，生物安全柜；BSL-2，二級生物安全水平；BSL-3，三級生物安全水平；CAMHB，調(diào)節(jié)過陽離子的MuellerHinton肉湯；CDC，疾病預(yù)防控制中心；CFU，菌落形成單位；LHB，溶解馬血；MHA，Mueller-Hinton瓊脂；MIC，最低抑菌濃度；QC，質(zhì)量控制。抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)銅綠假單胞菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基:紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物:生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育:352°C；空氣環(huán)境

紙片擴(kuò)散法：16-18h

稀釋法：16-20h(1)對于紙片擴(kuò)散法，直徑150mm平板最大放置12只，直徑100mm平板放置5只進(jìn)行試驗(見M02第9.2節(jié))。測量抑菌圈直徑（用肉眼判讀），包括紙片直徑。保

持平板在反射光照明的、非反射黑的背景上方幾英寸，肉眼觀察無明顯生長的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。在抑菌圈邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略

不計。

(2)用紙片擴(kuò)散法和稀釋法能可靠地測定分離于囊性纖維化病人的銅綠假單胞菌的敏感性，但在作為敏感結(jié)果報告前，應(yīng)將孵育時間延長至24小時。

(3)所有抗菌藥物在延長治療期間可致銅綠假單胞菌發(fā)生耐藥。因此，初次分離的敏感菌株在開始治療后3~4不動桿菌屬抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物：生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境；20-24h，所有方法由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌圈內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長；因此，在測量抑菌圈直徑時可忽視輕微生長

（20%或較少的菌苔）而測量較明顯抑制的邊緣。（2）對四環(huán)素敏感的菌株被認(rèn)為對多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。然而，某些對四環(huán)素中介或耐藥的菌株可以對多西環(huán)素或米諾環(huán)素或二者敏感。洋蔥伯克霍爾德菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物：生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境；所有方法，20-24h嗜麥芽窄食單胞菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB

瓊脂稀釋法：MHA

接種物：生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境，所有方法，20-24h由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌圈內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長；因此，在測量抑菌圈直徑時可忽視輕微生長（20%或較少的菌苔）而測量較明顯抑制的邊緣。氯霉素：分離于泌尿道菌株不常規(guī)報告。其他非-腸桿菌科細(xì)菌MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)(g/mL)葡萄球菌屬抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB；CAMHB+2%NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈

夫西林；CAMHB補充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素

瓊脂稀釋法：MHA；MHA+2%NaCl用于苯唑西林、甲氧西林和奈夫西

林；瓊脂稀釋測試達(dá)托霉素還未被批準(zhǔn)

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：352°C；空氣環(huán)境

紙片擴(kuò)散法：16-18h；24h(凝固酶陰性葡萄球菌與頭孢西丁)

稀釋法：16-20h

所有方法：苯唑西林、甲氧西林、奈夫西林和萬古霉素需24h

試驗溫度超過35°C可能檢測不出MRS(1)對于紙片擴(kuò)散法，直徑150mm平板最大放置12只紙片，直徑100mm平板放置5只進(jìn)行試驗(見M02第9.2節(jié))。測量抑菌環(huán)直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。保持平板在反射光照明的、非反射黑的背景上方幾英寸，除外利奈唑胺、苯唑西林、萬古霉素應(yīng)用透射光閱讀（平板正對光源）。肉眼觀察無明顯生長的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。在抑菌圈邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略不計。由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌環(huán)內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長；因此，在測量抑菌環(huán)直徑時可忽視輕微生長（20%或較少的菌苔）而測量較明顯抑制的邊緣。在抑菌環(huán)內(nèi)任何可辨別的菌落生長提示苯唑西林、利奈唑胺或萬古霉素耐藥。

(2)過去，將對青霉素酶穩(wěn)定的青霉素類(見術(shù)語表I)耐藥稱為“耐甲氧西林”或“耐苯唑西林”，MRSAs是指表達(dá)mecA或具有另一種甲氧西林耐藥機(jī)制，如青霉素結(jié)合蛋白與苯唑西林的親和力改變(修飾的金黃色葡萄球菌[MOD-SA]菌株)的金黃色葡萄球菌。

