中藥分析概論

姚美村中山大學(xué)藥學(xué)院第十一章中藥分析概論

BriefIntroductionofTCMAnalysis學(xué)習(xí)要求掌握部分：1、掌握中藥分析的特點(diǎn)2、樣品前處理和純化方法3、中藥鑒別試驗(yàn)和主要的含量測(cè)定方法4、中藥指紋圖譜及其研究方法熟悉部分：1、中藥主要檢查項(xiàng)目和浸出物2、中藥中有害物質(zhì)的測(cè)定方法了解部分：1、中藥體內(nèi)動(dòng)態(tài)及代謝組學(xué)研究方法YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@目錄中藥分析的特點(diǎn)12鑒別實(shí)驗(yàn)3檢查4含量測(cè)定5中藥安全性相關(guān)的質(zhì)量控制項(xiàng)目6中藥指紋圖譜和特征圖譜7中藥分析的樣品處理方法中藥體內(nèi)分析8什么是中藥？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中藥ChineseMedicine（中醫(yī)藥）TraditionalChineseMedicine（TCM，傳統(tǒng)中醫(yī)藥）ChineseMateriaMedica（CMM，中藥）以中醫(yī)藥學(xué)理論體系的術(shù)語表述其性能、功效和使用規(guī)律，并且按中醫(yī)藥學(xué)理論指導(dǎo)其臨床應(yīng)用的藥物。中醫(yī)使用的藥物稱之為中藥？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中醫(yī)藥理論中藥藥性：性（四氣）、味（五味）、歸經(jīng)（臟腑經(jīng)絡(luò)）等。冰片：辛、苦,微寒。歸心、脾、肺經(jīng)。單味藥有性味歸經(jīng)，復(fù)方呢？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中醫(yī)藥理論配伍理論：君臣佐使？（復(fù)方配伍原則）復(fù)方丹參：丹參、三七、冰片大處方（>5味）如何區(qū)分和控制質(zhì)量？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中醫(yī)藥理論整體觀（holistictheory）：系統(tǒng)觀？小檗堿代表黃連？黃酮類代表黃芩？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中醫(yī)藥理論辨證論治：YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@PrecisionMedicine？中醫(yī)藥現(xiàn)代化？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中醫(yī)藥現(xiàn)代化的優(yōu)勢(shì)和不足優(yōu)勢(shì)：

臨床有效

毒副作用小

費(fèi)用低？不足：

質(zhì)量不穩(wěn)定

成分不清

作用機(jī)理不明

YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)！中國(guó)藥典2015年版I部藥材和飲片植物油脂和提取物成方制劑和單味制劑

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)第一節(jié)中藥分析的特點(diǎn)一、以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的整體性1、中藥藥性2、君臣佐使3、整體觀4、。。。。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@二、中藥成分具復(fù)雜性，藥效成分非單一性YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第一節(jié)中藥分析的特點(diǎn)三、中藥材質(zhì)量具有多變性

五倍子鞣質(zhì)（＞80%）槐米蘆?。ǎ?0%）長(zhǎng)春花長(zhǎng)春新堿（百萬分之一）YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第一節(jié)中藥分析的特點(diǎn)四、中藥炮制、制劑工藝及輔料具有多樣性，雜質(zhì)來源途徑多第一節(jié)中藥分析的特點(diǎn)

例：三黃瀉心湯干浸膏（大黃/黃連/黃芩）

常壓減壓逆浸透成分濃縮濃縮噴霧小檗堿34.537.594.5%黃連堿6.312.093.7%黃芩苷77.477.698.5%第二節(jié)中藥分析的樣品處理方法YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@含量測(cè)定檢查鑒別取樣中藥分析的一般程序前處理一、中藥分析的前處理方法根據(jù)作用機(jī)制，可分為：液固提取法，Liquid-SolidExtraction，LSE液液提取法，Liquid-LiquidExtraction，LLE水蒸氣蒸餾法，SteamDistillation，SD超臨界流體提取法，SupercriticalFluidExtraction,SFEYaoMeicun,TelEmail:Lssymc@1、液固提取法（LSE）YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@用于皂苷類正丁醇氯仿乙醚、石油醚醋酸乙酯也稱萃取法－－利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解度的不同用于生物堿類用于黃酮類用于揮發(fā)油2、液液提取法（LLE）3、水蒸氣蒸餾（SD）用于提取揮發(fā)油，小分子生物堿等4、超臨界流體提取法（SFE）超臨界流體是指在臨界溫度和臨界壓力以上的流體，介于氣體與液體之間的一種物相。物質(zhì)狀態(tài)密度(g/cm3)粘度(g/cm/s)擴(kuò)散系數(shù)(cm2/s)氣態(tài)(0.6-2)x10-3(1-3)x10-40.1-0.4液態(tài)0.6-1.6(0.2-3)x10-2(0.2-2)x10-5SCF0.2-0.9(1-9)x10-4(2-7)x10-4超臨界CO2：Pc=7.37MPa；Tc=31.3℃

