水果蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)

目錄第一章概述

第二章樣品前處理過(guò)程

第三章NY/T761-2008方法介紹及注意事項(xiàng)檢農(nóng)測(cè)殘當(dāng)前第1頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)概述

隨著農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，化學(xué)農(nóng)藥的品種和數(shù)量不斷增加，已成為防治病蟲(chóng)害的主要手段。農(nóng)藥污染問(wèn)題經(jīng)常發(fā)生，農(nóng)藥殘留量超標(biāo)相當(dāng)嚴(yán)重，并逐年加劇。大力開(kāi)展農(nóng)藥殘留量檢測(cè)技術(shù)以及相關(guān)的前處理技術(shù)的研究是非常必要的。當(dāng)前第2頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)

主要表現(xiàn)：血液中膽堿酯酶受抑，活力下降，使分解乙酰膽堿的能力喪失，從而引起一系列的中毒表現(xiàn)，如出汗、肌肉顫動(dòng)、心跳加快、瞳孔縮小等，嚴(yán)重的可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常。蓄積于脂肪含量較高的組織和臟器主要損害肝、腎和神經(jīng)中樞動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明有機(jī)氯農(nóng)藥對(duì)動(dòng)物有誘發(fā)肝癌的作用有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的危害有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥的危害當(dāng)前第3頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)毒性：與人體細(xì)胞色素氧化酶結(jié)合，造成組織細(xì)胞內(nèi)窒息中毒癥狀：神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及皮膚刺激癥狀對(duì)魚(yú)類(lèi)有很高的蓄積性，有“三致”作用擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的危害在胃中酸性條件下可與食物中的亞硝基化合物的前體物質(zhì)亞硝酸鹽和硝酸鹽反應(yīng)生成強(qiáng)致癌性的亞硝基化合物（NOC），因此認(rèn)為氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑可能具有致畸、致突變、致癌，并推斷氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑本身在環(huán)境中也能形成亞硝胺。氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的危害當(dāng)前第4頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)甲胺磷、久效磷、甲基對(duì)硫磷、對(duì)硫磷、磷胺2004年：撤消其生產(chǎn)、銷(xiāo)售2005—2006年：僅用于棉花、小麥、玉米、水稻2007年1月1日：中國(guó)全面禁止我國(guó)全面禁用的5種高毒農(nóng)藥當(dāng)前第5頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)食品中農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)的特點(diǎn)食品殘留量含量很低食品中的其他成分含量大大高于農(nóng)藥殘留，易對(duì)其測(cè)定產(chǎn)生干擾樣品前處理及檢驗(yàn)要求高農(nóng)藥殘留：指農(nóng)藥施用后，殘存在生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝產(chǎn)物、降解物和雜質(zhì)的總稱(chēng)。殘留的數(shù)量叫殘留量。農(nóng)藥殘留量（mg/kg）=農(nóng)藥本身+其代謝物的殘留量當(dāng)前第6頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)蔬菜和水果中殘留農(nóng)藥檢測(cè)方法

根據(jù)農(nóng)藥的化學(xué)特性和毒理學(xué)性質(zhì)，檢測(cè)農(nóng)藥的方法有二大類(lèi)：

快速檢驗(yàn)法（乙酰膽堿酯酶抑制法）儀器分析法（氣相或氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法）當(dāng)前第7頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)樣品前處理的目的檢測(cè)痕量組分復(fù)雜的體系將待測(cè)組分與母體或基體分離濃縮痕量的被測(cè)組分樣品預(yù)處理新技術(shù)與方法的探索與研究已成為當(dāng)代分析化學(xué)的重要課題與發(fā)展方向之一。當(dāng)前第8頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)完整的樣品分析過(guò)程色譜分析過(guò)程時(shí)間分配示意圖樣品采集樣品前處理分析測(cè)定數(shù)據(jù)處理報(bào)告結(jié)果痕量有機(jī)物當(dāng)前第9頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)正確采樣的意義:均勻、代表性采樣的過(guò)程便是由檢樣→原始樣品→平均樣品→試樣的過(guò)程。不同質(zhì)量的檢樣單獨(dú)作為原始樣品、平均樣品、試樣，單獨(dú)進(jìn)行分析。