(3)對于耐苯唑西林金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌(MRS)，被認(rèn)為對其它-內(nèi)酰胺類藥物，即，青霉素類、-內(nèi)酰胺/-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物，頭孢類(新的“具有抗-MRSA活性的頭孢菌素”例外)和碳青霉烯類等是耐藥。這是因為大多數(shù)文獻(xiàn)報道了MRSa.檢測金黃色葡萄球菌是否產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，青霉素紙片擴(kuò)散法抑菌圈-邊緣試驗比nitrocefin-試驗敏感。假如實驗室只使用一種檢驗β-內(nèi)酰胺酶試驗，則推薦青霉素抑菌圈-邊緣試驗。然而，某些實驗室可選擇先執(zhí)行nitrocefin-試驗，如果此試驗陽性，報告β-內(nèi)酰胺酶結(jié)果陽性(或青霉素耐藥)。假如nitrocefin試驗是陰性，且必須用青霉素治療的情況下(如，心內(nèi)膜炎)，在報告青霉素為敏感前，應(yīng)執(zhí)行青霉素抑菌圈-邊緣試驗。

b.3個實驗室共研究測試了168株臨床分離的路登葡萄球菌，結(jié)果表明使用CLSI參考肉湯微量稀釋法（MIC法）和紙片擴(kuò)散法測試為耐藥菌株均產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，并且所有菌株是誘導(dǎo)nitrocefin試驗β-內(nèi)酰胺酶陽性。青霉素紙片擴(kuò)散法抑菌圈-邊緣試驗相比誘導(dǎo)nitrocefin試驗要差些，因此，不用于路登葡萄球菌β-內(nèi)酰胺酶的檢測。

假如實驗室使用的是一種非CLSI推薦的參考方法，并且不確定這種方法是否能可靠檢出路登葡萄球菌對青霉素耐藥性，則在報告分離菌株為青霉素敏感前，實驗室應(yīng)執(zhí)行誘導(dǎo)nitrocefin腸球菌屬抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：MHA

肉湯稀釋法：CAMHB；CAMHB補充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素

瓊脂稀釋法：MHA；瓊脂稀釋法用于達(dá)托霉素不未被認(rèn)可

接種物：生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

孵育：35±2°C；空氣環(huán)境

紙片擴(kuò)散法：16-18h

稀釋法：16-20h

所有方法：測試萬古霉素需24h(1)紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置12只紙片，直徑100-mm平板放置5只紙片(見M02第9.2節(jié))。測量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方幾英寸，但萬古霉素需用透射光閱讀（平板正對光源），肉眼觀察無明顯可見生長的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。在抑菌圈邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略不計。在抑菌圈內(nèi)任何可辨別的菌落生長提示萬古霉素耐藥。(2)警告：對于腸球菌屬，頭孢菌素、氨基糖苷類(除外高水平耐藥篩選)、克林霉素和復(fù)方新諾明可以在體外顯示活性但臨床上治療無效，因此，對于分離菌株這些藥物不應(yīng)報告為敏感。

(3)應(yīng)用高水平的氨基糖苷類（慶大霉素和鏈霉素）篩選試驗，能夠預(yù)測氨芐西林、青霉素或萬古霉素與一種氨基糖苷類抗生素之間的協(xié)同效應(yīng)。其它的氨基糖苷類不需進(jìn)行測試，因為它們對腸球菌的活性并不優(yōu)于慶大霉素和鏈霉素。(4)對于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗結(jié)果(見附錄A)。(5)氨芐西林是氨芐西林和阿莫西林的代表藥。氨芐西林的結(jié)果可用于預(yù)報不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的腸球菌對

阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦敏感性。假如菌株被確認(rèn)為糞腸球菌，氨芐西林敏感性能用于預(yù)報對亞胺培南的敏感性。(6)對青霉素敏感非產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶腸球菌可預(yù)報其對氨芐西林、阿莫西林、氨芐西林/舒巴坦、阿莫西

