藥理實驗給藥量以及實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

藥理實驗給藥量以及實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計第一頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四1.重復(fù)：目的：驗證在類似的條件是否可獲得結(jié)果的重現(xiàn)性以及結(jié)果的變異情況。要點：A.確定適當(dāng)?shù)臉颖緮?shù)。B.各組動物數(shù)目盡量相同。按動物類型確定樣本數(shù)：（1）小動物：計量>10例;計數(shù)>30例（2）中等動物：計量>8;計數(shù)>20例（3）大動物5-10例第二頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四2.隨機：目的：（1）避免非研究因素影響。（2）除研究因素外，提高各比較組的其他因素的均衡性、可比性。（3）滿足統(tǒng)計學(xué)假設(shè)檢驗的要求。第三頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四抽簽隨機法：例：30只小鼠，要求隨機分為3組：可先將30只小鼠按1至30編號，做1-30號簽，充分混合號簽后，隨機各取10枚為一組。

第四頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四隨機數(shù)字表法：第五頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四B組:順序號:2，3，5，7，10，11，隨機號:08，18，27，38，90，16

余數(shù):2,0,0,2,0,1調(diào)整后各組的編號:A組：1，9，12，13，15B組：2，5，7，10，11C組:3，4，6，8，14第六頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四3.對照

（1）

正常對照組（空白對照、陰性對照）（2）模型對照組（3）陽性對照組意義：①檢驗實驗體系是否可靠②粗略估計受試藥與對照藥相比，作用強度與特點上有哪些差異。第七頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四（4）假手術(shù)對照組有時可以替代正常對照（5）自身對照觀察同一個體給藥前、后的區(qū)別.第八頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第二節(jié)實驗動物選擇

1、符合醫(yī)學(xué)實驗動物標(biāo)準(zhǔn)

一級：普通動物（亦稱常規(guī)動物或無疾病的動物）；二級：清潔動物（飼養(yǎng)在溫度恒定，普通設(shè)施中的動物，飼料、墊料，用具均經(jīng)過高壓消毒）；三級：無特殊病原體動物（specific-pathogenfree,簡稱SPF動物）；四級：無菌動物（機體內(nèi)外均無任何寄生蟲的動物，一般是臨產(chǎn)前按無菌手術(shù)剖腹取出胎仔，在無菌條件下用無菌飼料繁養(yǎng)獲得的動物）。第九頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四2、根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇敏感種系心血管系統(tǒng):大鼠貓、犬、小型豬等。體溫：兔

嘔吐實驗：鴿、貓或狗等。免疫：純種小鼠

原則:選擇對藥物的反應(yīng)與人體相近的種系。

第十頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四3、性別：根據(jù)要求選擇

用一種性別比兩種性別兼用所得結(jié)果離散度較小。

4、年齡體重：

每批動物的體重，年齡越接近越好

通常：小鼠:18-22g，大鼠:200±25g，豚鼠:250-300g，兔、貓:1.5-2Kg,犬:10-15kg。大鼠、小鼠:6-8周齡

第十一頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四4、數(shù)量：計量研究：小鼠每組>10只大鼠每組>8只豚鼠或兔每組>6只豬或狗>5只計數(shù)研究：小鼠每組>30只大鼠每組>20只第十二頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四5.習(xí)性:小鼠、大鼠均為群居動物，不宜單獨飼養(yǎng)。

第十三頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第三節(jié)受試藥

1.制備情況：（1）新藥受試藥要求：用處方固定，質(zhì)量穩(wěn)定、工藝、質(zhì)控指標(biāo)恒定后的中試產(chǎn)品。（2）一般受試中藥：生藥經(jīng)鑒定科屬種清楚；提取制備工藝明確，含量確定（以生藥量或有效組分含量表示）。（3）中藥單體：化學(xué)結(jié)構(gòu)式清楚。

第十四頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四2、給藥途徑實驗的給藥途徑與臨床擬使用的途徑一致。

