白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)課件

實(shí)驗(yàn)一、白細(xì)胞計(jì)數(shù)

1.原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。2.試劑器材白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸2.0ml

10g/L亞甲藍(lán)3滴加蒸餾水至100ml器材

改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及專(zhuān)用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學(xué)顯微鏡。毛細(xì)血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序

操作步驟：1采血部位成人以左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。2輕輕按摩采血部位。 3用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。4緊捏刺血部位，使其自然充血。5用無(wú)菌刺針穿刺取血，動(dòng)作應(yīng)迅速，深度2～3mm，稍加擠壓以血液流出為宜。6用干棉球擦去第一滴血。7按需要依次采血。8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。

微量吸管的使用1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；2拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空氣；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指；4用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準(zhǔn)確），輕觸吸管下口吸去多余血量，使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度；5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；6拔出微量吸管棄入污物桶。實(shí)驗(yàn)一、白細(xì)胞計(jì)數(shù)38ml白細(xì)胞稀釋液。2輕輕按摩采血部位。2輕輕按摩采血部位。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及專(zhuān)用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學(xué)顯微鏡。大淋巴細(xì)胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍(lán)色，可見(jiàn)少量嗜苯胺藍(lán)顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細(xì)胞一側(cè)，染色較深。白細(xì)胞分類(lèi)瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負(fù)電的酸性伊紅（E-）離子。白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸2.微量吸管的使用細(xì)胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類(lèi)計(jì)數(shù)。8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。2輕輕按摩采血部位。白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）/4×10×20×1063將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指；白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）/4×10×20×1063將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指；6拔出微量吸管棄入污物桶。=N÷20×109/L3.操作步驟（1）加稀釋液用移液管向小試管內(nèi)加入0.38ml白細(xì)胞稀釋液。（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計(jì)數(shù)板及蓋片（動(dòng)作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。（4）充計(jì)數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細(xì)胞懸液，充入計(jì)數(shù)池內(nèi)。靜置2-3min，使細(xì)胞沉于計(jì)數(shù)池底面。（5）調(diào)試顯微鏡將計(jì)數(shù)板放置載物臺(tái)上，選擇（4×

）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線(xiàn)較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線(xiàn)，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10×），調(diào)節(jié)光亮

。（6）計(jì)數(shù)低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線(xiàn)細(xì)胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。結(jié)果計(jì)算白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）

/4×10×20×106

=N÷20×109/L用△.△×109/L（小數(shù)點(diǎn)后一位）表示5細(xì)胞計(jì)數(shù)原則大方格四邊壓線(xiàn)細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下，弓形移動(dòng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容原理試劑器材操作步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論診斷學(xué)實(shí)驗(yàn)二

白細(xì)胞分類(lèi)1.分類(lèi)原理：白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)是將血液制備成涂片，瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細(xì)胞的形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。通常分類(lèi)100個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算得出各種白細(xì)胞所占百分比2.瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負(fù)電的酸性伊紅（E-）離子。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。各種細(xì)胞成分的化學(xué)性質(zhì)不同，對(duì)染料的親和力也不一樣，故可呈不同的著色特點(diǎn)。3.器材光學(xué)顯微鏡推片，載玻片[試劑]Wright染液

Wright1.0g

甲醇600ml磷酸鹽緩沖液（PH6.4～6.8）香柏油[標(biāo)本來(lái)源]EDTA-K2抗凝全血3．白細(xì)胞分類(lèi)：細(xì)胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類(lèi)計(jì)數(shù)。分類(lèi)時(shí)要有秩序的連續(xù)進(jìn)行，避免主觀選擇視野。通常分類(lèi)計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算并報(bào)告各種白細(xì)胞所占比例。

結(jié)果記錄方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正中性粒細(xì)胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圓形，胞漿染粉紅色，核形一葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見(jiàn)，染成深紫紅色，胞漿中有許多細(xì)小均勻紫紅色顆粒。各類(lèi)成熟白細(xì)胞的形態(tài)學(xué)：

嗜酸性粒細(xì)胞（Eo）：較中性粒細(xì)胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質(zhì)粗糙染深紫紅色，胞漿內(nèi)充滿(mǎn)粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈桔紅色，有折光性。

嗜堿性粒細(xì)胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈蘭黑色。于光學(xué)顯微鏡下常見(jiàn)胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動(dòng)而脫顆粒所致；核呈淡紫紅色常看不清，呈桿狀或分葉狀。淋巴細(xì)胞（Ly）：胞體呈圓形，在成人血涂片中以小淋巴細(xì)胞為多見(jiàn)，核大呈深紫色致密而濃染，胞漿量極少；大淋巴細(xì)胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍(lán)色，可見(jiàn)少量嗜苯胺藍(lán)顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細(xì)胞一側(cè)，染色較深。

3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指；（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。（1）加稀釋液用移液管向小試管內(nèi)加入0.于光學(xué)顯微鏡下常見(jiàn)胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動(dòng)而脫顆粒所致；（6）計(jì)數(shù)低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線(xiàn)細(xì)胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負(fù)電的酸性伊紅（E-）離子。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。毛細(xì)血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序8采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。6用干棉球擦去第一滴血。白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸2.38ml白細(xì)胞稀釋液。1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；嗜酸性粒細(xì)胞（Eo）：較中性粒細(xì)胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質(zhì)粗糙染深紫紅色，胞漿內(nèi)充滿(mǎn)粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈桔紅色，有折光性。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指；3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指；白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸2.原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。