林/克拉維酸、哌拉西林和哌拉西林/他唑巴坦敏感。然而，對氨芐西林敏感腸球菌不能推定其對青霉素敏感。假如需要青霉素結(jié)果，必須對青霉素進(jìn)行試驗。(7)Rx:對嚴(yán)重的腸球菌感染，如心內(nèi)膜炎，需要氨芐西林、青霉素或萬古霉素（敏感株）加一種氨基糖苷類藥物進(jìn)行聯(lián)合治療，除非證明其對慶大霉素和鏈霉素高水平耐藥，上述藥物聯(lián)合對腸球菌可起到協(xié)同殺菌效果。(8)在腸球菌中，因產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶導(dǎo)致的對青霉素或氨芐西林耐藥較少報道。用常規(guī)紙片法或稀釋法不

能可靠檢測出因產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶而致青霉素或氨芐西林耐藥，但可使用直接的頭孢硝噻吩-內(nèi)酰胺酶試驗進(jìn)行檢測。由于罕見-內(nèi)酰胺酶陽性腸球菌，常規(guī)不需要做此試驗，但可用于選擇性病例。-內(nèi)酰胺酶試驗陽性預(yù)報菌株對青霉素、氨基和脲基青霉素耐藥(見術(shù)語表I)。萬古霉素(9)當(dāng)測試腸球菌對萬古霉素敏感性時，為準(zhǔn)確檢測耐藥性，應(yīng)將平板孵育24h。使用透射光檢測抑菌圈；在抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)霧狀或任何生長表示耐藥。具中介抑菌圈菌株應(yīng)根據(jù)CLSI文件M07-A9描述進(jìn)行MIC試驗。對萬古霉素MICs8-16g/mL菌株，執(zhí)行生化試驗來鑒別表2D后的表2D補充表1中“萬古霉素耐藥”欄下列出的菌種。(10)分離于呼吸道的菌株不報告達(dá)托霉素結(jié)果。紅霉素(11)分離于泌尿道菌株不常規(guī)報告。四環(huán)素類(12)對四環(huán)素敏感菌株也被認(rèn)為對多西環(huán)素和米諾環(huán)素敏感，但是，對四環(huán)素中介或耐藥的某些株可以對多西環(huán)素或米諾環(huán)素或二者敏感。(14)Rx:利福平不能單獨用于抗菌治療。.磷霉素(15)僅用于泌尿道分離的糞腸球菌。(16)認(rèn)可的MIC試驗方法是瓊脂稀釋法。瓊脂培養(yǎng)基中應(yīng)補充25μg/ml6-磷酸葡萄糖。不能使用肉湯稀釋法。(17)200-g磷霉素紙片中含50g6-磷酸葡萄糖。流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：嗜血桿菌試驗培養(yǎng)基(HTM)

肉湯稀釋法：HTM肉湯

接種物：直接菌落懸液法：相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，從孵育過液

(20-24h更適宜)巧克力平板上挑取菌落進(jìn)行制備[見注

釋(2)]

孵育：35±2°C

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；16-18h

肉湯稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(1)此表中使用的嗜血桿菌僅包括流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其他嗜血桿菌試驗和報告建議見CLSI文件M45。