中藥粗制劑一般不用注射給藥或體外實驗的方法檢測藥物效應(yīng)。第十五頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四3、給藥時間預(yù)防性給藥：治療給藥：第十六頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四4、劑量：

劑量組數(shù)：新藥研究至少設(shè)3個劑量組。三者最好成等比，能反應(yīng)量效關(guān)系。給藥容量相等，濃度不等。合理選擇劑量：（1）參考LD50：在LD50的1/10、1/20、1/40等范圍內(nèi)設(shè)置高、中、低劑量組。（2）根據(jù)臨床用藥等效量計算：第十七頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四不同種類動物等效用藥量的計算

小白鼠20g大白鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg猴4.0kg狗12.0kg人70.0kg小白鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9大白鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0豚鼠400g0.030.571.02.252.45.210.231.5兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1人70.0kg0.00260.0180.0310.070.0780.160.321.0第十八頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四應(yīng)用舉例：①某復(fù)方的總藥量是60g/劑，每天1劑。按實驗動物與人用藥量折算表計算，200g重大鼠等效量是多少？200g重大鼠等效量為：60g×0.018=1.08g/只，或：

60g÷56＝1.07g/只

第十九頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四人的每公斤體重給藥量為：60g÷70=0.857g/Kg。大鼠每公斤的給藥量是：1.08g×1000/200=5.4g/Kg按體重計算，要達到等效，大鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的5.4g/Kg÷0.857g/Kg=6.3（倍）。第二十頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四②如同一復(fù)方要用小鼠實驗，小鼠每只的給藥量為：60×0.0026＝0.156g/只；0.156÷20/1000=7.8g/Kg；按體重計算，要達到等效，小鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的7.80g/Kg÷0.857g/Kg=9.1（倍）。第二十一頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四③豚鼠應(yīng)用量為60÷31.5=1.90g/只；1.90÷400/1000=4.762g/Kg。按體重計算，要達到等效，豚鼠的劑量為人用量的4.762÷0.857＝5.56（倍）。第二十二頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四④兔：60÷14.2＝4.225g/只；4.225÷1.5＝2.816g/Kg。按體重計算，要達到等效，兔的劑量應(yīng)為人用量的2.816÷0.857＝3.287（倍）。第二十三頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四⑤狗用量為60g÷3.1＝19.35g/只；19.35÷12=1.61g/Kg。按體重計算，要達到等效，狗的給藥量應(yīng)為人的1.61÷0.857＝1.88（倍）第二十四頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第二十五頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四噻嗪類第二十六頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四不同種類動物間用藥劑量換算表

（轉(zhuǎn)換因子計算法）某利尿中藥250g重大鼠的有效量為250mg/kg，試計算15kg犬的等效實驗劑量？犬的等效實驗劑量＝250mg/kg×6.9÷22=78.4mg/kg第二十七頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四不同種類動物間用藥劑量換算表

（體表面積/kg體重比值法）某利尿中藥250g重大鼠的有效量為250mg/kg，試計算15kg犬的等效實驗劑量？犬的等效實驗劑量＝250mg/kg×0.16÷0.47=85.1mg/kg第二十八頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四（3）根據(jù)文獻估計劑量如有相關(guān)的藥物，相似的復(fù)方，其使用劑量可作為參考。（4）通過預(yù)試估計劑量第二十九頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四5．給藥容量：小鼠口服：0.1ml-0.25ml/10g最大不超過0.4ml/10g其他途徑不超過0.25ml/10g。大鼠：10ml/kg,不超過2.0ml/100g其他途徑不超過1.0ml/100g.第三十頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四藥物溶液配置例：戊巴比妥鈉對小鼠腹腔注射的有效的麻醉劑量為40mg/kg。現(xiàn)有體重為20g左右的30只小鼠要麻醉。試問要稱量多少克的戊巴比妥鈉，設(shè)計的給藥容量為多少，配成怎樣濃度？第三十一頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四藥物溶液配置答：稱量戊巴比妥鈉30mg，加生理鹽水至7.5ml,使?jié)舛葹?mg/ml,小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)。或：稱量戊巴比妥鈉40mg，加生理鹽水至10ml,使?jié)舛葹?mg/ml,小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)。第三十二頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第四節(jié)對照藥