超臨界流體萃取法CO2萃取過程無味、無臭、無毒，安全性好；CO2價(jià)格便宜，純度高，可循環(huán)使用；樣品易濃集；Purify，目的：去除干擾，富集組分YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@二、中藥分析樣品的純化方法過濾法柱色譜法薄層色譜法YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第三節(jié)

鑒別試驗(yàn)（IdentificationTest）假藥泛濫，質(zhì)量難以保證，嚴(yán)重危害群眾健康！鑒別是保障藥品質(zhì)量的第一步！YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@鑒別：判定真?zhèn)螜z查：安全性、有效性、均一性含量測(cè)定：有效成分的定量藥品檢驗(yàn)工作的主要內(nèi)容復(fù)習(xí)：維生素C的鑒別YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@一般鑒別專屬鑒別化學(xué)藥物的鑒別化學(xué)藥物的鑒別步驟：（1）性狀（2）一般鑒別試驗(yàn)（理化鑒別為主）（3）專屬鑒別試驗(yàn)（光譜鑒別為主）YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@例：中藥黃芪的鑒別YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@顯微鑒別YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@黃芪處理供試品黃芪甲苷對(duì)照藥材處理對(duì)照藥材薄層色譜法比較位置Rf顏色大小斑點(diǎn)中藥的鑒別（1）性狀（2）顯微鑒別（3）（薄層）色譜鑒別（4）理化鑒別YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@例：乙肝寧顆粒的鑒別YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@黃芪YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@乙肝寧顆粒處理處理方法1處理方法2處理方法3處理方法4黃芪甲苷原兒茶醛芍藥苷何首烏大黃素薄層色譜法比較位置Rf顏色大小斑點(diǎn)YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中藥復(fù)方不同于單味藥的鑒別內(nèi)容：（1）中藥復(fù)方，原則上每味藥都要鑒別。最少要選擇制劑處方中的1/3的藥味進(jìn)行鑒別。（2）按君臣佐使選擇藥味進(jìn)行鑒別（黃芪、丹參）。（3）

對(duì)貴重藥、毒性藥進(jìn)行鑒別（何首烏）。（4）凡有原粉入藥者，應(yīng)做顯微鑒別。沒有顯微鑒別的，盡可能做理化鑒別。思考題：中藥單味藥的流浸膏或提取物是否可以采用顯微鑒別的方法？中藥及其制劑鑒別方法

形狀、大小色澤、表面特征質(zhì)地、折斷面特征氣味……性狀鑒別YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@

對(duì)組織、細(xì)胞或內(nèi)含物進(jìn)行鑒別

顯微特征應(yīng)明顯、易查見多來源藥材應(yīng)選擇其共有的特征顯微鑒別

多為化學(xué)法觀察顏色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)，易受植物中其他成分干擾礦物藥及特殊鑒別反應(yīng)中仍在采用理化鑒別YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@

制備供試液色譜條件選擇：獲得清晰、圓整、比移值穩(wěn)定和可重復(fù)的色譜圖

對(duì)照物選擇顯色與檢視鑒別和限度檢查色譜鑒別薄層色譜法

采用公認(rèn)的、相對(duì)較短DNA序列進(jìn)行物種鑒定。適用于難以用性狀、顯微和理化鑒定的中藥及其原物種鑒定。DNA條形碼DNA序列YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第四節(jié)

檢查（PurificationTest）具有中藥特色的檢查項(xiàng)目水分總灰分酸不溶性灰分農(nóng)藥殘留量雜質(zhì)重金屬及有害元素中藥制劑特有的劑型及檢查項(xiàng)目其他雜質(zhì)檢查項(xiàng)目水分膨脹度酸敗度溶出度含量均勻度浸出物測(cè)定。。。。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量測(cè)定（Determination）中藥含量測(cè)定的原則：（1）凡已知有效成分、毒性成分或能反映內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)成分的藥材，應(yīng)進(jìn)行含量測(cè)定。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@（2）對(duì)中藥制劑中君藥、毒性藥、貴重藥應(yīng)進(jìn)行含量測(cè)定。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量測(cè)定（3）制劑含量測(cè)定盡可能選擇與選用藥材相同的分析方法，要對(duì)處方中藥材做全面考察。如：黃芪——>黃芪甲苷——TLC