(2)0.5McFarland菌懸液近似1~4×108CFU/mL。由于高接種物濃度可致某些β-內(nèi)酰胺類藥物出現(xiàn)假耐藥結(jié)果，尤其試驗產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶流感嗜血桿菌，建議使用者仔細(xì)練習(xí)制備菌懸液。(3)對于紙擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗。測量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方幾英寸。肉眼觀察無明顯可見生長的地區(qū)作為抑菌環(huán)邊緣。在抑菌環(huán)邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略不計。由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌環(huán)內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長；因此，在測量抑菌環(huán)直徑時可忽視輕微生長（20%或較少的菌苔）而測量較明顯抑制的邊緣。(4)從CSF中分離的流感嗜血桿菌，常規(guī)只測試氨芐西林、一種三代頭孢菌素、氯霉素和美羅培南的藥敏結(jié)果并適當(dāng)報告。(5)阿莫西林/克拉維酸、阿奇霉素、克拉霉素、頭孢克羅、頭孢丙烯、氯碳頭孢、頭孢地尼、頭孢克肟、頭孢泊肟、頭孢呋辛和泰利霉素均是口服藥物，可用于嗜血桿菌引起的呼吸道感染的經(jīng)驗治療。這些抗菌藥物的藥敏試驗結(jié)果對個體患者的管理用處不大，但是，適用于對嗜血桿菌屬耐藥性監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查。(6)HTM制備：首先把50mg氯化血紅素粉溶解在100mL0.01mol/LNaOH溶液中，加熱攪拌至完全溶解，制成新鮮的氯化血紅素原液。再將30mL氯化血紅素原液加到1L含5g酵母粉的Mueller-Hinton瓊脂(MHA)中，高壓滅菌并冷卻后，無菌手續(xù)加入3mLNAD原液(50mgNAD溶解在10mL蒸餾水中，過濾除菌)。(7)對于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)再確證微生物鑒定和抗菌藥物敏感性試驗結(jié)果。(8)氨芐西林敏感性試驗結(jié)果可用于預(yù)報阿莫西林的活性。大部分耐氨芐西林和阿莫西林的流感嗜血桿菌可產(chǎn)生TEM-型-內(nèi)酰胺酶。大多數(shù)情況下，直接-內(nèi)酰胺酶試驗可以快速檢測對氨芐西林和阿莫西林的耐藥性。(9)BLNAR流感嗜血桿菌罕見，這類菌應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為對阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、頭孢克羅、頭孢孟多、頭孢他美、頭孢尼西、頭孢丙烯、頭孢呋辛、氯碳頭孢和哌拉西林/他唑巴坦耐藥，即使某些BLNAR菌株對上述藥物在體外顯示為敏感。四環(huán)素類(12)對四環(huán)素敏感的菌株也被認(rèn)為對多西環(huán)素和米諾環(huán)素敏感。氯霉素(13)從泌尿道分離菌株不常規(guī)報告。(14)利福平僅適用于接觸者預(yù)防。此解釋標(biāo)準(zhǔn)不適用于流感嗜血桿菌侵襲性疾病患者的治療。淋病奈瑟菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：GC瓊脂基礎(chǔ)＋1%特定的生長添加劑。(紙片擴(kuò)散法不需要使用無半胱氨酸的生長添加劑)。

瓊脂稀釋法：GC瓊脂基礎(chǔ)＋1%特定的生長添加劑。(瓊脂稀釋法測碳青霉烯類和克拉維酸時需要使用無半胱氨酸的生長添加劑。含半胱氨酸的生長添加劑對稀釋法測定其他藥物結(jié)果影響不顯著)。

