病毒感染的檢查方法與防治原則課件

病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：

1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學(xué)診斷采雙份血清二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)（cell

culture）

雞胚接種（egginoculation）

動物接種（animalinoculation）二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細(xì)胞培養(yǎng)

單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）

分類懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(gelimmuno-基因治療劑早期抗原的抗體早期抗體檢測（IgM）單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）化學(xué)提取或人工合成疫苗(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)diffusiontest)①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚（血凝抑制試驗）核酸擴(kuò)增技術(shù)pH變化減慢特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)

體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點：①對多種病毒敏感

②不帶異種蛋白(人源性)

③不帶病毒，無致瘤潛能

④可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高

②繁殖能力高，傳代時間長

③有致癌危險，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)2.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復(fù)雜3.動物接種

應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒1．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)治療性疫苗HSV/VZV無環(huán)鳥苷（NA）對一般病毒檢測意義不大光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），（三）病毒數(shù)量與感染性測定(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(gelimmuno-病毒＋中和抗體病毒失去感染性②不帶異種蛋白(人源性)抗原變異病毒基因的鑒定原代細(xì)胞（primarycell）第三節(jié)病毒感染的治療預(yù)防病毒性感染有哪些人工自動免疫制劑？（biologicalproducts）免疫細(xì)胞②繁殖能力高，傳代時間長③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？埃可病毒CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)?？刹《?-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)?？刹《?+)(4)細(xì)胞代謝改變

細(xì)胞代謝變慢

pH變化減慢2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大3.病毒血清學(xué)鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(gelimmuno-

diffusion

test)

——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定4.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測序（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

（plaqueformationtest）

3.50％組織細(xì)胞感染量

（50％tissueculture

infectiousdose,

TCID50）感染性病毒量(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定基因測序和生物對比三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用2.補(bǔ)體結(jié)合試驗

（complementfixationtest）

用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體

特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）第三節(jié)病毒感染的治療③不帶病毒，無致瘤潛能①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚特點：特異性高，抗體維持時間長①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；（plaqueformationtest）infectiousdose,TCID50）特點：特異性高，抗體維持時間長IFN-α、β、γ(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)——多種病毒鑒定化學(xué)提取或人工合成疫苗光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測序（三）早期抗體檢測可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體

早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動物免疫血清（biologicalproducts）

免疫細(xì)胞細(xì)胞因子

防治和診斷感染性疾病滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學(xué)提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品二、人工被動免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

細(xì)胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞

——LAK細(xì)胞

第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病化學(xué)制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

核苷類藥物作用機(jī)制

HSV/VZV

無環(huán)鳥苷（NA）病毒胸苷激酶NA一磷酸宿主細(xì)胞激酶

NA三磷酸

（缺乏糖環(huán)3’-OH基）病毒DNA聚合酶核酸鏈延伸被迫終止思考題分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？常用組織培養(yǎng)法有幾種？各有何應(yīng)用？病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？病毒性感染的快速診斷方法有哪些？預(yù)防病毒性感染有哪些人工自動免疫制劑？診斷病毒的核酸技術(shù)有哪些？

1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶一、人工主動免疫常用生物制品③為證實所分離的病毒的臨床意義(1)血凝抑制試驗（hemagglutination——多種病毒鑒定病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶亞單位疫苗（subunitvaccine）②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)常用組織培養(yǎng)法有幾種？各有何應(yīng)用？特點：①對多種病毒敏感④可傳50代左右TNF、CSFinfectiousdose,TCID50）特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒化學(xué)提取或人工合成疫苗(1)血凝抑制試驗（hemagglutination特點：特異性高，抗體維持時間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查防治和診斷感染性疾病(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(gelimmuno-核酸疫苗（nucleicacidvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）inhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防三、病毒感染的血清學(xué)診斷1．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic