腫瘤基因治療的基本策略和常用方法整理課件

腫瘤基因治療的基本策略和常用方法一.腫瘤和基因治療的基本概念二.采用基因治療腫瘤的基本策略三.常采用的基因治療方法四.對未來腫瘤基因治療的展望Themaker:一.腫瘤和基因治療的基本概念1.腫瘤（Tumor）

機(jī)體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個細(xì)胞在基因水平上失去對其生長的正常調(diào)控，導(dǎo)致其克隆性異常增生而形成的異常病變。學(xué)界一般將腫瘤分為良性和惡性兩大類。2.基因治療指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的。也就是將外源基因通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將其插入病人的適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞中，使外源基因制造的產(chǎn)物能治療某種疾病。從廣義說，基因治療還可包括從DNA水平采取的治療某些疾病的措施和新技術(shù)。3.什么是腫瘤基因治療基因治療的經(jīng)典概念指通過外源基因?qū)巳梭w以糾正內(nèi)在的基因缺陷的療法。腫瘤基因治療不再局限于“糾正基因缺陷”，系指將外源的正?；?qū)巳梭w，達(dá)到直接或間接抑制或殺傷腫瘤細(xì)胞的目的?；蚴巧荆巧锏靡员３制溥B續(xù)性和穩(wěn)定性的物質(zhì)基礎(chǔ)。隨著對惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展分子機(jī)制研究的不斷深人，出于對腫瘤是一種基因病的認(rèn)識，加之惡性腫瘤的發(fā)病率和病死率較高，這使得惡性腫瘤的基因治療成為近年來基因治療研究的主要內(nèi)容和熱點(diǎn)。4.與基因治療有關(guān)幾個概念a.基因毒癌發(fā)生發(fā)展的第一步是活化致癌物，改變細(xì)胞內(nèi)的DNA，導(dǎo)致原癌基因的移位及擴(kuò)增，這些特殊基因的翻譯，使帶有這些異常基因細(xì)胞的某些特性得以專一表達(dá)，一個特殊的化學(xué)物對一系列細(xì)胞有誘變及DNA修復(fù)作用者，稱為基因毒。目前人類已知的致癌物均為基因毒。b.原癌基因(前癌基因)細(xì)胞癌基因存在于細(xì)胞基因組內(nèi)，激活前的細(xì)胞癌基因稱為原癌基因(前癌基因)，一旦原癌基因激活成癌基因便會引起細(xì)胞癌變，癌基因激活后，通過其表達(dá)產(chǎn)物改變細(xì)胞生長和分化規(guī)律，誘發(fā)細(xì)胞癌變。細(xì)胞癌基因被激活的途徑很多，如啟動子插人，基因重排和擴(kuò)增，基因點(diǎn)突變和DNA分子中去甲基化等。c.抑癌基因正常細(xì)胞中存在抑制腫瘤發(fā)生的基因，稱為抑癌基因。抑癌基因的存在從最初的一個發(fā)現(xiàn)中得到證實(shí)，即一個腫瘤細(xì)胞和一個正常細(xì)胞融合成的雜交細(xì)胞，往往不具有細(xì)胞表型，即使兩種不同的腫瘤細(xì)胞雜交，也可能是非腫瘤性的，只有正常的親代失去某些基因之后，其子代才會發(fā)生腫瘤。后來，通過限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)分析及分子克隆技術(shù)的研究證實(shí)，正常細(xì)胞中有一類對細(xì)胞增殖起負(fù)性調(diào)節(jié)作用的基因，如大腸癌中的p53基因，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤和骨肉瘤中的Rb基因。這兩種基因也是目前被確認(rèn)并研究最為深人的抑癌基因。如將正常的Rb基因轉(zhuǎn)人骨肉瘤細(xì)胞，Rb基因表達(dá)增高，細(xì)胞分裂幾乎完全抑制，將Rb基因轉(zhuǎn)人前列腺細(xì)胞，對正常細(xì)胞的生長無影響，但抑制了細(xì)胞的癌變，所以當(dāng)這一類的抑癌基因發(fā)生丟失，失活或變異時(shí)，就會促進(jìn)細(xì)胞惡變。二.采用基因治療腫瘤的基本策略