接種物：直接菌落懸液法，在MHB或0.9%磷酸緩沖鹽水（pH7.0）中，使用巧克力

瓊脂平板5%CO2環(huán)境孵育過夜(20-24h)生長的菌落制備，濁度相當(dāng)于0.5麥

氏標(biāo)準(zhǔn)。

孵育：36±1°C(不超過37°C)；5%CO2；所有方法，20-24h(1)對于紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗。對某些藥物，如,喹諾酮類或頭孢菌素類，每只平板只能放置2~3只紙片進(jìn)行測試。測量抑菌圈直徑（用肉眼判讀），包括紙片直徑。保持平板在反射光照明、非反射黑的背景上方幾英寸，肉眼觀察無明顯可見生長的地區(qū)作為抑菌環(huán)邊緣。在抑菌環(huán)邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略不計。(2)用體外試驗呈現(xiàn)產(chǎn)生“中介”結(jié)果的頭孢美唑、頭孢替坦、頭孢西丁和大觀霉素治療淋病瑟奈菌感染的臨床療效是未知的。(3)紙片擴(kuò)散法測試淋病瑟奈菌，某種抗菌藥物試驗結(jié)果是“中介”，提示或是技術(shù)問題，需要重復(fù)試驗，或者是在處理具有上述抑菌圈的菌株時缺乏臨床經(jīng)驗。對于頭孢美唑、頭孢替坦、頭孢西丁和大觀霉素以外的藥物產(chǎn)生“中介”的菌株，已有文獻(xiàn)報道其臨床治愈率(85%-95%)低于敏感菌株治愈率(>95%)。(4)推薦的測試淋病奈瑟菌的培養(yǎng)基是含1%特定的生長添加劑的GC瓊脂。此添加劑(1升水中加入1.1gL-半胱氨酸、0.03g鹽酸鳥嘌呤、3mg鹽酸硫胺、13mg對氨基苯甲酸(PABA)、0.01g維生素B12、0.1g輔羧酶、0.25gNAD、1.0g腺嘌呤、10gL-谷氨酰胺、100g葡萄糖和0.02g硝酸鐵)是在GC瓊脂高壓滅菌后加入。(5)對于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗結(jié)果(見附錄A)。(6)β-內(nèi)酰胺酶陽性可預(yù)報分離菌株對青霉素、氨芐西林和阿莫西林耐藥。(7)β-內(nèi)酰胺酶試驗可檢測淋病奈瑟菌對青霉素的一種耐藥機(jī)制，也可以提供流行病學(xué)信息。染色體介導(dǎo)的耐藥僅可通過紙片擴(kuò)散法或瓊脂稀釋MIC法檢測出來。(8)淋病奈瑟菌對10單位的青霉素紙片抑菌圈直徑≤19mm，很可能是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶的菌株。但由于β-內(nèi)酰胺酶試驗可快速、準(zhǔn)確檢出這種質(zhì)粒介導(dǎo)的青霉素耐藥性，所以優(yōu)于其它敏感性試驗方法。(10)淋病奈瑟菌對30g四環(huán)素紙片抑菌圈直徑19mm，常提示這是一株質(zhì)粒介導(dǎo)的四環(huán)素耐藥的淋病奈瑟菌(TRNG)。此菌株的耐藥性應(yīng)用稀釋試驗(MIC16g/mL)來確證。肺炎鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯稀釋法：含LHB(2.5-5%v/v)CAMHB

(見M07-A9LHB制備說明)

瓊脂稀釋法：含綿羊血(5%v/v)MHA；藥敏試驗分委會近期未對瓊脂稀釋法

進(jìn)行研究和評估。

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，使用綿羊血平板上過夜(18-20h)

