薄層色譜基礎(chǔ)知識(shí)及斑點(diǎn)異常

薄層色譜基礎(chǔ)知識(shí)Zhuhaikangabc及斑點(diǎn)異常的原因和克服1當(dāng)前第1頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)

薄層色譜操作的流程結(jié)果判定顯色展開點(diǎn)樣薄層板2當(dāng)前第2頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備什么是固定相？固定相3當(dāng)前第3頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備常用固定相1、聚酰胺2、硅膠3、硅澡土4、氧化鋁5、纖維素6、其他4當(dāng)前第4頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備聚酰胺1、什么是聚酰胺？2、聚酰胺適合那些化合物的分離？適用于多元酚類化合物分離，如黃酮，醌類，酚酸，含羰基的化合物等5當(dāng)前第5頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備硅膠1、什么是硅膠2、硅膠適合酸性和堿性等化合物的分離6當(dāng)前第6頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備硅膠硅膠G硅膠H/硅膠N硅膠GF245硅膠HF2543、實(shí)驗(yàn)室硅膠有哪些型號(hào)硅膠S7當(dāng)前第7頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)硅膠G和硅膠S薄層板的制備1.硅膠G是指硅膠粉+15%煅石膏。2.硅膠S是指硅膠粉+15%淀粉。8當(dāng)前第8頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)硅膠H或硅膠N薄層板的制備是指純硅膠粉，沒有添加任何粘合劑9當(dāng)前第9頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)硅膠H和硅膠G的應(yīng)用薄層板的制備1物質(zhì)是有色的，在日光看2物質(zhì)沒有顏色但可以利用顯色劑顯色3.可以熒光顯色10當(dāng)前第10頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)硅膠HF254和硅膠GF254薄層板的制備1.是指添加了熒光劑，如硫化鎘等。

2.應(yīng)用范圍：物質(zhì)有熒光，在254波長紫外下看其熒光；物質(zhì)沒熒光，在254波長紫外下看暗斑（熒光淬滅）11當(dāng)前第11頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備無黏合劑自制板含黏合劑12當(dāng)前第12頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的配制先將稱好的CMC-Na加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,再加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時(shí)間短.

13當(dāng)前第13頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的濃度溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實(shí)際操作中0.4％～0.5％最為實(shí)用，濃度高了將來顯色時(shí)如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了鋪出來的板子不結(jié)實(shí)，不好保存

14當(dāng)前第14頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的存放注意放置時(shí)間太長的CMC-Na溶液可能會(huì)發(fā)黃，而且可能有霉菌出現(xiàn)，最好不要使用。

15當(dāng)前第15頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層板的制備操作：除另有規(guī)定外，是指將1份固定相和3份水溶液，研磨混合，置玻璃板上使涂布均勻，平臺(tái)上于室溫下晾干，活化后，置有干燥器中備用。制板16當(dāng)前第16頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)注意點(diǎn)1.沿同一方向研磨混合，避免產(chǎn)生氣泡2.厚度為0.2－0.3mm，涂層薄，點(diǎn)樣容易過載；涂層厚，顯色不那么明顯3.室溫下在水平位置放置，待薄層發(fā)白近干

薄層板的制備17當(dāng)前第17頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)注意點(diǎn)5.研磨時(shí)間6.鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。

薄層板的制備18當(dāng)前第18頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)活化2.在105－110度活化30分鐘。3.一般檢識(shí)水溶性成分或一些極性大的成分時(shí)，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活化即可貯存?zhèn)溆谩?/p>

薄層板的制備1.薄層板為何要進(jìn)行“活化”？19當(dāng)前第19頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的點(diǎn)樣點(diǎn)樣器20當(dāng)前第20頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的點(diǎn)樣潔凈、干燥點(diǎn)樣環(huán)境21當(dāng)前第21頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的點(diǎn)樣點(diǎn)樣的形狀1、圓點(diǎn)2、條帶狀22當(dāng)前第22頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的點(diǎn)樣點(diǎn)樣的距離10－15mm8－10mm>5mm直徑不大于2mm寬度4－8mm>8mm直徑不大于4mm寬度5－10mm自制板高效板23當(dāng)前第23頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的點(diǎn)樣點(diǎn)樣的注意點(diǎn)1.不要弄破薄層板2.點(diǎn)樣量大時(shí)，少量多次，3.點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干24當(dāng)前第24頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的展開展開將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，密封25當(dāng)前第25頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的展開展開劑配制2.混合展開劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù)使用,如需分層，則按要求放置分層后取需要的一相（上層或下層），備用

1.把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。最好不要把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。26當(dāng)前第26頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的展開預(yù)飽和、預(yù)平衡展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持15－30分鐘27當(dāng)前第27頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的展開展開距離展開至規(guī)定距離（一般為8～15cm）28當(dāng)前第28頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)薄層色譜的顯色顯色與檢視1.供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2.有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在356nm紫外光燈下觀察熒光色譜。3.對(duì)于可見光下無色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如GF254板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜29當(dāng)前第29頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)1、拖尾現(xiàn)象2、邊緣效應(yīng)3、S形及波形斑點(diǎn)

4、念珠狀斑點(diǎn)