隨機(jī)≠隨意

(一)樣品采集當(dāng)前第10頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)（二）樣品的前處理提取凈化濃縮農(nóng)藥一般為有機(jī)物，不能采用測(cè)定無(wú)機(jī)元素的樣品前處理方法，常采用溶劑分離提取。盡可能除去與測(cè)定無(wú)關(guān)的雜質(zhì)成分，提高分析的選擇性和保護(hù)儀器。使用于分析的溶液體積降到最小，以滿足分析靈敏度，增加檢出率。當(dāng)前第11頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)根據(jù)待測(cè)成分與其它成分結(jié)合的狀況以及與其它大量基質(zhì)的性質(zhì)上某種差異，選擇適當(dāng)?shù)姆椒▽⒋郎y(cè)成分釋放并分離出來(lái)，同時(shí)還排除一些其它成分的干擾。常用的提取方法有溶劑浸取法、蒸餾法、酶解或酸解釋放法等。1.提取當(dāng)前第12頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)提取溶劑根據(jù)待測(cè)物的化學(xué)性質(zhì)和樣品的種類(lèi)選擇提取溶劑，一般選擇待測(cè)物溶解度較大的溶劑在保證提取效率的條件下，溶劑的純度、價(jià)格、毒性和沸點(diǎn)也要考慮依據(jù)相似相溶判斷查閱文獻(xiàn)資料試驗(yàn)確定選擇極性相近的溶劑當(dāng)前第13頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)（1）溶劑提取法浸漬法搗碎法索氏提取法加速溶劑萃取法蒸餾液液萃取提取劑的選擇：相似相溶原理（1）沸點(diǎn)在45～80℃（2）選穩(wěn)定性好的溶劑提取方法當(dāng)前第14頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)A.提取方法比較方法特點(diǎn)1索氏提取法經(jīng)典提取法,提取效果好,時(shí)間長(zhǎng)、干擾物質(zhì)多2振蕩法通常樣品經(jīng)溶劑浸泡過(guò)夜后,振蕩提取。此法便于批量操作,但要求待測(cè)農(nóng)藥非內(nèi)吸性。3勻漿法通常用組織搗粹機(jī)快速勻漿1～2分鐘。此法簡(jiǎn)便、快速,但不能批量操作。4超聲提取法此法便于批量操作,但要注意超聲波的功率,在超聲提取的過(guò)程中,要用玻璃棒多次攪拌樣品5消煮法要求待測(cè)農(nóng)藥具有熱穩(wěn)定性和低揮發(fā)性6快速溶劑提取提取速度快，效率高當(dāng)前第15頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)（2）蒸餾法

蒸餾法是利用待測(cè)成分與其它物質(zhì)的蒸氣壓的不同而進(jìn)行分離與提純的一種方法。這一方法常用于將揮發(fā)性物質(zhì)與不揮發(fā)性物質(zhì)分離，或用于沸點(diǎn)不同的物質(zhì)分離。常用的蒸餾法有：（1）氣液平衡法,依據(jù)拉烏爾定律（頂空氣相色譜法）（2）常壓蒸餾法（3）分餾法（4）減壓蒸餾法（5）水蒸氣蒸餾法當(dāng)前第16頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)2.凈化使用有機(jī)溶劑提取樣本中的農(nóng)藥時(shí)，樣本中的油脂、蠟質(zhì)、蛋白質(zhì)、葉綠素及其他色素、胺類(lèi)、酚類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、糖類(lèi)等會(huì)同農(nóng)藥一起被提取出來(lái)，提取液中既有農(nóng)藥又有許多干擾物質(zhì)，這些物質(zhì)亦稱(chēng)共提物，會(huì)嚴(yán)重干擾殘留量的測(cè)定。故必須將農(nóng)藥與上述雜質(zhì)進(jìn)行分離，然后才能對(duì)痕量農(nóng)藥進(jìn)行分析測(cè)定。凈化(cleanup)是指通過(guò)物理的或化學(xué)的方法去除提取物中對(duì)測(cè)定有干擾作用的雜質(zhì)的過(guò)程。