生長菌落制備。

孵育：35±2°C

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；20-24h

稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(瓊脂稀釋法需要放CO2環(huán)境)(1)對于紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗。測量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。肉眼觀察無明顯可見生長的地區(qū)作為抑菌環(huán)邊緣。不測量溶血抑制圈。移去平板蓋反射光照明瓊脂平板，從平板表面上方測量抑菌環(huán)直徑。在抑菌環(huán)邊緣借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略不計。由于培養(yǎng)基中可能存在拮抗劑，甲氧芐啶和磺胺類藥物抑菌環(huán)內(nèi)可允許出現(xiàn)菌株輕微生長；因此，在測量抑菌環(huán)直徑時可忽視輕微生長（20%或較少的菌苔）而測量較明顯抑制的邊緣。(2)阿莫西林、氨芐西林、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢呋辛、厄他培南、亞胺培南和美羅培南可用于肺炎鏈球菌引起感染的治療；然而，對這些藥物紙片擴(kuò)散法敏感試驗檢測結(jié)果不可靠。最好用MIC方法測定這些藥物的體外活性。(3)從腦脊液中分離的肺炎鏈球菌應(yīng)當(dāng)使用可靠的MIC方法(如CLSIM07-A9文件所描述)測試青霉素、頭孢噻肟或頭孢曲松、美羅培南，并常規(guī)報告。對萬古霉素的敏感性可使用MIC或紙片法來測定。(4)對于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗結(jié)果(見附錄A)。青霉素類(5)對于非腦膜炎分離株,青霉素MIC≤0.06g/mL(或苯唑西林抑菌圈直徑≥20mm)能預(yù)報對下列β-內(nèi)酰胺類藥物的敏感性：氨芐西林(口服或注射)、氨芐西林-舒巴坦、阿莫西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢克羅、頭孢地尼、頭孢托侖、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢丙烯、頭孢洛林、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢呋辛、多利培南、厄他培南、亞胺培南、氯碳頭孢、美羅培南和青霉素(口服或注射)。(6)苯唑西林抑菌圈直徑20mm肺炎鏈球菌對青霉素是敏感的(MIC0.06g/mL)。苯唑西林抑菌圈直徑≤19mm分離株，應(yīng)測定青霉素和頭孢噻肟或頭孢曲松或美羅培南MICs。由于抑菌圈直徑≤19mm可發(fā)生在青霉素耐藥、中介或某些敏感菌株中。苯唑西林抑菌圈直徑≤19mm分離株，未測定青霉素MIC，則不報告青霉素耐藥。青霉素注射劑(非腦膜炎)(7)Rx:青霉素MICs≤2μg/mL肺炎鏈球菌引起的非腦膜炎感染的治療，腎功能正常成年人每4h靜脈給藥至少200萬單位(每天1200萬單位)。MIC為4μg/mL中介株，每天需1800-2400萬單位青霉素劑量。(8)CSF外分離的所有菌株，應(yīng)按腦膜炎和非腦膜炎解釋標(biāo)準(zhǔn)報告結(jié)果。青霉素注射劑(腦膜炎)(9)Rx:使用青霉素治療腦膜炎，需用最大劑量靜脈給藥進(jìn)行治療(如，腎功能正常成年人每4h靜脈給藥至少300萬單位)。(15)Rx:使用頭孢噻肟和頭孢曲松治療腦膜炎需用最大劑量。大環(huán)內(nèi)酯類(18)測試紅霉素可以預(yù)報菌株對阿奇霉素、克拉霉素和地紅霉素的敏感和耐藥性。(19)從泌尿道分離的菌株不常規(guī)報告。四環(huán)素類(20)對四環(huán)素敏感菌株被認(rèn)為對多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。(21)對左氧氟沙星敏感肺炎鏈球菌分離株可預(yù)報其對吉米沙星和莫西沙星敏感。然而，對吉米沙星和莫西沙星敏感肺炎鏈球菌不能推定其對左氧氟沙星敏感。β-溶血鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯稀釋法：含LHB(2.5%to5%v/v)CAMHB；CAMHB需補充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素(見M07-A9LHB制備說明)

瓊脂稀釋法：含綿羊血(5%v/v)MHA；藥敏試驗分委會近期未對瓊脂稀釋法進(jìn)行研究和評估。

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，使用綿羊血平板上過夜(18-20h)生長菌落制備。

孵育：352°C;