目前國內(nèi)外惡性腫瘤基因治療基本策略包括：1.免疫性基因治療2.病因性基因治療3.溶瘤腺病毒基因治療4.自殺基因治療等1.免疫性基因治療

a.免疫性基因治療的對象:在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，免疫系統(tǒng)發(fā)育未完善（3-4歲）和免疫機(jī)能衰退（老年人的細(xì)胞免疫和體液免疫功能均衰退）而出現(xiàn)兩個腫瘤發(fā)生的年齡高峰期。胸腺發(fā)育不良（Digeoge’s）綜合癥或咽囊綜合癥是因胸腺發(fā)育不良而導(dǎo)致細(xì)胞免疫系統(tǒng)停留在未分化階段，這類患兒兼有細(xì)胞免疫缺陷和體液免疫缺陷的共濟(jì)失調(diào)，惡性腫瘤的發(fā)生率高達(dá)10%。由此說明細(xì)胞免疫和體液免疫功能的正?；蚧钚栽鰪?qiáng)在抗惡性腫瘤的發(fā)生中是不可缺少的。選擇性IgA缺乏：患者血漿中IgA極低，而IgG、IgM與細(xì)胞免疫正常，組織中缺乏分泌IgA的漿細(xì)胞，約10%發(fā)生胃癌。當(dāng)IgM缺乏時(shí)，約有8%患者發(fā)生惡性腫瘤以及淋巴網(wǎng)狀惡性疾病。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)患者免疫球蛋白很低，抗體產(chǎn)生受到嚴(yán)重影響時(shí)，臨床上病人除了反復(fù)發(fā)生化膿性感染外，其患者發(fā)生惡性腫瘤率為8-10%，常見類型為淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)腫瘤（56%）和胃腸道上皮癌（26%）。Wiskott-Aldrich綜合癥：（嚴(yán)重混合型免疫缺陷綜合癥）以血小板減少出血，反復(fù)感染為臨床特征，早期細(xì)胞免疫完善，隨之淋巴細(xì)胞減少，體外淋轉(zhuǎn)反應(yīng)缺乏，病兒很少活過青春期，約8-10%發(fā)生淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)腫瘤。

1.2免疫性基因治療的方法

研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中存在著機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的免疫耐受狀態(tài)，而這種狀態(tài)可能源于腫瘤細(xì)胞本身的免疫性不強(qiáng)（如MHC表達(dá)不足），也可源于抗原遞全細(xì)胞（APC）不能提供足夠的共刺激信號（如B7）或者機(jī)體免疫因子分泌不足，在免疫性基因治療中通過以下三種方法糾正機(jī)體免疫的耐受狀態(tài)。

a.將某些細(xì)胞因子（如IL-2、TNF-a等）的基因轉(zhuǎn)染到機(jī)體免疫細(xì)胞（如TIL、LAK細(xì)胞及細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞）中，大幅度提高機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的識別和反應(yīng)能力。使用細(xì)胞因子的基因治療在一定程度上克服了細(xì)胞因子注射療法需反復(fù)多次應(yīng)用，副作用嚴(yán)重等缺點(diǎn)，療效有較大幅度提高?？梢赃@樣認(rèn)為：腫瘤免疫細(xì)胞因子基因治療的開展，為惡性腫瘤患者帶來生的希望，其療效的穩(wěn)定，治療的簡單、安全，已成為腫瘤免疫基因治療研究的最常用方法而獨(dú)樹一幟，前景是令業(yè)內(nèi)人士振奮的。

b.腫瘤細(xì)胞存在功能性MHCI類抗原和共刺激信號表達(dá)不足，將一些與免疫識別有關(guān)的基因（如HLA、B7等）轉(zhuǎn)染到體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，經(jīng)照射后再植入腫瘤患者體內(nèi);或者表達(dá)HLA-B7的病毒載體或質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)復(fù)合物直接注射到瘤體內(nèi)，以大幅度增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫原性，誘導(dǎo)宿主的免疫反應(yīng)而提高宿主的免疫監(jiān)視功能和對腫瘤細(xì)胞的攻擊能力，達(dá)到治愈率的提高具有積極作用。c.制備腫瘤KNA疫苗采用編碼特異抗原的基因直接注入人體，通過其在機(jī)體內(nèi)的表達(dá)從而激發(fā)機(jī)體對編碼抗原的免疫反應(yīng)。應(yīng)用癌胚抗原（CEA）制備的DNA疫苗在實(shí)驗(yàn)中顯示出一定效果，研究的前景可觀，進(jìn)入臨床藥理實(shí)驗(yàn)只是時(shí)間問題而毋庸置疑。2惡性腫瘤的病因性基因治療腫瘤病因性基因治療主要針對癌基因和抑癌基因，其治療策略是抑制、阻斷癌基因的表達(dá)或替代，恢復(fù)抑癌基因的功能。從而達(dá)到治療腫瘤的目的。