①合法性：《中國藥典》收載或符合部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)合法生產(chǎn)的藥物。②可比性：其功用、主治、劑型（給藥途徑）與受試藥相似。特殊情況下，在合理范圍內(nèi)可適當(dāng)靈活掌握。③擇優(yōu)選用：有多種同類藥可供選用時，應(yīng)擇優(yōu)選用公認(rèn)療效較好的藥物。第三十三頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四選擇的陽性對照藥要注意有無批準(zhǔn)文號。如：麝香保心丸：國藥準(zhǔn)字Z31020068生產(chǎn)單位：有效期：必須用有效期內(nèi)產(chǎn)品。恬爾心注射用：國藥準(zhǔn)字（2001）J53號：進口藥品注冊證號：BX20010122）復(fù)方丹參注射液：滬衛(wèi)藥準(zhǔn)字（1995）第014021號第三十四頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第五節(jié)實驗條件控制減少時間差異：動物生理活動有其晝夜節(jié)律，如小鼠夜間活動增加，白天活動減少。最好每批實驗在每天相同的時間測定。減少溫度差異：室溫穩(wěn)定、適宜。飲食控制：有些實驗需對動物禁食。第三十五頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第六節(jié)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和結(jié)果分析(一)極端數(shù)據(jù)（outliers）的處理：避免差錯形成極端數(shù)據(jù)。對可疑數(shù)據(jù)及時復(fù)測或復(fù)核,及時糾正差錯。在x±3s之外數(shù)據(jù)，可考慮舍棄。否則不應(yīng)隨便舍棄

-根據(jù)《新藥（西藥）臨床藥研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué)、藥理學(xué)毒理學(xué)）》

第三十六頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四(二)數(shù)據(jù)表達：一般應(yīng)至少有3位有效數(shù)字，標(biāo)準(zhǔn)差至少有2位有效數(shù)字，均數(shù)的小數(shù)位數(shù)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)差相同，出示的結(jié)果應(yīng)包括均數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)差，例數(shù)，P值情況（大于、小于、或具體P值）數(shù)字的精確度要與測量儀器所能達到的精確度一致。

第三十七頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四(三)數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析應(yīng)避免的差錯：1.量反應(yīng)資料：(1)兩組間實驗結(jié)果比較常用t檢驗（unpairedttest）。

第三十八頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四T值計算公式（通式）第三十九頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第四十頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四下列情況兩組間比較不能使用t檢驗:①方差不齊改用校正t值法（即t’檢驗）。方差齊性檢驗：▲如兩組的標(biāo)準(zhǔn)差相差一倍以上時不必檢驗，即可判斷為方差不齊。第四十一頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四▲通過計算，當(dāng)F>F0.05時可判斷為方差不齊。(式中S較大者為S1、n1，較小者為S2,n2)。F0.05也可通過可查“方差齊性檢驗F值表”獲得（注：與“方差檢驗F值表”不同）。第四十二頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四如：有兩組數(shù)據(jù),需統(tǒng)計有無顯著差異：甲組：11.5，14.1，12.3,10.8，13.0,13.2,13.912.3,10.6x±s：12.41±1.26(n=9)乙組：10.0,11.9,12.0,12.8,14.9,17.4,19.3,20.2,23.1x±s:15.73±4.48(n=9)查無應(yīng)舍數(shù)據(jù)。有無方差不齊：F=4.48×4.48/(1.26×1.26)=12.64