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；20-24h

稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(瓊脂稀釋法需放CO2環(huán)境)(1)對于紙片擴(kuò)散法，直徑150-mm平板最大放置9只紙片，直徑100-mm平板放置4只紙片進(jìn)行試驗。測量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。肉眼觀察無明顯可見生長的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。不測量溶血抑制圈。移去平板蓋反射光照明瓊脂平板，從平板表面上方測量抑菌圈直徑。在抑菌圈邊緣需借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略不計。(2)本表中，β-溶血群包括具有A(化膿鏈球菌)、C或G群抗原形成較大菌落的化膿性鏈球菌及具有B群(無乳鏈球菌)抗原的菌株。具有A、C、F或G群抗原（咽峽炎鏈球菌，以前稱為“米勒鏈球菌”）形成較小菌落β-溶血的菌株被分到草綠色鏈球菌中。應(yīng)使用草綠色鏈球菌解釋標(biāo)準(zhǔn)(見表2H-2)。(3)青霉素和氨芐西林可用于治療β-溶血鏈球菌感染的選擇用藥。由于在β-溶血鏈球菌中非敏感株(即，青霉素MICs＞0.12和氨芐西林MICs>0.25μg/ml)極其罕見，在化膿鏈球菌中還未見報道,因此，F(xiàn)DA批準(zhǔn)用于治療β-溶血鏈球菌感染的青霉素和其他β-內(nèi)酰胺類藥物，在臨床常規(guī)工作中不需要進(jìn)行敏感性試驗。假如試驗時發(fā)現(xiàn)任何非敏感β-溶血鏈球菌菌株應(yīng)重新鑒定和試驗，如果確證為非敏感株，應(yīng)送交公共衛(wèi)生實驗室（進(jìn)一步說明見附錄A）。(4)β-溶血鏈球菌的解釋標(biāo)準(zhǔn)是基于各菌種的群體分布、抗菌藥物的藥代動力學(xué)、以前出版的文獻(xiàn)以及分會某些委員的臨床經(jīng)驗基礎(chǔ)上提議的。對許多藥物還沒有系統(tǒng)地收集到臨床數(shù)據(jù)用于折點的評估。(5)對于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗結(jié)果(見附錄A)。青霉素類(6)對下列菌群，青霉素敏感的菌株可認(rèn)為對下列抗菌藥物也敏感，當(dāng)這些藥物用于其批準(zhǔn)的指征時，不需要再測試這些藥物。β-溶血鏈球菌(A、B、C、G群):氨芐西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢吡肟、頭孢拉定、頭孢噻吩、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢唑肟、亞胺培南、厄他培南和美羅培南。此外，僅對A群鏈球菌還包括：頭孢克羅、頭孢地尼、頭孢丙烯、頭孢布烯、頭孢呋辛、頭孢泊肟和頭孢匹林。(8)分離于呼吸道菌株不報告達(dá)托霉素結(jié)果。大環(huán)內(nèi)酯類(9)測試紅霉素可以預(yù)報菌株對阿奇霉素和地紅霉素的敏感和耐藥性。(10)從泌尿道分離的菌株不常規(guī)報告。(11)Rx:分娩期婦女預(yù)防B群鏈球菌感染用藥，推薦用青霉素或氨芐西林。低危險性青霉素過敏的婦女推薦用頭孢唑啉，而高危險青霉素過敏者，建議使用克林霉素。青霉素、氨芐西林和頭孢唑啉敏感的B群鏈球菌，可對克林霉素和/或紅霉素耐藥。因此，當(dāng)從青霉素嚴(yán)重過敏（高危過敏）的妊娠婦女分離到B群鏈球菌時，應(yīng)對紅霉素和克林霉素(包括誘導(dǎo)型克林霉素耐藥)進(jìn)行試驗,并僅報告克林霉素結(jié)果。四環(huán)素類(12)對四環(huán)素敏感的菌株被認(rèn)為對多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。(13)誘導(dǎo)型克林霉素耐藥可通過使用D-抑菌圈紙片擴(kuò)散法和肉湯微量稀釋試驗來檢測。草綠色溶血鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯稀釋法：含LHB(2.5%to5%v/v)CAMHB；CAMHB需補充50μg/mL鈣用于達(dá)托霉素(見M07-A9LHB制備說明)

瓊脂稀釋法：含綿羊血(5%v/v)MHA；藥敏試驗分委會近期未對瓊脂稀釋法進(jìn)行研究和評估。

接種物：直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，使用綿羊血平板上過夜(18-20h)生長菌落制備。

孵育：352°C;