凈化目的：是去掉樣品中的脂肪、蠟質(zhì)與色素等,以除去測(cè)定時(shí)的干擾及保護(hù)儀器。當(dāng)前第17頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)農(nóng)藥殘留分析中常見(jiàn)的干擾雜質(zhì)類(lèi)別化合物脂類(lèi)蠟質(zhì)、脂肪、油脂色素葉綠素、葉黃素、花青素氨基酸衍生物蛋白質(zhì)、肽、生物堿、氨基酸碳水化合物糖、淀粉、醇木質(zhì)素酚類(lèi)及其衍生物萜類(lèi)單萜、倍半萜、二萜等環(huán)境污染物各種有機(jī)物、礦物、硫、多氯聯(lián)苯、鄰苯二甲酸酯、碳?xì)浠衔锏犬?dāng)前第18頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)凈化的方法液液萃取磺化法皂化法沉淀分離法柱色譜固相萃取

QuEChERS法

當(dāng)前第19頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)(1)液—液分配法

利用待測(cè)農(nóng)藥與雜質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中.溶解度的差異而達(dá)到分離的目的。通常采用極性/非極性的溶劑組合進(jìn)行分配。當(dāng)前第20頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)（2.）柱色譜ABCABC的混合液當(dāng)前第21頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)用來(lái)除去樣品中脂肪、色素，使本來(lái)憎水性油脂色素變成親水性化合物，從樣品中分離出去。（5）沉淀分離法

利用沉淀反應(yīng)進(jìn)行分離。在試樣中加入適當(dāng)?shù)某恋韯?，使被測(cè)組分沉淀下來(lái)或?qū)⒏蓴_組分沉淀下來(lái)，再經(jīng)過(guò)濾或離心把沉淀和母液分開(kāi)。（3）磺化法（4）皂化法除去脂肪除去脂肪和色素當(dāng)前第22頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)(6)固相萃取法（SolidPhaseExtraction，SPE）原理：利用固定相將液體樣品中的待測(cè)組分吸附，與樣品中基體和干擾組分分離，然后用洗脫液洗脫，達(dá)到分離或富集待測(cè)組分目的。活化（再生）

加樣洗滌洗脫當(dāng)前第23頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)（7）QuEChERS方法

QuEChERS方法實(shí)質(zhì)是固相萃取技術(shù)與基質(zhì)固相分散技術(shù)的衍生和進(jìn)一步的發(fā)展。該方法的核心是它提出了加入單一溶劑乙腈提取農(nóng)藥的新模式；并通過(guò)具有更強(qiáng)吸水功能的試劑無(wú)水硫酸鎂代替常用的無(wú)水硫酸鈉；采用PSA(N一丙基乙二胺)和GCB(石墨化碳黑)凈化，去除脂肪酸、有機(jī)酸和色素。當(dāng)前第24頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)（3）濃縮目的：縮小樣品液的體積、提高待測(cè)組分的濃度方法：

常壓濃縮

待測(cè)物易損失、需轉(zhuǎn)移定容，增大樣液體積

氣流吹蒸濃縮法

空氣或N2吹拂樣液表面，輔以水浴加熱

減壓濃縮

KD濃縮器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，水浴加熱并抽氣減壓，濃縮速度快，被測(cè)組分損失少。當(dāng)前第25頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)K-D濃縮法(Kuderna-Danishevaporativeconcentration)是利用K-D濃縮器直接濃縮到刻度試管中，適合于中等體積（10~50mL）提取液的濃縮。K-D蒸發(fā)濃縮器是為濃縮易揮發(fā)性溶劑而設(shè)計(jì)的，其特點(diǎn)是濃縮瓶與施耐德分餾柱連接，下接有刻度的收集管，可以有效地減少濃縮過(guò)程中農(nóng)藥的損失，且其樣品收集管能在濃縮后直接定容測(cè)定，無(wú)需轉(zhuǎn)移樣品。當(dāng)前第26頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器使用時(shí)，水浴溫度不宜超過(guò)40℃。濃縮中，注意不能蒸干。當(dāng)前第27頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)

