高考一輪植物組織培養(yǎng)技術(shù)演示文稿

高考一輪植物組織培養(yǎng)技術(shù)演示文稿當(dāng)前第1頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)高考一輪植物組織培養(yǎng)技術(shù)當(dāng)前第2頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)植物的組織培養(yǎng)當(dāng)前第3頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)在無菌培養(yǎng)的條件下，將離體的植物器官（根，莖，葉，花，果實(shí)等）、組織（形成層，花藥組織等）、細(xì)胞（體細(xì)胞，生殖細(xì)胞等）以及原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，并給予適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，使其長(zhǎng)成完整植株的過程。

考點(diǎn)一植物組織培養(yǎng)的基本過程一、基本概念1、植物組織培養(yǎng):植物組織培養(yǎng)的原理:植物細(xì)胞的全能性當(dāng)前第4頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)

2、外植體：從活體植株上切下的，用于組織培養(yǎng)的細(xì)胞、組織和器官。一般包括莖尖、根、莖、葉、花、種子等器官以及他們形成的體細(xì)胞胚等材料。當(dāng)前第5頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)

3、脫分化：

已經(jīng)高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞，在切割損傷和培養(yǎng)物內(nèi)外因素的共同作用下，逐漸喪失原來的分化結(jié)構(gòu)和功能，最后形成無組織的細(xì)胞團(tuán)或愈傷組織的過程。當(dāng)前第6頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)4、愈傷組織：

在人工培養(yǎng)基上由外植體脫分化形成的一團(tuán)無序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞。（具有細(xì)胞分裂能力）5、胚狀體：

在離體植物細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)過程中，由一個(gè)或一些體細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和發(fā)育過程，形成的與合子胚相類似的結(jié)構(gòu)。當(dāng)前第7頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)6、再分化：

已經(jīng)脫分化的細(xì)胞在一定條件下，又可經(jīng)過愈傷組織或胚狀體，再分化出根和芽，形成完整植株，這一過程叫作再分化。7、不定芽：凡從葉、根、或莖節(jié)間等通常不形成芽的部位生出的芽，則統(tǒng)稱為不定芽

當(dāng)前第8頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)當(dāng)前第9頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)二、影響植物組織培養(yǎng)的因素1、植物材料的選擇煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)比較難同一植物材料的年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。當(dāng)前第10頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)2、離體的植物組織和細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對(duì)特殊，需配置不同的培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有機(jī)物、植物激素當(dāng)前第11頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)MS固體培養(yǎng)基成分及比例當(dāng)前第12頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)討論：你能說出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持培養(yǎng)基的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類。

當(dāng)前第13頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)①常用的植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素和赤霉素生長(zhǎng)素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）細(xì)胞分裂素類：激動(dòng)素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素類：赤霉酸（GA3）3、植物激素的影響當(dāng)前第14頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)②生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素作用植物中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長(zhǎng)素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)的趨勢(shì)使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但不利分化先使用細(xì)胞分裂素后使用生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率高記憶口訣：生前分裂不分化，生后分裂又分化，同時(shí)提高分化率。當(dāng)前第15頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：>有利于根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：＝促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)③生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)使用，用量的比例對(duì)植物細(xì)胞發(fā)育方向的影響4、pH、溫度、光照pH控制在5.8左右，溫度控制在18－22。C,每日用日光燈照射12h.記憶口訣：生大根，分大芽，等愈傷。當(dāng)前第16頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)三、植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長(zhǎng)素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素<生長(zhǎng)素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光當(dāng)前第17頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)考點(diǎn)一植物組織培養(yǎng)的基本過程【回扣教材】

1．細(xì)胞分化：在植物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在___

上都會(huì)出現(xiàn)

的差異，形成這些差異的過程叫

。

2．脫分化：由

的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生_

的過程，稱為植物細(xì)胞的

。形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定性細(xì)胞分化高度分化愈傷組織脫分化(去分化)當(dāng)前第18頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)

3．愈傷組織：細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種__

的呈

_的薄壁細(xì)胞。

4．再分化：脫分化產(chǎn)生的_

繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成

等器官，叫再分化。

5．影響植物組織培養(yǎng)的因素

(1)

的選擇直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。對(duì)于

植物材料，材料的

、保存時(shí)間的_

等也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花的組織培養(yǎng)，一般選擇未開花植株的

的側(cè)枝。高度液泡化無定形狀態(tài)愈傷組織根或芽植物材料同一種年齡長(zhǎng)短莖上部新萌發(fā)當(dāng)前第19頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)