a.針對癌基因治療

采用反義寡核苷酸、核酸、三鏈結(jié)構(gòu)寡核苷酸（Triplex-forming

oligonucleotides，TFO）抑制腫瘤細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄，抑制癌基因的表達(dá)將有可能使腫瘤的基因表達(dá)調(diào)控回復(fù)到正常并使細(xì)胞重新分化或者誘發(fā)其凋亡（Apoptosis）。由于轉(zhuǎn)條是遺傳信息放大的過程，因此對癌基因的表達(dá)抑制來說更為有效，其治療前景是極為樂觀的。

b.針對抑癌基因治療

替代或恢復(fù)由于缺失或突變而丟失的抑癌基因（Tumorsuppressorgene）的正常功能是腫瘤病因性治療的手段而被世人所公認(rèn)。利用抑癌基因治療腫瘤，在體外的實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)中取得較好的療效；但在體內(nèi)由于腫瘤體積較大；內(nèi)環(huán)境又十分復(fù)雜，基因轉(zhuǎn)移率限制等因素的干擾，抑癌基因治療的確切療效不盡人意值得進(jìn)一步研究。3溶瘤腺病毒基因治療

a.溶瘤腺病毒的特點(diǎn)：①具有復(fù)制性，因此所需病毒顆粒較??；②能擴(kuò)展至鄰邁腫瘤細(xì)胞，作用范圍廣泛；③溶瘤腺病毒可產(chǎn)生溶瘤和抗腫瘤免疫反應(yīng)；④溶瘤腺病毒由于能夠復(fù)制故存在著不安全因素（轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散、活化）對腫瘤患者造成損害而失去可控性應(yīng)引起注意和警惕。

b.溶瘤腺病毒的主要分類：①利用腫瘤特異表達(dá)的調(diào)控序例的表達(dá)：黑色素瘤表達(dá)酪氨酸酶，肝細(xì)胞癌表達(dá)甲胎蛋白（AFP），結(jié)直腸癌表達(dá)癌胚抗原（CEF）從而控制病毒復(fù)制。②利用腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性，如腺病毒復(fù)制時(shí)抵抗宿主細(xì)胞凋亡可能相關(guān)的EIB55K蛋白發(fā)生變異或缺失時(shí)，病毒復(fù)制的宿主細(xì)胞就會發(fā)生凋亡，從而使復(fù)制不能完成。代表為E1B55K剔除的d11520（onyx-015）腺病毒，它能夠在抑癌基因P53缺陷的腫瘤細(xì)胞中復(fù)制，從而達(dá)到裂鮮腫瘤細(xì)胞，同時(shí)又不損傷正常細(xì)胞的目的其特異的選擇性十分明顯。值得期待的是D11520和TH101病毒已進(jìn)入III期臨床試驗(yàn)。這時(shí)于癌癥的預(yù)防的作用將產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。4自殺基因治療一些來自病毒或細(xì)菌的基因具有一些特殊的功能，其表達(dá)產(chǎn)物可將原先對哺乳動物細(xì)胞無毒的或毒性極低的前藥（Prodrug）轉(zhuǎn)換成毒性產(chǎn)物，導(dǎo)致這些細(xì)胞的凋亡。這類基因即稱為“自殺基因”（Suicidegene）由于自殺基因表達(dá)的產(chǎn)物多是能夠?qū)⑶八幋x為毒性產(chǎn)物的酶，故又稱為“前藥轉(zhuǎn)換酶基因”或“藥物敏感基因”。根據(jù)細(xì)胞自殺機(jī)制，將自殺基因作為治療性目的基因應(yīng)用于腫瘤治療的研究稱為腫瘤的自殺基因方式。在臨床實(shí)踐中設(shè)計(jì)腫瘤細(xì)胞特異性自殺機(jī)制的基因治療方案對腫瘤治療具有重大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

