紫外可見分光光度計的性能檢驗

紫外可見分光光度計的性能檢驗第一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一、實驗?zāi)康?/p>

1、掌握紫外－可見分光光度計性能的檢驗方法

2、學(xué)會UV1100型紫外－可見分光光度計的使用方法

二、實驗原理對分光光度計進行性能檢查，以保證測定結(jié)果的準確。第二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、儀器與試劑

UV－1100型紫外－可見分光光度儀石英比色皿（一對）擦鏡紙蒸餾水

6mg/100mlK2Cr2O7溶液

0.002mol/molKMnO4溶液

第三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三四、實驗內(nèi)容及操作步驟

1、比色皿的配對性注入蒸餾水兩個比色皿分別λ＝440nm以一個比色皿為空白（T1＝100％）測定另一個比色皿的T2ΔT=T1-T2ΔT<0.5%ΔT>0.5%兩個比色皿配對兩個比色不配對，應(yīng)進行校正第四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

2、波長精度的檢查以蒸餾水為空白

測定KMnO4溶液的吸收曲線若測得的最大吸收波長在525±1nm以內(nèi)說明儀器波長精度符合使用要求5008000.40.2λ(nm)A0第五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

3、重復(fù)性的檢查以0.02mol/L的H2SO4為空白在257nm處同一K2Cr2O7溶液的T，連續(xù)測定7次測定求出極差若極差<0.5%儀器的重復(fù)性符合使用要求第六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

4.吸收值準確度的檢查λ＝235nm、257nm分別測定K2Cr2O7溶液吸光度并計算吸收系數(shù)以0.02mol/L的H2SO4為空白(T＝100%）313nm、350nm與下表規(guī)定的吸收系數(shù)比較若相對偏差在1%以內(nèi)說明儀器符合使用要求第七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三波長/nm

吸收系數(shù)235123.0～126.0257142.8～146.231347.0～50.3350105.5～108.5第八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三五、思考題1、同種比色皿透光度的差異對測定有何影響？2、檢查分光光度計的重復(fù)性對測定有什么實際意義？第九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三實驗二

吸收曲線的測繪及

吸收系數(shù)的測定

第十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一、實驗?zāi)康?/p>

1、掌握測繪吸收曲線的方法

2、學(xué)會測定吸收系數(shù)二、實驗原理

1、若溶劑固定不變，化合物吸收曲線所出現(xiàn)的λmax、λmin或λ(S)為一定值，且數(shù)目也一定，為鑒別化合物提供了有力的證據(jù)。

2、百分吸收系數(shù)是指當(dāng)溶液濃度為1%，液層厚度為1cm時的吸光度。即第十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、儀器與試劑

UV－1100型紫外－可見分光光度計石英比色皿（一對）

95%乙醇（A.R）

0.005%丹皮酚對照品溶液第十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三四、實驗內(nèi)容及操作步驟丹皮酚對照品10mg95％乙醇溶解定容至10ml搖勻精密吸取5ml置100ml量瓶95％乙醇定容作為母液備用母液中丹皮酚的含量為0.005%第十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三1、吸收曲線的測繪精密吸取母液1ml置10ml量瓶95％乙醇定容以95％乙醇為空白，進行光譜掃描，得到吸收曲線圖。2、吸收曲線的測繪利用上述溶液，在274nm波長處測定其吸光度并計算百分吸收系數(shù)。第十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三實驗三

分光光度法測定槐花中總黃酮的含量第十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一、實驗?zāi)康?/p>

1、掌握用標準曲線法測定槐花中總黃酮含量的方法

2、鞏固紫外－可見分光光度計的操作方法二、實驗原理黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等結(jié)構(gòu)可與金屬鹽類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有色配合物，可用于定量分析。第十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、儀器與試劑UV－1100型紫外－可見分光光度儀石英比色皿（一對）5%NaNO2溶液10%Al(NO3)3溶液NaOH試液