(2)適宜的培養(yǎng)基(________________)，主要成分包括：_

；

，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；

，如甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素以及蔗糖；常常添加植物激素，__

和

是

細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的

激素。

(3)pH、溫度、光照等條件也很重要。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在

左右，溫度控制在_

，并且每日用日光燈照射

。N、P、K、Ca、Mg、S微量元素有機(jī)物生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素啟動(dòng)關(guān)鍵性5.818～22℃12hMS培養(yǎng)基當(dāng)前第20頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)【典例精析】【例1】下面關(guān)于植物組織培養(yǎng)的敘述，正確的是()A．葉肉細(xì)胞脫分化后可形成無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞B．葉肉細(xì)胞經(jīng)再分化過程可形成愈傷組織C．通過植物組織培養(yǎng)，可培育出性狀更優(yōu)良的品種D．植物體的任何一個(gè)體細(xì)胞經(jīng)離體培養(yǎng)都表現(xiàn)出全能性【解析】B錯(cuò)，愈傷組織是經(jīng)脫分化產(chǎn)生的。C錯(cuò)，植物組織培養(yǎng)屬無性繁殖，產(chǎn)生的后代性狀一般與親本性狀相同。D錯(cuò)，植物體上的病老細(xì)胞一般不再具有全能性。A當(dāng)前第21頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)一、制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營(yíng)養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般使用4。C保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備.1、配置各種母液考點(diǎn)二菊花組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)操作當(dāng)前第22頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)①無機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存.②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液.③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量.當(dāng)前第23頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)2、配置培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml.①配制培養(yǎng)液②調(diào)PH③培養(yǎng)基的分裝由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素.3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌.當(dāng)前第24頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)1、選材：菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝.二、外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右.當(dāng)前第25頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動(dòng)2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗.③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液.當(dāng)前第26頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)三、接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅擦洗工作臺(tái)并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種當(dāng)前第27頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)當(dāng)前第28頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)4、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種。②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和光照條件.③插入時(shí)應(yīng)注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分.當(dāng)前第29頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。當(dāng)前第30頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)四、培養(yǎng)1、愈傷組織的培養(yǎng)從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織需經(jīng)過2周時(shí)間。2周之內(nèi)可以看到外植體上逐漸長(zhǎng)出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。首次培養(yǎng)愈傷組織時(shí)，恒溫箱的門應(yīng)該關(guān)閉不必見光，因?yàn)樵跓o光條件下愈傷組織長(zhǎng)的更快。2周后，培養(yǎng)基成分接近耗盡，必須更換培養(yǎng)基，進(jìn)行繼代培養(yǎng).當(dāng)前第31頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)繼代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)愈傷組織的相同，在嚴(yán)格的無菌條件下，將愈傷組織連同原來的外植體一起移到新培養(yǎng)基上。愈傷組織的繼代培養(yǎng)一代為20d。如果延長(zhǎng)時(shí)間，培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少，外植體會(huì)分泌有毒物質(zhì)，造成自身中毒。如果愈傷組織長(zhǎng)到直徑為1－1.5cm時(shí)，就可以進(jìn)行試管苗培養(yǎng)，否則還需進(jìn)行第二代繼代培養(yǎng).2、愈傷組織的繼代培養(yǎng)在愈傷組織繼代培養(yǎng)期間，將恒溫箱的門打開，讓愈傷組織見光，愈傷組織見光后顏色可以轉(zhuǎn)為綠色.當(dāng)前第32頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)3、試管苗的培養(yǎng)當(dāng)愈傷組織長(zhǎng)到一定大小后，可以更換培養(yǎng)基，進(jìn)行試管苗的見光培養(yǎng).當(dāng)前第33頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)五、移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日.1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間.3、移栽珍珠巖：固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培.幼苗長(zhǎng)壯后，移栽到土壤中.當(dāng)前第34頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)六、栽培幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長(zhǎng)情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花.當(dāng)前第35頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（一）對(duì)接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格當(dāng)前第36頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。在整個(gè)操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境的？當(dāng)前第37頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)課題延伸1、一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng).2、實(shí)例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季.當(dāng)前第38頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)考點(diǎn)二菊花的組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)操作【回扣教材】菊花植物組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)操作，歸納如下：1．制備MS固體培養(yǎng)基：具體操作是配制各種_____、配制培養(yǎng)基、_______。2．外植體_______。3．接種：要先消毒________(70%酒精)，所有的接種操作都必須在_________旁進(jìn)行。母液滅菌消毒工作臺(tái)酒精燈當(dāng)前第39頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)4．培養(yǎng)：________中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間___________，培養(yǎng)溫度控制在______________，每日用日光燈光照12h。5．_______：打開培養(yǎng)瓶封口膜培養(yǎng)―→_______清洗根部培養(yǎng)基―→移植到消毒蛭石或珍珠巖等環(huán)境―→移栽到________中。6．栽培：觀察并記錄幼苗__________，適時(shí)澆水、施肥，直至_________。無菌箱定期消毒18～22℃移栽流水土壤生長(zhǎng)情況開花當(dāng)前第40頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)【典例精析】【例2】在菊花的組織培養(yǎng)操作完成了3～4天后，觀察同一溫室中的外植體，發(fā)現(xiàn)有的瓶?jī)?nèi)外植體正常生長(zhǎng)，有的瓶?jī)?nèi)外植體死亡，你認(rèn)為外植體死亡的原因不可能是()A．接種時(shí)所用的培養(yǎng)基滅菌不徹底B．接種工具灼燒后未待冷卻就接種外植體C．愈傷組織形成初期沒有給予充足的光照D．培養(yǎng)過程中保持溫度、pH的適宜，但沒有及時(shí)調(diào)整各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素的比例【解析】愈傷組織形成初期不需要給予光照，這不是導(dǎo)致外植體死亡的原因。C當(dāng)前第41頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)單倍體育種的過程？花藥離體培養(yǎng)（N）單倍體植株（N）秋水仙素處理，使染色體翻倍植株（2N）特點(diǎn)：1明顯縮短育種年限2后代植株都為純合子。正常植株（2N）考點(diǎn)三月季的花藥培養(yǎng)知識(shí)回顧當(dāng)前第42頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)花的結(jié)構(gòu)花托花萼花瓣雄蕊花藥花絲雌蕊柱頭花柱子房知識(shí)回顧當(dāng)前第43頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育1雄蕊一、基礎(chǔ)知識(shí)2花粉的概念:由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細(xì)胞.當(dāng)前第44頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)小孢子四分體時(shí)期單核期雙核期被子植物花粉發(fā)育過程當(dāng)前第45頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)小孢子母細(xì)胞花粉母細(xì)胞小孢子減數(shù)分裂有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核有分絲裂2精子1個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞4個(gè)4個(gè)4個(gè)4個(gè)4個(gè)8個(gè)（小孢子四分體時(shí)期單核居中期單核靠邊期花粉粒雙核期）被子植物花粉的發(fā)育過程4個(gè)4個(gè)4個(gè)當(dāng)前第46頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)1、關(guān)于被子植物花粉發(fā)育的說法，不正確的是（）A、花粉粒是在花藥中的花粉囊里形成的B、被子植物精子的形成是直接減數(shù)分裂的結(jié)果C、被子植物的花粉的發(fā)育要經(jīng)歷四分體時(shí)期、單核期、雙核期等階段D、花粉粒在發(fā)育過程中，核先位于細(xì)胞一側(cè)，再移到細(xì)胞中央BD對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練當(dāng)前第47頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根原因：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比當(dāng)前第48頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)1、材料的選擇不同植物的誘導(dǎo)成功率不同.

