醫(yī)學(xué)微生物學(xué)結(jié)核白喉?xiàng)U菌

概述

為細(xì)長的桿菌，繁殖時(shí)有分枝生長的趨勢(shì)。常規(guī)染色困難，但一經(jīng)著色則有抗酸性。該菌生長慢，營養(yǎng)要求高，不產(chǎn)毒素，其致病性與菌體成分有關(guān)，所致疾病多為慢性且伴有肉芽腫。該屬菌種類多，常分為三組：結(jié)核分枝桿菌（人、牛型），非結(jié)核分枝桿菌(包括4組，鳥-胞內(nèi))，麻風(fēng)分枝桿菌。當(dāng)前第1頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)結(jié)核分枝桿菌生長慢,人型、牛型非結(jié)核分枝桿菌I組生長慢,堪薩斯非結(jié)核分枝桿菌II組生長慢，癗癘非結(jié)核分枝桿菌III組生長慢,鳥胞內(nèi)分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌IV組生長快速，龜分枝麻風(fēng)分枝桿菌不生長當(dāng)前第2頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）當(dāng)前第3頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)結(jié)核桿菌和結(jié)核病病發(fā)展史上的幾個(gè)里程碑

1882年，德國Koch發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌

1890年，德國Koch發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌素

1921年，法國Calmettle和Guerin制成BCG1940年，進(jìn)入結(jié)核病化療時(shí)代當(dāng)前第4頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)20世紀(jì)80年代以來結(jié)核病發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)結(jié)核桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)

AIDS的流行對(duì)結(jié)核病防治的松懈，人口流動(dòng)1993年4月23日WHO宣布“全球結(jié)核病緊急狀態(tài)”1995年宣布每年3月24日為“世界防治結(jié)核病日”當(dāng)前第5頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)流行病學(xué)簡況:

世界：

1/3人口感染，70%在亞洲結(jié)核病人2000萬，每年新增結(jié)核病患者900萬，每年死于結(jié)核病的達(dá)300萬。

中國：有5.5億人感染，結(jié)核病人約600萬，每年死于結(jié)核病的為25萬。

居法定報(bào)告?zhèn)魅静∈孜?當(dāng)前第6頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)CutaneoustuberculosisBonetuberculosisLymphnodetuberculosisRenaltuberculosisPulmonarytuberculosis當(dāng)前第7頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)染色：細(xì)長微彎的桿菌，經(jīng)抗酸染色，菌體呈紅色，其它呈藍(lán)色。血培養(yǎng)中可形成莢膜。臨床標(biāo)本中常有L型變異出現(xiàn)(Much、莫赫顆粒)。2、培養(yǎng)特性：專性需氧，營養(yǎng)要求高，最適pH值低，生長緩慢，2-4w見菌落。

*羅氏(Lowenstein)培養(yǎng)基：菌落呈乳白或米黃顆粒狀，干燥不透明，久則融合呈菜花狀。*液體培養(yǎng)基：易形成有皺褶的菌膜（1-2w）。當(dāng)前第8頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)結(jié)核分枝桿菌M.tuberculosis當(dāng)前第9頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

Resultofacid-faststaining:redbacilliinbluebackground當(dāng)前第10頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)結(jié)核桿菌菜花狀菌落當(dāng)前第11頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)分子生物學(xué)：1998年，英、法、美、丹麥聯(lián)合破譯其群基因序列，4411kb，約4000個(gè)基因3、生化反應(yīng)：熱觸酶試驗(yàn)有助于區(qū)別結(jié)核(-)和非結(jié)核分支桿菌(+)。4、抵抗力：含大量脂質(zhì)，抵抗力強(qiáng)，抗干燥，耐酸堿;

但對(duì)濕熱、乙醇及紫外線敏感。

5、變異性：結(jié)核桿菌易發(fā)生菌落、形態(tài)（L型）、毒力（BCG）、免疫原性和耐藥性變異。當(dāng)前第12頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

二、致病性（一）致病物質(zhì)：結(jié)核桿菌的致病性與細(xì)菌大量繁殖引起的炎癥、菌體成分及代謝產(chǎn)物的毒性和機(jī)體對(duì)細(xì)菌的免疫損傷有關(guān)。

1、脂質(zhì)（lipid）：脂肪酸或索狀因子(cordfactor)

：

能破壞線粒體膜，影響細(xì)胞呼吸，抑制白細(xì)胞游走，引起慢性肉芽腫；

當(dāng)前第13頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

Cordformationinliquidmedia(cordfactor)當(dāng)前第14頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

磷脂(phosphatide)：能促使單核細(xì)胞增生，引起結(jié)核結(jié)節(jié)和干酪樣壞死；蠟質(zhì)D(wax-D)：能激發(fā)機(jī)體的IV型超敏反應(yīng)；硫酸腦苷脂(sulfatide)：能抑制吞噬體與溶酶體的結(jié)合;

分枝菌酸(mycolicacid)：與菌體的抗酸性有關(guān)。

2、蛋白質(zhì)：其主要成分結(jié)核菌素本身無毒，但與蠟質(zhì)D結(jié)合注入機(jī)體能誘發(fā)超敏反應(yīng)，結(jié)核結(jié)節(jié)形成和抗體。3、多糖(polysaccharide)：中性粒細(xì)胞浸潤當(dāng)前第15頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)結(jié)核結(jié)節(jié)(tubercle)當(dāng)前第16頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)4、核酸：

rRNA激活特異性細(xì)胞免疫5、莢膜：保護(hù)菌體（有助于侵入巨噬細(xì)胞、抵抗有害物質(zhì)等）當(dāng)前第17頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)（二）所致疾病：主要介紹肺部感染