蘆丁對照品

槐花藥材

其余試劑均為分析純；

第十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三四、實驗內(nèi)容及操作步驟1、對照品溶液的制備加甲醇，水浴使溶解蘆丁對照品50mg置25ml量瓶中放冷，加甲醇至刻度，搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，搖勻即得（每1ml中含無水蘆丁0.2mg）第十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三2、標準曲線的制備精密量取對照品溶液0、1、2、3、4、5ml分別置25ml量瓶中各加H2O加5%NaNO21ml搖勻放置6min10%Al(NO3)31ml搖勻放置6min加加NaOH試液

10ml加水至刻度搖勻，放置15min至5ml第十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三λ=500nm以相應(yīng)試劑為空白測定吸光度（A）以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線吸光度濃度（mg/ml）第二十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三3、供試品溶液的制備槐花粗粉1g精密稱定置索氏提取器中加乙醚加熱回流至提取液無色放冷棄乙醚液加甲醇90ml加熱回流至提取液無色移至100ml量瓶中甲醇少量多次洗滌容器洗液并入量瓶中加甲醇至刻度搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，搖勻即得第二十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三4、樣品的測定精密吸取供試品溶液3ml置25ml量瓶中照標準曲線制備項下的方法自“加水至5ml”起從標準曲線上求出供試品溶液中蘆丁的重量，即得依法測定吸光度槐花中含總黃酮以無水蘆?。–27H30O16）計，不得少于8.0%。第二十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三五、注意事項

1、對照品和樣品應(yīng)同時顯色

2、顯色劑加入的順序、加入量和顯色時間要正確六、思考題

1.分光光度法有哪些影響因素？

2.試述標準曲線法的優(yōu)點。第二十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三實驗四、薄層板的制備第二十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一、實驗?zāi)康恼莆毡影宓闹瓢宸椒?。第二十五頁，共六十二頁，編輯?023年，星期三二、儀器與試劑天平（0.1g）研缽玻璃板10cm×20cmCMC-Na水溶液（3‰）蒸餾水薄層層析用硅膠GF254（青島海洋化工廠）第二十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、實驗內(nèi)容及操作步驟

1.洗板選取板面平整的玻璃板，洗凈后放置在干凈、平整的臺面上，陰干備用。2．勻漿將吸附劑1份（3.0g）和水3份在研缽中向同一方向研磨混合均勻。第二十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

3．鋪制將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒至玻璃板的一端，用研棒將勻漿引到玻板的各個邊緣，輕輕震動，使吸附劑均勻鋪開成一薄層。置水平臺上陰干。4．活化將陰干的薄層板至于110℃烘箱中活化30分鐘，置于有干燥器中備用。第二十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三四、思考題

1．薄層板的鋪制過程中應(yīng)注意哪些問題？

第二十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三實驗五薄層色譜定性分析

（五味子的定性鑒別）

第三十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一、實驗?zāi)康?/p>

1.掌握薄層色譜的定性分析方法。

2.熟悉薄層板的點樣方法。第三十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三二、實驗原理

中藥五味子中，五味子甲素為其主要有效成分之一，為了更好的進行定性鑒別，選用五味子甲素對照品和五味子對照藥材進行對照，根據(jù)相同的組分在相同的條件下，應(yīng)該有相同的顏色和比移值來作為定性鑒別的依據(jù)。五味子植株五味子藥材第三十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、儀器與試劑定量毛細管已制備好的薄層板（硅膠GF254

）展開缸所用試劑均為分析純五味子粉末定量毛細管雙槽展開缸對照品第三十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三四、實驗內(nèi)容及操作步驟1.供試品液的制備：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品液。2.對照藥材溶液的制備：取五味子對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。3.對照品溶液的制備：取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的對照品溶液。

第三十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

4.吸取上述三種溶液各2μl，點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。第三十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三五、思考題

1．如何克服薄層展開過程中的邊緣效應(yīng)？引起邊緣效應(yīng)的因素有哪些？

第三十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三實驗六、高效液相色譜儀的使用一、實驗?zāi)康恼莆崭咝б合嗌V儀的使用方法了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)第三十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三高效液相流程圖1溶劑貯器,2泵,3流量與速度檢測裝置,4進樣閥,5預(yù)柱(保護柱),6分離柱(色譜柱),7檢測器,8數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng),9廢液瓶第三十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三二、儀器與試劑