單核細(xì)胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上為12～20μm，胞體圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形多種多樣，最重要的特點(diǎn)是染色質(zhì)較細(xì)致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細(xì)小塵土樣顆粒。正常成人外周血白細(xì)胞分類(lèi)參考值：Ne50%～70%Ly20%～40%Mo3%～8%Eo0.5%～5%Ba0%～1%實(shí)驗(yàn)報(bào)告原理方法各類(lèi)細(xì)胞百分比報(bào)告討論3.操作步驟（1）加稀釋液用移液管向小試管內(nèi)加入0.38ml白細(xì)胞稀釋液。（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計(jì)數(shù)板及蓋片（動(dòng)作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。（4）充計(jì)數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細(xì)胞懸液，充入計(jì)數(shù)池內(nèi)。靜置2-3min，使細(xì)胞沉于計(jì)數(shù)池底面。（5）調(diào)試顯微鏡將計(jì)數(shù)板放置載物臺(tái)上，選擇（4×

）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線(xiàn)較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線(xiàn)，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10×），調(diào)節(jié)光亮

。（6）計(jì)數(shù)低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線(xiàn)細(xì)胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。結(jié)果計(jì)算白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）

/4×10×20×106

=N÷20×109/L用△.△×109/L（小數(shù)點(diǎn)后一位）表示實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容原理試劑器材操作步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論改良牛鮑血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及專(zhuān)用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學(xué)顯微鏡。分類(lèi)原理：白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)是將血液制備成涂片，瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細(xì)胞的形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。38ml白細(xì)胞稀釋液。白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）/4×10×20×1062拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空氣；（2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。（3）清潔計(jì)數(shù)板及蓋片（動(dòng)作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用?！鳌?09/L（小數(shù)點(diǎn)后一位）表示Eo0.10g/L亞甲藍(lán)3滴分類(lèi)時(shí)要有秩序的連續(xù)進(jìn)行，避免主觀選擇視野。嗜堿性粒細(xì)胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈蘭黑色。核形多種多樣，最重要的特點(diǎn)是染色質(zhì)較細(xì)致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細(xì)小塵土樣顆粒。瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負(fù)電的酸性伊紅（E-）離子。EDTA-K2抗凝全血原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。=N÷20×109/L于光學(xué)顯微鏡下常見(jiàn)胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動(dòng)而脫顆粒所致；3．白細(xì)胞分類(lèi)：細(xì)胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類(lèi)計(jì)數(shù)。分類(lèi)時(shí)要有秩序的連續(xù)進(jìn)行，避免主觀選擇視野。通常分類(lèi)計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，計(jì)算并報(bào)告各種白細(xì)胞所占比例。

結(jié)果記錄方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正嗜堿性粒細(xì)胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈蘭黑色。于光學(xué)顯微鏡下常見(jiàn)胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動(dòng)而脫顆粒所致；核呈淡紫紅色?？床磺?，呈桿狀或分葉狀。EDTA-K2抗凝全血瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，離解為帶正電的堿性美蘭（M+）和帶負(fù)電的酸性伊紅（E-）離子。38ml白細(xì)胞稀釋液。白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸2.6拔出微量吸管棄入污物桶。（5）調(diào)試顯微鏡將計(jì)數(shù)板放置載物臺(tái)上，選擇（4×）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線(xiàn)較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線(xiàn)，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10×），調(diào)節(jié)光亮。原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。EDTA-K2抗凝全血（4）充計(jì)數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細(xì)胞懸液，充入計(jì)數(shù)池內(nèi)。38ml白細(xì)胞稀釋液。白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸2.嗜酸性粒細(xì)胞（Eo）：較中性粒細(xì)胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質(zhì)粗糙染深紫紅色，胞漿內(nèi)充滿(mǎn)粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時(shí)呈桔紅色，有折光性。核呈淡紫紅色?？床磺澹蕳U狀或分葉狀。2輕輕按摩采血部位。2輕輕按摩采血部位。靜置2-3min，使細(xì)胞沉于計(jì)數(shù)池底面。細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；加蒸餾水至100ml（5）調(diào)試顯微鏡將計(jì)數(shù)板放置載物臺(tái)上，選擇（4×）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線(xiàn)較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線(xiàn)，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10×），調(diào)節(jié)光亮。大方格四邊壓線(xiàn)細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下，=N÷20×109/L（5）調(diào)試顯微鏡將計(jì)數(shù)板放置載物臺(tái)上，選擇（4×）低倍鏡，調(diào)節(jié)聚光器使光線(xiàn)較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線(xiàn)，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10×），調(diào)節(jié)光亮。大淋巴細(xì)胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍(lán)色，可見(jiàn)少量嗜苯胺藍(lán)顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細(xì)胞一側(cè)，染色較深。6用干棉球擦去第一滴血。白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）/4×10×20×10638ml白細(xì)胞稀釋液。1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣；=N÷20×109/LLy20%～40%38ml白細(xì)胞稀釋液。5用無(wú)菌刺針穿刺取血，動(dòng)作應(yīng)迅速，深度2～3mm，稍加擠壓以血液流出為宜。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；EDTA-K2抗凝全血1采血部位成人以左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。3將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動(dòng)快血液會(huì)吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開(kāi)示指；分類(lèi)時(shí)要有秩序的連續(xù)進(jìn)行，避免主觀選擇視野。5將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻；白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）/4×10×20×106白細(xì)胞總數(shù)=4大格白細(xì)胞數(shù)（N）/4