薄層板,跑版注意事項

薄層色譜法---跑板之五兆芳芳創(chuàng)作.點樣用微量進樣器進行點樣.點樣前，先用鉛筆在層析上距末端2cm處輕輕畫一橫線，然后用毛細管吸取樣液在橫線上輕輕點樣，點的斑點較小，展開的色譜圖別離度好，顏色清楚.如果要重新點樣，一定要等前一次點樣殘存的溶劑揮發(fā)后再點樣（用電吹風的熱風吹干再點），以免點樣斑點過大.一般斑點直徑大于2mm，不宜超出5mm.點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干.底線距基線1—2.5cm,點間距離為lcm左右，樣點與玻璃邊沿距離至少1cm,為避免邊沿效應，.展開將點了樣的薄層板放在盛在有展開劑的展開槽中，由于毛細管作用，展開溶劑在薄層板上遲緩前進,前進至一定距離后,取出薄層板,樣品組分固移動速度不合而彼此別離.展開室應預飽和.為達到飽和效果,可在室中參加足夠量的展開劑,密封室頂?shù)纳w.展開劑一般為兩種以上互溶的有機溶劑,并且臨用時新配為宜.強烈振搖使混雜液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑.絕對不該該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑.混雜不均勻和沒有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗.各組成溶劑的比例準確度對不合的闡發(fā)任務有不合的要求，盡量達到實驗室儀器的最高精確度，比方：取1ml的溶劑，應使用1ml的單標移液管，薄層板點樣后,應待溶劑揮發(fā)完,再放人展開室中展開.④展開應密閉，展距一般為8—15cm.薄層板放入展開室時，展開劑不克不及沒過樣點.一般情況下，展開劑浸入薄層下端的高度不宜超出.⑤展開劑每次展開后，都需要改換，不克不及重復使用.（展開缸中得展開劑棄去，密封在容量瓶中得展開劑可在當天使用）⑥展開后的薄層板用適當?shù)霓k法，使溶劑揮發(fā)完全，然落后行檢視.⑦，當Rf值很大或很小時，應適當改動流動相的比例..斑點的檢出展開后的薄層板經(jīng)過枯燥后，經(jīng)常使用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點.對于無色組分，在用顯色劑時，顯色劑噴灑要均勻，量要適度.紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好.展開別離后，化合物在薄層板上的位置用比移值（Rf值）來暗示.化合物斑點中心至原點的距離與溶劑前沿至原點的距離的比值就是該化合物的Rf值.注意事項：一．預飽和分為2部分：1、展開缸的預飽和：在展開之前，使展開劑蒸汽在展開缸內飽和，使展開缸汽液狀態(tài)達到一定的穩(wěn)定狀態(tài)，此時尚未放薄層板.2、薄層板的預飽和：在展開缸飽和后，放入已經(jīng)點樣完畢的薄層板，進行飽和，使薄層板整體差別性減小.具體做法是：在雙槽層析玻璃缸內,將其中一個槽內倒入配好的展開劑,另一個槽內放入薄層板,蓋好上面的玻璃蓋,這時候就是在預飽和.關于飽和時間：按照展開劑而定.1、展開劑組分極性差別不大的且揮發(fā)性好的，時間可以短一些，一般15－20 分 鐘 便 可 ；2、極性差別大的，且揮發(fā)性差別大的，時間要長一些，一般要30－60分鐘；3、極性差別大的，且揮發(fā)性差別不大的，時間要長一些，一般要20－30分鐘；4、極性差別不大，且揮發(fā)性差不大的，時間可以短一些，一般要10－15分鐘；5、水飽和有機試劑或有機試劑飽和水的，時間一般都比較長，30－60分鐘.6、另外，大家打開封閉展開缸的速度要快，放板取板的速度也要快，不然預飽和的效果全被你前期的操縱給抹殺了?。《归_室應放在水平、穩(wěn)定的實驗臺上，不克不及有陽光直射，也不克不及在通風處放置，離開熱源，避免溫度動搖對別離倒霉；光敏物質的別離應將展開室置于暗處進行.三.點樣時間不該超出三分鐘.硅膠的硅醇基以氫鍵形式優(yōu)先吸附水，物理吸附使硅膠的活度下降，影響了弱極性物質的吸附，化合物的Rf值相應地增大.硅膠薄層的吸水速度很快，當用預先經(jīng)度日化的薄層板，在點樣進程中枯燥的薄層會立即吸附空氣中的水蒸氣，在數(shù)分鐘內達到平衡，吸附水蒸氣的量決定于點樣速度即流露在空氣中的時間和空氣的相對濕度.Dallas指出0.25mm厚、20cmx20cm的硅膠薄層板在50%相對濕度中放置約3min就失去活性的一半，而放置15min時吸附的水分已達到最大值.在用相同條件別離同一組化合物得到的結果不克不及重現(xiàn)時，必須考慮到相對濕度對展開的影響，特別是我國南北地區(qū)濕度相差很大；即便在同一實驗室冬夏季候不合濕度也有明顯不同，如果不注意濕度的影響就得不到預期的結果.展開時的最佳相對濕度規(guī)模決定于溶質和溶劑的極性，隨溶質和溶劑極性的增加相對濕度的規(guī)模也相應地增大，在用苯作展開劑時，適宜的相對濕度規(guī)模很窄，因此濕度對別離的影響十清楚顯；當用乙醚為展開劑時，相對濕度在20%-50%,時均可得到重現(xiàn)的結果；如用氯仿-異丙醇-25%氨水（45:45:10）為展開劑時，則相對濕度在20%-80%規(guī)模內可得到較好的重現(xiàn)性.這種不同來自展開室中展開劑蒸氣有取代吸附在薄層上水份子的趨勢，取代量決定于展開劑蒸氣的極性和量；苯為非極性溶劑，其取代作用小，因為苯與水極性相差很大，即便吸附水量有微小的變更也能引起Rf值的改動，甚至在薄層上形成“兩個前沿”而使色譜畸形.而在用極性溶劑如乙醇、甲醇或氨水為展開劑時，則吸附的水份子被大量取代，原來吸附的水分下降，這時平衡主要決定于高濃度的溶劑蒸氣.展開劑極性越大，薄層上吸附水蒸氣的影響越小，因此能在一