F0.05≈1.2+8/9+14/(9-3)=4.422F>F0.05說明兩組方差不齊，用t’檢驗。第四十三頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四方差不齊時的校正t’值計算公式第四十四頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四甲組：11.52±1.32(n=9)乙組：15.73±4.48(n=9)按上式計算t’=2.142f’=9.501f=10時t0.05=2.228f=9時t0.05=2.262因此,甲、乙兩組間無顯著差異。但以“t”檢驗，上述兩組數(shù)據(jù)f=9+9-2=16f=16時t0.05=2.120，將得出:兩組數(shù)據(jù)有顯著差異的錯誤結(jié)論。第四十五頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四第四十六頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四EXCEL軟件T檢驗過程：

選中fx→TTEST→顯示填寫框：

Array1B2:B11Array2C2:C11Tails2Type3Tails用于定義返回的分布尾數(shù):1代表單尾；2代表雙尾Type用于定義t檢驗的類型:1代表成對檢驗；2代表雙樣本等方差假設(shè)；3代表雙樣本異方差假設(shè)。第四十七頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四Array1

為第一個數(shù)據(jù)集。Array2

為第二個數(shù)據(jù)集。Tails

指示分布曲線的尾數(shù)。如果tails=1，函數(shù)TTEST使用單尾分布。如果tails=2，函數(shù)TTEST使用雙尾分布。Type

為t檢驗的類型。1成對檢驗2等方差雙樣本檢驗3異方差雙樣本檢驗第四十八頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四②數(shù)據(jù)明顯偏態(tài)時,不能用“t”檢驗，不用x±s表達。（改用中位數(shù)檢驗，用非參數(shù)統(tǒng)計法。如Mann-Whitney秩和檢驗，等級和檢驗，序值法等）。偏態(tài)簡便判斷法A：如均數(shù)兩側(cè)之差大于2×√n時不用檢驗，即可判斷為明顯偏態(tài)。（如

：15.1,17.9,18.2,14.3,16.5,19.7,18.6,17.4,18.1,40.8,38.9。x±s＝21.41±9.26，n=11,均數(shù)左邊9位、右邊2位，均數(shù)兩側(cè)之差為7，大于2×√11=6.63,上述一組數(shù)值為偏態(tài)，不可用正態(tài)檢驗。

第四十九頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四偏態(tài)簡便判斷法B:用公式R＝4×n–D2，D為均數(shù)兩側(cè)例數(shù)之差，n為例數(shù)，如R為負(fù)，表示數(shù)據(jù)肯定為偏態(tài)。如上述一組數(shù)據(jù):R＝4×11-7×7=-5,表示數(shù)據(jù)肯定為偏態(tài)。第五十頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四又如一組數(shù)據(jù)總數(shù)為50例，大于均數(shù)35例，小于均差15例。R＝4×50－（35－15）×（35－15）＝200－400＝－200，此組數(shù)據(jù)為偏差。③如有不定值（如>30，<10等）不用t檢驗，改為中位數(shù)表達，用非參數(shù)統(tǒng)計法。如Mann-Whitney秩和檢驗，等級和檢驗，序值法等。第五十一頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四(2)配對資料t檢驗：（pairedttest）適用情況：①同一批受試對象試驗前后的配對數(shù)據(jù)。②同一批受試對象身體兩個部位試驗測得的數(shù)據(jù)。③同一批受試對象用兩種檢驗方法的測試的結(jié)果。檢驗方法：t=（x/s）×√n第五十二頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四如某次對中藥提取物的降壓實驗結(jié)果如下（1pKa=7.5006mmHg）：用藥前:12.0,14.0,13.0,18.0,16.0,15.0,15.0,19.0

x±s＝15.3±2.4用藥后:10.0,11.0,13.0,16.0,13.0,14.0,13.0,17.0

x±s＝13.4±2.3差值：2.0,3.0,02.0,3.0,1.02.0,2.0,

x±s＝1.87±0.99(n=8)配對t檢驗

：t=（1.87/0.99）×√8=5.357p<0.01而如果直接將給藥前后的均數(shù)進行比較，兩者間并無顯著差異。第五十三頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四但進行配對t檢驗時，要確信除待分析的因素外，其他可控條件盡量一致。否則可分別取配對變化值或變化率;求均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差．同時設(shè)對照組，同樣處理后，再進行兩組間的t檢驗，這樣更能提高檢驗效率。第五十四頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四例：某藥給藥2周前后血壓變化如下，問該藥有無降壓作用？組1大鼠血壓（x±smmHg)給藥前180165190200192158175185178

180.3±13.3給藥后150140170160159130145153155

151.3±11.9變化302520403328303223

29.1±6.0

t=（19.1/6）×3=9.55f=9-1=8,t0.01=3.355p<0.01第五十五頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四在本例自身對照（自身前后配對）實驗時，同一個體在經(jīng)歷一段時間后（如2周），即使不作任何處理（給藥），所得指標(biāo)也可能有變化，為鑒別該組血壓變化是否為非藥物因素引起，實驗時宜設(shè)立一個平行對照組進行比較。這樣就有實驗組觀察前后和對照組觀察前后4組數(shù)據(jù)?？煞謩e求出給藥組和對照組的變化值（差值）或變化率及標(biāo)準(zhǔn)差，再進行兩組間的t檢驗。如：第五十六頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四組2大鼠血壓（x±smmHg)給對照液前

175165195205150145180171176173.6±19.2給對照液后160155185190145145171162165164.2±15.8血壓變化151010155099119.3±4.7配對t檢驗：t=（9.3/4.7）×3=5.936；f=9-1=8,t0.01=3.355P<0.01第五十七頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四兩組原始值間比較：給藥前：給藥組：180.3±13.3(n=9)對照組：173.6±19.2(n=8)t=0.860p>0.05給藥后：給藥組：151.3±11.9對照組：164.2±15.8t=1.957p>0.05

第五十八頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四兩組差值組間比較：組1：給藥前后差值：29.1±6.0組2：給對照液前后差值9.3±4.7t=7.794f=16,t0.05=2.120t0.01=2.921p<0.01第五十九頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四(3)方差分析（analysisofvariance,ANOVA)有時用某藥的不同劑量與同一對照組比較，并同時要分析不同劑量作用有無區(qū)別時，構(gòu)成了多組均數(shù)的組間比較，此時常使用單因素方差分析。使用方差分析時，仍然要首先考慮各組樣本是否符合正態(tài)分布，方差是否齊性，若符合方可進行分析，計算F值，分析總體是否有差異。若有，再進行組間兩兩比較，此時常用Q檢驗，(student-newman-keulstest)，也可用t檢驗。第六十頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四計量資料統(tǒng)計方法的選擇第六十一頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四2.質(zhì)反應(yīng)資料又稱計數(shù)資料。有時機體對藥物的反應(yīng)只有“是”或“否”兩種，如用藥后動物死與不死。翻正反射的存在或消失，某種病理癥狀（如驚厥）出現(xiàn)或不出現(xiàn)等，實驗結(jié)果可以是百分比或自然比，其顯著性檢驗一般采用卡方檢驗（2×2法）。第六十二頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四

有效無效總計有效率——————————————————甲藥35(a)15(b)50(a+b)70%乙藥25?25(d)50(c+d)50%——————————————————總計60(A+c)40(b+d)100(n)第六十三頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四四格表的自由度恒等于1。0.05的機率點為3.841。X2<3.841,

P>0.05,兩藥作用無顯著性差異。第六十四頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四樣本較?。▋山M總數(shù)<40例）或數(shù)據(jù)中有0或1時：不用卡方檢驗，而用精確概率法或簡化直接概率法。例：使用甲藥16例中5例出現(xiàn)不良反應(yīng)，使用乙藥16例無不良反應(yīng)，兩藥有無區(qū)別？

第六十五頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四組別有不良反應(yīng)無不良反應(yīng)合計甲藥5(a)11(b)16(a+b)乙藥0?16(d)16(c+d)合計5(a+c)27(b+d)32(a+b+c+d)第六十六頁，共七十三頁，編輯于2023年，星期四上式p=5!27!16!16