河北醫(yī)大中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)04基本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目-21黨參對(duì)小鼠記憶獲得性障礙的改善作用跳臺(tái)法

實(shí)驗(yàn)二十一

黨參對(duì)小鼠記憶獲得性障礙的改善作用（跳臺(tái)法)

【目的】

學(xué)習(xí)記憶獲得性障礙模型的制作方法，掌握用跳臺(tái)法觀察中藥的益智作用。

【原理】

小鼠跳臺(tái)儀底面可以通電，底面上放置1個(gè)絕緣的跳臺(tái)。當(dāng)小鼠在一次訓(xùn)練中受到電擊時(shí)，跳上跳臺(tái)可逃避電擊，從而獲得記憶。記憶障礙模型組動(dòng)物在訓(xùn)練前注射膽堿受體阻斷劑——\t"/kecheng/2013/_blank"樟柳堿或東\t"/kecheng/2013/_blank"莨菪堿造成記憶障礙，在一定時(shí)間內(nèi)學(xué)習(xí)記憶能力下降，跳下潛伏期縮短，跳下次數(shù)增加。通過記憶障礙模型動(dòng)物可觀察補(bǔ)益藥復(fù)方黨參對(duì)小鼠記憶障礙的改善作用。

\t"/kecheng/2013/_blank"智力低下多見于虛證，是由于氣血虧損，\t"/kecheng/2013/_blank"心脾兩虛導(dǎo)致\t"/kecheng/2013/_blank"腎精不足，髓海不充所致。許多具有補(bǔ)益作用的中藥及其復(fù)方制劑常有益智、增強(qiáng)記憶和填髓補(bǔ)腦等功效。

【器材】

小鼠跳臺(tái)儀：為一個(gè)60cm×12cm×18cm的被動(dòng)回避反射箱，箱內(nèi)用不透明的黑色塑料板分隔成5間，箱底鋪以銅柵，銅絲直徑為2mm，間隔為5mm。每間左后方放置一個(gè)高和直徑均為405cm的橡皮墊，作為跳臺(tái)。可調(diào)變壓器、秒表5只、1ml注射器3支。

【藥品】

黨參10g/ml、東\t"/kecheng/2013/_blank"莨菪堿1mg/ml、腦復(fù)康10mg/ml。

【動(dòng)物】

小白鼠。

【方法】

用小鼠6只，雄性，體重為15±2g，按體重隨機(jī)分為3組，每組2只。分別為給藥組、模型組和對(duì)照組。首先將可調(diào)變壓器與跳臺(tái)儀相連，用變壓器控制電流強(qiáng)度。訓(xùn)練前10min，模型組、給藥組小鼠分別腹腔注射\t"/kecheng/2013/_blank"東莨菪堿2mg/kg，對(duì)照組腹腔注射等量的生理鹽水。訓(xùn)練時(shí)，同時(shí)將5只小鼠分別放入小室內(nèi)，適應(yīng)3min，然后通以36V電流。小鼠雙足同時(shí)接觸銅柵為觸電，視為錯(cuò)誤反應(yīng)。訓(xùn)練5min并記錄觸電次數(shù)。2h后重新測(cè)試，觀察小鼠記憶情況。測(cè)試時(shí)，先把小鼠放在跳臺(tái)上，記錄并比較5min內(nèi)跳下次數(shù)，作為記憶指標(biāo)。統(tǒng)計(jì)、分析并比較3或5min內(nèi)跳下次數(shù)及跳下潛伏期（將小鼠放到臺(tái)上開始計(jì)時(shí)，到第一次雙足觸電時(shí)間)作為記憶指標(biāo)，比較各組間差異。

【結(jié)果】按表記錄。黨參對(duì)\t"/kecheng/2013/_blank"東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的改善作用（±SD)組別5min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)潛伏期（s)對(duì)照組模型組給藥組

【注意】

（1)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持安靜，光線不宜過強(qiáng)，室溫應(yīng)控制在20～25℃；實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)2～3d。（2)實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物應(yīng)預(yù)先經(jīng)過挑選，兩前肢間皮膚電阻在150～300kΩ之間為宜，實(shí)驗(yàn)時(shí)各組間動(dòng)物應(yīng)交叉進(jìn)行，以減少時(shí)辰的影響。（3)實(shí)驗(yàn)過程中要及時(shí)清理動(dòng)物大小便，實(shí)驗(yàn)完成后跳臺(tái)儀底部要徹底清洗，擦干；銅柵上如污垢沉積會(huì)影響觸電效果。

此方法簡便易行，不需要復(fù)雜的技術(shù)設(shè)備，同時(shí)可以觀察5只小鼠的反應(yīng)，適用于初篩。缺點(diǎn)是動(dòng)物個(gè)體差異比較大。

【附】

記憶損傷模型的制備：中樞抑制藥、M受體阻斷劑、腦蛋白合成抑制劑以及缺氧均可制作各類型學(xué)習(xí)記憶缺損的動(dòng)物模型。例如：用戊巴比妥鈉15～30mg/kg，訓(xùn)練前30min腹腔給藥，或20～40%的乙醇0.1ml/10g訓(xùn)練前30min灌胃，均可制作小鼠記憶獲得性障礙模型；腦蛋白質(zhì)合成抑制劑環(huán)乙酰亞胺120mg/kg訓(xùn)練后腹腔給藥，或致缺氧劑\t"/kecheng/2013/_blank"亞硝酸鈉120mg/kg訓(xùn)練后皮下給藥，均可造成記憶鞏固障礙；上述乙醇于測(cè)試前30min灌胃給藥可造成小