減少甚至不用有毒有機(jī)溶劑減少操作步驟盡量集采樣、萃取、凈化、濃縮、預(yù)分離、進(jìn)樣于一身能適應(yīng)處理復(fù)雜介質(zhì)、痕量成分、特殊性質(zhì)成分分析的要求樣品前處理的發(fā)展趨勢(shì)當(dāng)前第28頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法農(nóng)藥種類(lèi)和個(gè)數(shù)：有機(jī)磷（54種）、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯（41種）、氨基甲酸酯類(lèi)（10種）農(nóng)藥等共105種使用儀器：GCNY/T761-2008當(dāng)前第29頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)加入2.0mL丙酮丙酮定容5.0mL加入2.0mL正己烷5mL丙酮＋正己烷(10＋90)淋洗，重復(fù)一次依次5mL丙酮+正己烷(10+90),5mL正己烷預(yù)淋弗羅里矽柱50℃水浴氮吹近干正己烷定容5mLECDGC檢測(cè)加入2mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)2.0mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)淋洗，重復(fù)一次4mL甲醇＋二氯甲烷(1+99)預(yù)淋氨基柱50℃水浴氮吹近干甲醇定容2.5mL配柱后衍生FLDHPLC檢測(cè)過(guò)0.2μm濾膜25.0g樣品，加入50.0mL乙腈高速分散2min過(guò)濾到5g~7g氯化鈉的100mL具塞量筒振蕩1min后靜置30min80℃水浴氮?dú)饣蚩諝饬髡舾煞秩∫译鎸?0.00mLFPDGC檢測(cè)樣品前處理過(guò)程當(dāng)前第30頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)樣品前處理過(guò)程稱(chēng)取樣品25.0g，記錄的是實(shí)際稱(chēng)量數(shù)字，倒入50.0mL乙腈，高速勻漿2min，轉(zhuǎn)速2萬(wàn)轉(zhuǎn)/min。當(dāng)前第31頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)樣品前處理過(guò)程勻漿后收集到裝有5-7g氯化鈉的100mL具塞量筒中，收集濾液，劇烈震蕩1min，靜止30min，使乙腈相和水相分開(kāi)。

當(dāng)前第32頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)樣品前處理過(guò)程從具塞量筒中吸取10.00mL的上層乙腈溶液，放入三個(gè)小燒杯中（由于做三個(gè)項(xiàng)目就吸三個(gè)10.00mL），將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱（或電熱板），杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)饣蚩諝饬?，蒸發(fā)至近干。當(dāng)前第33頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)

有機(jī)磷：蒸發(fā)近干的小燒杯，加入2.0mL丙酮，蓋上鋁箔，備用。將上述備用液完全轉(zhuǎn)移至15mL刻度離心管中，再用3mL丙酮分三次沖洗燒杯，并轉(zhuǎn)移至離心管，最后定容至5.0mL，在漩渦混合器上混勻，移入自動(dòng)進(jìn)樣小瓶中，如果定容后的樣品溶液過(guò)于混濁，應(yīng)用0.2μm的濾膜過(guò)濾后再裝入小瓶，待測(cè)。當(dāng)前第34頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)樣品前處理過(guò)程

有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的操作：蒸發(fā)近干的小燒杯加入2.0mL正己烷，蓋上鋁箔，備用。將弗羅里矽柱依次用5.0mL丙酮+正己烷（10+90）、5.0mL正己烷預(yù)淋洗，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入上述凈化溶液，用15mL刻度離心管收集洗脫液，用5mL丙酮+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，并重復(fù)一次，收集。當(dāng)前第35頁(yè)\共有39頁(yè)\編于星期二\9點(diǎn)樣品前處理過(guò)程然后將收集好的淋洗液的刻度離心管再放入氮吹儀上，這次水浴溫度為50℃，吹蒸發(fā)至小于5mL，用正己烷定容5.