5、斑點(diǎn)與對(duì)照品對(duì)不上薄層色譜中斑點(diǎn)的異常異?，F(xiàn)象6、其它30當(dāng)前第30頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)拖尾原因斑點(diǎn)異常1.點(diǎn)樣量過載2.點(diǎn)樣圓點(diǎn)未重合3.展開劑4.薄層析5.其他31當(dāng)前第31頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)拖尾斑點(diǎn)異常與克服1.點(diǎn)樣量過載任何吸附劑，它們的負(fù)載化合物的能力是有一定限度的，因此點(diǎn)樣過量而超載后，過剩的化合物被拋在后面，形成拖尾現(xiàn)象克服方法：A.點(diǎn)樣時(shí)可以點(diǎn)成條帶狀B.選用稍厚一點(diǎn)的板32當(dāng)前第32頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)拖尾斑點(diǎn)異常與克服2.點(diǎn)樣圓心未重合樣點(diǎn)雖然在同一垂直線上但樣點(diǎn)上下圓心沒有重合，致使樣點(diǎn)呈近橢圓形，也是形成拖現(xiàn)象的原因之一

克服方法：點(diǎn)樣位置要準(zhǔn)確，預(yù)先設(shè)計(jì)好點(diǎn)樣的位置，然后用鉛筆作好標(biāo)記，每次點(diǎn)樣對(duì)準(zhǔn)圓點(diǎn)33當(dāng)前第33頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)拖尾斑點(diǎn)異常與克服3.展開劑的配制34當(dāng)前第34頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)拖尾斑點(diǎn)異常與克服4.薄層板為了提高樣品的分離度和減少斑點(diǎn)的拖尾，鋪板時(shí)在硅膠中加入某些酸（如硼酸，草酸），堿（如氫氧化鈉），鹽（如磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉）等將硅膠板改性

克服方法：硅膠預(yù)制板可用浸板的辦法改性

35當(dāng)前第35頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)邊緣效應(yīng)2、薄層板3、展開劑未預(yù)飽和斑點(diǎn)異常1、點(diǎn)樣邊距4、其他36當(dāng)前第36頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)邊緣效應(yīng)斑點(diǎn)異常與克服1.點(diǎn)樣邊距37當(dāng)前第37頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)邊緣效應(yīng)斑點(diǎn)異常與克服2.薄層板薄層板厚薄不均勻，兩邊厚或者兩邊薄都是形成邊邊緣效應(yīng)的原因之一克服方法：選用符合要求的薄層板。（符合要求的薄層板應(yīng)該在反射光下板面平滑均勻，無氣泡，灰塵或顆粒，透射光下薄層紋理均勻細(xì)膩）38當(dāng)前第38頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)邊緣效應(yīng)斑點(diǎn)異常與克服3.預(yù)飽和在薄層板上一般是邊緣上的展開劑較容易揮發(fā),如果這幾個(gè)有機(jī)溶劑的揮發(fā)性能差異比較大,那么就會(huì)造成薄層板上邊緣和中間展開劑比例的差異而產(chǎn)生展開速度不一致的現(xiàn)象克服方法：展開前要充分飽和

39當(dāng)前第39頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)波形斑點(diǎn)S形斑點(diǎn)斑點(diǎn)異常S形及波形斑點(diǎn)40當(dāng)前第40頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)S形斑點(diǎn)斑點(diǎn)異常S形斑點(diǎn)是指含多咱成分的樣品層析時(shí)，其斑點(diǎn)不是順次分布于原點(diǎn)至展開前沿的垂直線上，而是呈S形分布于垂直線兩側(cè)。41當(dāng)前第41頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)波形斑點(diǎn)

斑點(diǎn)異常波形斑點(diǎn)：是指某些含多種成分的樣品液，順次點(diǎn)于同一起始線上，展開后，這些成分相同的斑點(diǎn)不吃不開直線狀平行于起始線，而是呈波浪形。42當(dāng)前第42頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)S形及波形斑點(diǎn)斑點(diǎn)異常2.為避免上述現(xiàn)象的出現(xiàn)，應(yīng)選用厚薄均勻的薄層板1.產(chǎn)生原因：多數(shù)是因?yàn)楸影搴癖〔粍颉?3當(dāng)前第43頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)念珠狀斑點(diǎn)斑點(diǎn)異常念珠狀斑點(diǎn)是指化合物斑點(diǎn)之間距離小，相互連接呈念珠狀44當(dāng)前第44頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)念珠狀斑點(diǎn)異常與克服產(chǎn)生原因及克服方法1.樣品中成分過多，在下定長度的薄層板上，排布不開，彼此重疊?？蛇m當(dāng)增加層析板長度，使斑點(diǎn)距離加大或采用雙向?qū)游觯顾煞窒騼蓚€(gè)方向展開可以避免念珠狀斑點(diǎn)的出現(xiàn)。

2.多次點(diǎn)樣時(shí)，點(diǎn)樣中心不重合，形成復(fù)斑。應(yīng)以適當(dāng)濃度供試液一次點(diǎn)樣，若多次點(diǎn)樣，點(diǎn)樣中心必須重合。45當(dāng)前第45頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)Rf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常1.溫度2.濕度3.手工制板4.溶劑質(zhì)量46當(dāng)前第46頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)Rf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服1.溫度溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。47當(dāng)前第47頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)Rf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服2.濕度48當(dāng)前第48頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)Rf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服2.濕度濕度的影響，主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸49當(dāng)前第49頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)Rf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服濕度的控制50當(dāng)前第50頁\共有53頁\編于星期六\10點(diǎn)Rf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服手工制板由于手工制的板的技巧不同，所制備的薄層板的質(zhì)量不同造成重現(xiàn)性差51