同一植物的不同生理狀況也對(duì)誘導(dǎo)成功率有直接的影響.（一般選月季的初花期）合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間）2、培養(yǎng)基的組成（MS培養(yǎng)基+不同比例的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)激素）此外，植株生長(zhǎng)條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等(三)、影響花藥培養(yǎng)的主要因素注意：選擇最合適的花粉發(fā)育時(shí)期:單核期①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動(dòng)，給材料消毒帶來困難困難；③挑選單核期花藥方法：應(yīng)當(dāng)選擇完全未開放的花蕾，微生物少，易消毒。當(dāng)前第49頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)實(shí)驗(yàn)操作一、材料的選取二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng)當(dāng)前第50頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)（一）材料選取

2、通過鏡檢來確定是否處于適宜的發(fā)育期。方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色)。1、從花藥看：月季的初花期從花粉看：?jiǎn)魏似?/p>

從花蕾看：完全未開放的

花藥（載玻片上）→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成紅色）花藥（在卡諾氏固定液中處理20min）→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢（花粉粒的細(xì)胞核被染成藍(lán)黑色）當(dāng)前第51頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)（二）材料的消毒5、無菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）當(dāng)前第52頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難？

答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。

為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難？討論：當(dāng)前第53頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)（三）接種和培養(yǎng)

1、滅菌后花蕾，要在

下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。3、通常每瓶接種花藥

，溫度控制在

左右，

。幼小植株形成后才

。2、在剝離花藥時(shí)，要盡量

（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時(shí)還要徹底

，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。4、進(jìn)一步鑒定和篩選：常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化無菌條件不損傷花藥去除花絲7-10個(gè)25℃不需要光照需要光照主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的當(dāng)前第54頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)花藥培養(yǎng)技術(shù)相同點(diǎn)1、培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。2、都經(jīng)過了脫分化不同點(diǎn)1、離體培養(yǎng)的外植體為體細(xì)胞。2、有絲分裂的過程，染色體數(shù)量不變。1、花粉是生殖細(xì)胞，得到的單倍體植株，弱小且高度不育。2、秋水仙素處理，染色體加倍，恢復(fù)正常的染色體數(shù)，為純種。當(dāng)前第55頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)課題成果評(píng)價(jià)一、選材是否恰當(dāng)二、無菌技術(shù)是否過關(guān)三、接種是否成功課外拓展延伸人工種子當(dāng)前第56頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)人工種子胚狀體人工種皮人工胚乳自然種子胚種皮胚乳當(dāng)前第57頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)胚狀體包埋在膠囊內(nèi)形成球狀結(jié)構(gòu)：膠質(zhì)化合物薄膜——種皮營(yíng)養(yǎng)成分和植物激素

——人工胚乳胚狀體——新植物的幼體優(yōu)點(diǎn)：

快速繁殖，解決作物繁殖能力差、結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題。固定雜種優(yōu)勢(shì)。當(dāng)前第58頁\共有63頁\編于星期五\14點(diǎn)考點(diǎn)三月季的花藥培養(yǎng)【回扣教材】1．花粉是________的生殖細(xì)胞，是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過___________形成的。2．被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷_______________時(shí)期、_____期和