乙肝寧顆?！?gt;黃芪——>黃芪甲苷—TLC

但采用的方法可能不一樣??？YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量測(cè)定（4）測(cè)定干擾大且確證干擾無法排除而難以測(cè)定的，可測(cè)定與其化學(xué)結(jié)構(gòu)母核類似、相對(duì)分子量接近的種類成分的含量或測(cè)定浸出物。（5）含量限度低于萬分之一的，應(yīng)增加一個(gè)含量測(cè)定指標(biāo)或浸出物測(cè)定。（6）化學(xué)方法測(cè)定有困難時(shí)，也可建立生物測(cè)定方法。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@第五章含量測(cè)定HPLCGCTLCS其他方法方法

主要用于測(cè)定揮發(fā)油及其他揮發(fā)性組分含量?jī)?nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、歸一化法等分光光度法化學(xué)分析法高效毛細(xì)管電泳法電化學(xué)方法含量測(cè)定的主要方法

多采用RP-HPLC

酸堿性化合物的流動(dòng)相系統(tǒng)

梯度洗脫&波長(zhǎng)梯度

薄層吸收掃描法&薄層熒光掃描法反射法&透射法直線式掃描&鋸齒狀掃描主要采用外標(biāo)法定量校正因子法同時(shí)測(cè)定多指標(biāo)成分的含量待測(cè)成分標(biāo)準(zhǔn)品可得多指標(biāo)成分待測(cè)成分標(biāo)準(zhǔn)品難得同建立單一成分測(cè)定的步驟類似，常采用梯度洗脫的方法以使個(gè)待測(cè)成分達(dá)到滿意的分離效果。

一測(cè)多評(píng)原理是在一定的線性范圍內(nèi)，母核結(jié)構(gòu)類似成分的量與檢測(cè)器相應(yīng)成正比計(jì)算出各成分吸收系數(shù)間穩(wěn)定的相關(guān)數(shù)值，僅測(cè)定1個(gè)對(duì)照品，計(jì)算其他成分含量中國(guó)藥典采用此法對(duì)黃連中的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿進(jìn)行含量測(cè)定第六節(jié)中藥安全性相關(guān)的質(zhì)量控制項(xiàng)目YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@重金屬與砷鹽檢查農(nóng)藥殘留量分析黃曲霉素測(cè)定中藥注射劑中藥摻偽摻假和非法添加的檢查毒性成分的控制重金屬與砷鹽檢查

YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@重金屬與砷鹽檢查ChP附錄收載有四種重金屬檢查法，參見總論第5章砷鹽檢查法：古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法雙硫腙比色法：選擇性地測(cè)定制劑中的鉛原子吸收分光光度法：鉛使用鉛空心陰極燈測(cè)定；砷用砷空心陰極燈HPLC-ICP-MS

高效液相色譜電感耦合等離子體質(zhì)譜（HPLC-ICP-MS）：測(cè)定中藥中不同價(jià)態(tài)重金屬離子的含量YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@農(nóng)藥殘留量分析YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@殘留農(nóng)藥種類有機(jī)氯類：六六六、DDT、五氯硝基苯、艾氏劑有機(jī)磷類：磷酸酯類（敵敵畏、敵百蟲）、硫代磷酸酯類（對(duì)硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺（甲胺磷）擬除蟲菊酯類：氯氰菊酯、溴氰菊酯氨基甲酸酯類：西維因、呋喃丹ChP2010一部附錄IXQ

農(nóng)藥殘留量測(cè)定法有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：

SE-54（30m0.32mm0.25um）或DB-1701，63Ni-ECD電子捕獲檢測(cè)器。進(jìn)樣口溫度：230℃；檢測(cè)器溫度：300℃；不分流進(jìn)樣；程序升溫：初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持10分鐘理論塔板數(shù)按α-BHC峰計(jì)算，不低于106，分離度應(yīng)大于1.5。黃曲霉素毒性強(qiáng)，可誘發(fā)肝癌，以黃曲霉素B1毒性最強(qiáng)。測(cè)定方法：HPLC-熒光法，酶聯(lián)免疫吸附法和LC-MS/MS法。YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中藥注射劑的檢查YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@中藥摻偽造假和非法添加的檢查YaoMeicun,TelEmail:Lssymc@mail.sysu.ed