紙片擴(kuò)散法：5%CO2；20-24h

稀釋法：空氣環(huán)境；20-24h(瓊脂稀釋法需放CO2環(huán)境)(1)對紙片擴(kuò)散法，測量抑菌圈直徑(用肉眼判讀)，包括紙片直徑。肉眼觀察無明顯可見生長的地區(qū)作為抑菌圈邊緣。不測量溶血抑制圈。移去平板蓋反射光照明瓊脂平板，從平板表面上方測量抑菌圈直徑。在抑菌圈邊緣需借助放大鏡才能觀察到的微小菌落生長可忽略不計。(2)草綠色鏈球菌包括下列五個群，每群中含有幾個菌種：變異鏈球菌群、唾液鏈球菌群、牛鏈球菌群、咽峽炎鏈球菌群(以前的"米勒鏈球菌"群)和緩癥鏈球菌群。咽峽炎鏈球菌群包括具有A、C、F和G抗原形成小菌落的β-溶血鏈球菌。每群中所包括菌種的詳細(xì)信息，請參見最近的臨床微生物學(xué)文獻(xiàn)。(3)非肺炎鏈球菌的其他鏈球菌的解釋標(biāo)準(zhǔn)是基于各菌種的群體分布、抗菌藥物的藥代動力學(xué)、以前出版的文獻(xiàn)以及分會某些委員的臨床經(jīng)驗基礎(chǔ)上提議的。對許多藥物還缺乏系統(tǒng)的臨床數(shù)據(jù)用于評估其折點。(4)對于某些微生物/抗菌藥物組合，尚不存在或罕見耐藥株，因此，除了“敏感”以外沒有標(biāo)明任何其他類型。如果菌株的結(jié)果提示“非敏感”，應(yīng)確證菌株鑒定和抗菌藥物敏感性試驗結(jié)果(見附錄A)。(5)分離于正常無菌部位的草綠溶血鏈球菌(如，CSF、血液和骨髓)應(yīng)使用MIC法測試青霉素的敏感性。(6)Rx:青霉素或氨芐西林中介菌株，需與一種氨基糖苷類藥物聯(lián)合進(jìn)行治療，起殺菌作用。大環(huán)內(nèi)酯類(8)測試紅霉素可以預(yù)報菌株對阿奇霉素、克拉霉素和地紅霉素的敏感和耐藥性。(9)從泌尿道分離的菌株不常規(guī)報告。四環(huán)素類(10)對四環(huán)素敏感菌株被認(rèn)為對多西環(huán)素和米諾環(huán)素也敏感。腦膜炎奈瑟菌抑菌圈直徑和MIC解釋標(biāo)準(zhǔn)試驗條件

培養(yǎng)基：紙片擴(kuò)散法：含5%綿羊血MHA

肉湯微量稀釋法：補充LHB(2.5%to5%v/v)(見M07-A9LHB制備)的CAMHB

瓊脂稀釋法：補充綿羊血(5%v/v)的MHA接種物：直接菌落懸液法，從巧克力瓊脂上挑取35°C孵育20-24h菌落制備；5%CO2；相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。綿羊血平板上生長的菌落可用于接種物的制備。然而，從綿羊血平板制備0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)菌懸液，實際含量大約低于50%CFU/mL。在制備最終稀釋濃度接種板條前，應(yīng)按要求進(jìn)行菌落計數(shù)

孵育：352°C；5%CO2；20-24h。(1)警告：應(yīng)在生物安全柜（BSC）中執(zhí)行所有腦膜炎奈瑟菌對抗菌藥物敏感性試驗。在BSC外制作腦膜炎奈瑟菌菌懸液罹患腦膜炎球菌疾病風(fēng)險增高。實驗室獲得性腦膜炎球菌疾病有50%致死率。暴露于含腦膜炎奈瑟菌液滴或氣溶膠是實驗室獲得性感染最可能的風(fēng)險因素。當(dāng)對腦膜炎奈瑟菌分離株執(zhí)行微生物學(xué)程序時(包括AST)，要求操作人員嚴(yán)防液滴或氣溶膠。(2)假如無BSC，應(yīng)盡量減少對這種分離菌處理，通常僅限制于石炭酸鹽水處理后的革蘭染色或血清鑒定，操作時穿工作服和戴手套，并在防濺板后面工作。處理高度潛在產(chǎn)生液滴或氣溶膠活動和涉及生產(chǎn)大量或高濃度感染材料時，應(yīng)在BSL-3實驗室使用防護(hù)設(shè)施、程序及設(shè)備。假如達(dá)不到BSL-2或BSL-3設(shè)施和設(shè)備要求，應(yīng)將分離株送交至少具有BSL-2設(shè)施的參考或公共衛(wèi)生實驗室。(3)通常對暴露于潛在腦膜炎奈瑟菌氣溶膠的實驗室工作人員，根據(jù)疾病預(yù)防和控制中心(CDC)預(yù)防接種咨詢委員會當(dāng)前建議()，應(yīng)考慮預(yù)防接種。接種疫苗可以降低但不能消除感染風(fēng)險，因為它并非100%有效，對常見引起實驗