L-2000液相色譜儀（L-2400紫外檢測器）C18反相鍵合色譜柱（250mm×4.6mm）微量進樣器（25μl）過濾器（0.45μm）及脫氣裝置苯、甲苯、萘甲醇（色譜純）重蒸餾水第三十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、實驗內(nèi)容與步驟

（一）流動相的預(yù)處理

1．過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。

2．對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。（二）安裝色譜柱按色譜柱標示意流液方向安裝好色譜柱。（三）液相色譜儀的使用方法

1.啟動液相色譜儀第四十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

2.排除管道內(nèi)空氣

3.泵流速的設(shè)定

4.檢測器波長的設(shè)定

5.打開T2000P色譜工作站

6.色譜柱預(yù)平衡

7．進樣第四十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三8.數(shù)據(jù)采集完畢后，點擊停止進樣9.點擊“再處理”和“報告”圖標對圖譜進行再處理，出報告圖10.實驗完畢后沖洗色譜柱11.關(guān)閉工作站，關(guān)閉輸液泵電源，關(guān)閉檢測器電源、關(guān)閉儀器電源第四十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三練習(xí)液相色譜儀使用的色譜條件、樣品溶液和進樣量

色譜條件流動相為甲醇∶水（80∶20）；固定相:C18反相鍵合色譜柱；檢測波長為254nm；流速：1ml/min。樣品溶液含苯、甲苯、萘濃度分別為1μg/ml的甲醇溶液。進樣量：10μl。第四十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三四、思考題流動相在洗脫前為何要進行脫氣？第四十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三一、實驗?zāi)康?/p>

1.掌握利用高效液相色譜法進行定性及定量分析。

2.鞏固高效液相色譜儀的使用方法。實驗七、高效液相色譜定性及定量分析—中藥赤芍中芍藥苷的定性鑒別和含量測定

第四十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三二、實驗原理

1.采用與已知化合物對照,對組分進行定

性分析。

2.采用外標一點法進行含量測定。第四十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、儀器與試劑

L-2000液相色譜儀（L-2400紫外檢測器）

C18反相鍵合色譜柱（250mm×4.6mm）微量進樣器（25μl）芍藥苷對照品；赤芍藥材其余試劑均為分析純第四十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三

四、實驗內(nèi)容及操作步驟

色譜條件

C18反相鍵合色譜柱；流動相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液（40∶65）；檢測波長為230nm。

對照品溶液的制備

精密稱取五氧化二磷干燥36小時的芍藥苷對照品適量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

第四十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三供試品溶液的制備取本品粗粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，浸泡4小時，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品含芍藥苷（C23H28O11）不得少于1.8%。第四十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三五、思考題1．外標一點法的主要誤差來源是什么？2．紫外檢測器的優(yōu)缺點是什么？第五十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三實驗八、氣相色譜儀的使用一、實驗?zāi)康?.掌握氣相色譜儀的使用方法2.了解氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)第五十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三二、實驗原理氣相色譜法是采用氣體作流動相（載氣）流經(jīng)色譜柱進行分離分析的方法。主要由氣源部分、進樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。第五十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三三、儀器與試劑島津GC-2014氣相色譜儀（FID檢測器）樟腦對照品溶液試劑均為A.R純第五十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三四、實驗內(nèi)容及操作步驟

（一）啟動GC-2014氣相色譜儀（二）參數(shù)的設(shè)定（三）打開N2000色譜工作站（四）運行GC-2014氣相色譜儀（五）進樣第五十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三（六）待數(shù)據(jù)采集完畢后，點擊停止采集；（七）待樣品分析結(jié)束后，在離線處理數(shù)據(jù)，察看數(shù)據(jù)報告，打印報告。（八）關(guān)機第五十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三附:練習(xí)氣相色譜儀使用的色譜條件、樣品溶液和進樣量

色譜條件：聚乙二醇（PEG）-20M毛細管柱（柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚度0.25μm）；柱溫為160℃。樣品溶液樟腦對照品溶液。進樣量：1μl。第五十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期三五、

思考題使用氣相色譜儀時，應(yīng)該注意那些問題？第五十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，