a.自殺基因療法中酶和前藥

b.自殺基因的特異性控制

要高效及特異性表達(dá)腫瘤自殺基因?qū)δ[瘤細(xì)胞的作用，自殺基因必須局現(xiàn)于腫瘤細(xì)胞以選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞。一是利用免疫脂質(zhì)體，受體介導(dǎo)法進(jìn)行定向基因轉(zhuǎn)移或直接瘤內(nèi)注射。二是利用腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)HSV-TK基因（I型單純皰疹病毒胸腺激酶）選擇性治療腦腫瘤。三是利用腫瘤特異表達(dá)的調(diào)控序例，如酪氨酸酶、甲胳蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA），在自殺基因的上游安插特異的轉(zhuǎn)條調(diào)節(jié)序例，可以實(shí)現(xiàn)自殺基因的特異表達(dá)，從而克服傳統(tǒng)化學(xué)治療藥物作選擇性問題和較為嚴(yán)重的細(xì)胞毒問題，使腫瘤治療有較大幅度的進(jìn)展。c.旁觀者效應(yīng)（Bystandereffect）

用外源性自殺基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后，未能轉(zhuǎn)染的腫瘤細(xì)胞可因鄰近的少數(shù)腫瘤細(xì)胞攜帶有自殺基因而被前體藥物殺傷。研究發(fā)現(xiàn)，旁觀者效應(yīng)產(chǎn)生與自殺基因的種類、腫瘤細(xì)胞的類型及數(shù)量有關(guān)。TK/GCV系統(tǒng)的旁觀者效應(yīng)是比較明顯和突出的。

三.常采用的基因治療方法a.基因修飾腫瘤細(xì)胞“疫苗”療法

將某些細(xì)胞因子基因如IL-2、IL-4、TNF-α、INF-γ、GM-CSF等轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，可使腫瘤細(xì)胞表達(dá)活性細(xì)胞因子。轉(zhuǎn)染細(xì)胞因子基因的腫瘤細(xì)胞基體內(nèi)致瘤性喪失，耐動物預(yù)接腫這種轉(zhuǎn)基因腫瘤細(xì)胞后，該動物對再接種的同種腫瘤有抵抗作用。能分泌細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)基因腫瘤細(xì)胞具有腫瘤疫苗作用，成為新型的腫瘤“疫苗”。這種腫瘤疫苗的作用機(jī)制是由于細(xì)胞因子表達(dá)后，一方面促進(jìn)腫瘤表達(dá)特異抗原并誘發(fā)宿主抗腫瘤細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng);另一方面分泌的細(xì)胞因子增強(qiáng)CTL和其他抗癌效應(yīng)細(xì)胞的作用。b.基因修飾TIL的過繼免疫療法將細(xì)胞因子導(dǎo)入TIL細(xì)胞中，活化后的TIL具有顯著抗自身腫瘤的作用，回輸體仙后有聚集于腫瘤部位的傾向，攜帶的抗癌免疫增強(qiáng)性細(xì)胞因子基因在腫瘤局部表達(dá)量增加，同時(shí)還避免全身大劑量投用IL-2、TNF-α等細(xì)胞因子所引起的嚴(yán)重毒副反應(yīng)。目前已將TNF-α基因?qū)隩IL，并在癌癥患者中進(jìn)行臨床試驗(yàn)。c.免疫增強(qiáng)基因療法

是將MHC1類抗原基因經(jīng)體內(nèi)導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，增加其免疫原性，有效地激活機(jī)體抗癌免疫反應(yīng)，降低腫瘤細(xì)胞的致瘤性。

d.原位修飾腫瘤免疫原性的基因療法直接在體內(nèi)原位修飾腫瘤免疫原性，誘導(dǎo)腫瘤特異性細(xì)胞毒反應(yīng)，同時(shí)腫瘤組織的CTL可產(chǎn)生一種“旁觀者效應(yīng)”(bystandereffect),即CTL不僅可以殺傷轉(zhuǎn)導(dǎo)基因陽性腫瘤細(xì)胞，還可以殺傷轉(zhuǎn)導(dǎo)基因陰性腫瘤細(xì)胞，使受基因治療的瘤灶消退時(shí)，其他未治療的瘤灶也會消退。e.癌基因拮抗療法

腫瘤的發(fā)生與癌基因的激活和抑癌基因的失活有關(guān)，可以通地阻斷癌基因的表達(dá)或恢復(fù)抑癌基因的功能來抑制腫瘤的發(fā)展或恢復(fù)其正常表型。四.對未來腫瘤基因治療的展望目前，在基因?qū)胼d體方面出現(xiàn)了兩大主流：一是非病毒載體系統(tǒng)；二是病毒載體系統(tǒng)。a.非病毒載體主要包括改性的天然高分子和合成高分子兩大類。由于非病毒系統(tǒng)導(dǎo)入基因的效率相對較差，故在基因治療臨床試驗(yàn)中的使用率不到20%；但非病毒載體的生物安全性較好，特別是靶向性的脂質(zhì)體、靶向性的多聚物，以及脂質(zhì)體/多聚物/DNA復(fù)合物等新產(chǎn)品的出現(xiàn)，結(jié)合電脈沖、超聲等新技術(shù)，明顯提高了導(dǎo)入效率和靶向性，是今后非病毒載體發(fā)展的重要方向。病毒載體在基因治療領(lǐng)域的應(yīng)用最為廣泛，大約70%的治療方案采用了病毒載體，包括各種逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒、皰疹病毒、痘病毒等。這些病毒載體有各自的特點(diǎn)，同時(shí)也存在各自的局限性。此外，還必須深入研究逆轉(zhuǎn)錄病毒誘發(fā)癌癥的機(jī)理，構(gòu)建更為安全的載體?；谕粗亟M和基因定點(diǎn)糾錯原理，在DNA水平的原位修復(fù)(靶向性)是遺傳性疾病基因治療的理想措施。與基因治療載體系統(tǒng)相比，治療基因表達(dá)調(diào)控的研究和進(jìn)展相對滯后，主要受制于載體的包裝容量。隨著人類基因組計(jì)劃的進(jìn)展與完成，新的基因座控制區(qū)、隔離子、內(nèi)含子、特異的啟動子、增強(qiáng)子等的發(fā)現(xiàn)與分離，必定帶動基因治療向前發(fā)展。

1、最孤獨(dú)的時(shí)光，會塑造最堅(jiān)強(qiáng)的自己。

2、把臉一直向著陽光，這樣就不會見到陰影。

3、永遠(yuǎn)不要埋怨你已經(jīng)發(fā)生的事情，要么就改變它，要么就安靜的接受它。

4、不論你在什么時(shí)候開始，重要的是開始之后就不要停止。

5、通往光明的道路是平坦的，為了成功，為了奮斗的渴望，我們不得不努力。

6、付出了不一定有回報(bào)，但不付出永遠(yuǎn)沒有回報(bào)。

7、成功就是你被擊落到失望的深淵之后反彈得有多高。

8、為了照亮夜空，星星才站在天空的高處。

9、我們的人生必須勵志，不勵志就仿佛沒有靈魂。

10、拼盡全力，逼自己優(yōu)秀一把，青春已所剩不多。

11、一個人如果不能從內(nèi)心去原諒別人，那他就永遠(yuǎn)不會心安理得。

12、每個人心里都有一段傷痕，時(shí)間才是最好的療劑。

13、如果我不堅(jiān)強(qiáng)，那就等著別人來嘲笑。

14、早晨給自己一個微笑，種下一天旳陽光。

15、沒有愛不會死，不過有了愛會活過來。

16、失敗的定義：什么都要做，什么都在做，卻從未做完過，也未做好過。

17、當(dāng)我微笑著說我很好的時(shí)候，你應(yīng)該對我說，安好就好。

18、人不僅要做好事，更要以準(zhǔn)確的方式做好事。

19、我們并不需要用太華麗的語言來包裹自己，因?yàn)槲覀円鲎钫鎸?shí)的自己。

20、一個人除非自己有信心，否則無法帶給別人信心。

21、為別人鼓掌的人也是在給自己的生命加油。

22、失去金錢的人損失甚少，失去健康的人損失極多，失去勇氣的人損失一切。

23、相信就是強(qiáng)大，懷疑只會抑制能力，而信仰就是力量。

24、那些嘗試去做某事卻失敗的人，比那些什么也不嘗試做卻成功的人不知要好上多少。

25、自己打敗自己是最可悲的失敗，自己戰(zhàn)勝自己是最可貴的勝利。

26、沒有熱忱，世間便無進(jìn)步。

27、失敗并不意味你浪費(fèi)了時(shí)間和生命，失敗表明你有理由重新開始。

28、青春如此華美，卻在煙火在散場。

29、生命的道路上永遠(yuǎn)沒有捷徑可言，只有腳踏實(shí)地走下去。

30、只要還有明天，今天就永遠(yuǎn)是起跑線。

31、認(rèn)真可以把事情做對，而用心卻可以做到完美。

32、如果上帝沒有幫助你那他一定相信你可以。

33、只要有信心，人永遠(yuǎn)不會挫敗。

34、珍惜今天的美好就是為了讓明天的回憶更美好。

35、只要你在路上，就不要放棄前進(jìn)的勇氣，走走停停的生活會一直繼續(xù)。

36、大起大落誰都有拍拍灰塵繼續(xù)走。

37、孤獨(dú)并不可怕，每個人都是孤獨(dú)的，可怕的是害怕孤獨(dú)。

38、寧可失敗在你喜歡的事情上，也不要成功在你所憎惡的事情上。

39、我很平凡，但骨子里的我卻很勇敢。

40、眼中閃爍的淚光，也將化作永不妥協(xié)的堅(jiān)強(qiáng)。

41、我不去想是否能夠成功，既然選了遠(yuǎn)方，便只顧風(fēng)雨兼程。

42、寧可自己去原諒別人，莫等別人來原諒自己。

43、踩著垃圾到達(dá)的高度和踩著金子到達(dá)的高度是一樣的。

44、每天告訴自己一次：我真的很不錯。

45、人生最大的挑戰(zhàn)沒過于戰(zhàn)勝自己！

46、愚癡的人，一直想要別人了解他。有智慧的人，卻努力的了解自己。

47、現(xiàn)實(shí)的壓力壓的我們喘不過氣也壓的我們走向成功。

48、心若有陽光，你便會看見這個世界有那么多美好值得期待和向往。

49、相信自己，你能作繭自縛，就能破繭成蝶。

50、不能強(qiáng)迫別人來愛自己，只能努力讓自己成為值得愛的人。

51、不要拿過去的記憶，來折磨現(xiàn)在的自己。

52、汗水是成功的潤滑劑。

53、人必須有自信，這是成功的秘密。

54、成功的秘密在于始終如一地忠于目標(biāo)。

55、只有一條路不能選擇――那就是放棄。

56、最后的措手不及是因?yàn)楫?dāng)初游刃有余的自己

57、現(xiàn)實(shí)很近又很冷，夢想很遠(yuǎn)卻很溫暖。

58、沒有人能替你承受痛苦，也沒有人能搶走你的堅(jiān)強(qiáng)。

59、不要拿我跟任何人比，我不是誰的影子，更不是誰的替代品，我不知道年少輕狂，我只懂得勝者為。

60、如果你看到面前的陰影，別怕，那是因?yàn)槟愕谋澈笥嘘柟狻?/p>

61、寧可笑著流淚，絕不哭著后悔。

62、覺得自己做得到和做不到，只在一念之間。

63、跌倒，撞墻，一敗涂地，都不用害怕，年輕叫你勇敢。

64、做最好的今天，回顧最好的昨天，迎接最美好的明天。

65、每件事情都必須有一個期限，否則，大多數(shù)人都會有多少時(shí)間就花掉多少時(shí)間。

66、當(dāng)你被壓力壓得透不過氣來的時(shí)候，記住，碳正是因?yàn)閴毫Χ兂砷W耀的鉆石。

67、現(xiàn)實(shí)會告訴你，不努力就會被生活給踩死。無需找什么借口，一無所有，就是拼的理由。

68、人生道路，絕大多數(shù)人，絕大多數(shù)時(shí)候，人都只能靠自己。

69、不是某人使你煩惱，而是你拿某人的言行來煩惱自己。

70、當(dāng)一個人真正覺悟的一刻，他放棄追尋外在世界的財(cái)富，而開始追尋他內(nèi)心世界的真正財(cái)富。

71、失敗并不意味你浪費(fèi)了時(shí)間和生命，失敗表明你有理由重新開始。

72、人生應(yīng)該樹立目標(biāo)，否則你的精力會白白浪費(fèi)。