1、原發(fā)感染（primaryinfection）：首次感染結(jié)核桿菌，多見于兒童。常有肺門淋巴結(jié)大、干酪樣壞死和結(jié)核結(jié)節(jié)的形成，也可經(jīng)血到達(dá)多個(gè)臟器引起相應(yīng)結(jié)核病，90%的原發(fā)感染可纖維化或鈣化，但病灶中潛伏的菌可成為日后的感染源。

2、原發(fā)后感染（secondaryinfection）：

多見于成人或較大的兒童。主要有慢性肉芽腫，結(jié)核結(jié)節(jié)、纖維化、干酪樣壞死當(dāng)前第18頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)原發(fā)綜合征原發(fā)病灶淋巴管炎淋巴結(jié)腫大肺門淋巴結(jié)結(jié)核當(dāng)前第19頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)原發(fā)綜合征當(dāng)前第20頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

三、免疫性1、免疫機(jī)制：傳染性免疫，以細(xì)胞免疫為主。2、免疫與超敏反應(yīng)：機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌產(chǎn)生免疫保護(hù)時(shí)也產(chǎn)生了超敏反應(yīng)，二者均為T細(xì)胞介導(dǎo)。試驗(yàn)依據(jù)：結(jié)核菌素蛋白與蠟質(zhì)D同時(shí)注入機(jī)體，可活化T細(xì)胞引起超敏反應(yīng)；結(jié)核桿菌核蛋白體RNA注入機(jī)體，則獲得免疫力。當(dāng)前第21頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)*結(jié)核菌素試驗(yàn)（OT）：（1）機(jī)制：

IV型超敏反應(yīng)（2）方法：是用OT(oldtuerculin)或PPD(purifiedProteinderivative)所做的皮內(nèi)試驗(yàn)，48-72小時(shí)后觀察。（3）結(jié)果：陽性紅腫硬結(jié)直徑>5mm

強(qiáng)陽性紅腫硬結(jié)直徑>15mm

陰性紅腫硬結(jié)直徑<5mm當(dāng)前第22頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)結(jié)核菌素試驗(yàn)

PPD皮下注射當(dāng)前第23頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

(4)意義：

陽性表示已感染過結(jié)核桿菌，但不一定有結(jié)核?。?/p>

強(qiáng)陽性表示可能有活動(dòng)性結(jié)核?。?/p>

陰性表示未感染過結(jié)核桿菌，但應(yīng)排除感染初期或免疫力低下。當(dāng)前第24頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)四、微生物學(xué)檢查

1、標(biāo)本：痰液、尿液、糞便、腦脊液等

2、直接涂片鏡檢：10萬個(gè)每毫升痰液

3、濃縮集菌：3%HCl、4%NaOH

4、分離培養(yǎng)：分枝桿菌L型

5、動(dòng)物試驗(yàn)：豚鼠腹股溝試驗(yàn)陽性

6、快速診斷：包括核酸和抗體當(dāng)前第25頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)五、防治原則接種BCG：新生兒----7y----12y治療：聯(lián)合用藥，分一線和二線藥物當(dāng)前第26頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)當(dāng)前第27頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)棒狀桿菌屬

Corynebactreiump.173

該屬菌多為條件致病菌，引起人類疾病的主要是白喉棒狀桿菌，可引起白喉。當(dāng)前第28頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)

白喉棒狀桿菌屬（C.diphtheriae）一、生物學(xué)性狀

1、形態(tài)染色：菌體細(xì)長微彎，一端或兩端膨大呈棒狀；排列不規(guī)則，多呈X型、Y型或柵欄狀；

G+，但染色不均勻，用Albert法染色后，有異染顆粒出現(xiàn)，具有鑒別意義；無莢膜和鞭毛，也不產(chǎn)生芽胞。當(dāng)前第29頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)ModelfigureofAlbertstaining當(dāng)前第30頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)ResultofAlbertstaining:bodyinblue

metachromaticgranules

inblack當(dāng)前第31頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)2、培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，

（1）呂氏血清培養(yǎng)基（Loffler）:

形態(tài)典型，異染顆粒明顯，菌落細(xì)小、濕潤、呈灰白色、圓形突起；（2）亞碲酸鉀(potassiumtellurite)培養(yǎng)基：

重型大灰色能分解淀粉不溶血

中間型中心黑邊緣灰不分解淀粉不溶血

輕型小黑色不分解淀粉能溶血我國以輕型多見當(dāng)前第32頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)3、抵抗力：較弱，對(duì)濕熱敏感，對(duì)干燥、寒冷、日光的抵抗力較強(qiáng)。

當(dāng)前第33頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)二、致病性（一）致病物質(zhì)：

1、白喉毒素(diphtherotoxin,DT)：只有攜帶β-棒狀桿菌噬菌體的菌株才能產(chǎn)生。

毒素的性質(zhì)與作用機(jī)理：完整的毒素分子是酶原，須經(jīng)胰酶分解為A、B

兩個(gè)片段后才發(fā)揮毒性作用。

A鏈：193aa，具酶活性，穩(wěn)定；

B鏈：342aa，不穩(wěn)定。含穿膜區(qū)（173aa）和受體結(jié)合區(qū)（149aa）。當(dāng)前第34頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)StructureofDiphtheriatoxin

FragmentB:37kD,binding

FragmentA:21kD,toxicity當(dāng)前第35頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)作用機(jī)制：白喉毒素經(jīng)受損的粘膜細(xì)胞入血或淋巴循環(huán)，吸附于多個(gè)臟器的組織細(xì)胞表面后裂解，B片段與細(xì)胞膜表面的受體結(jié)合，A片段進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞內(nèi)延伸因子2（elongationfactor2,EF-2）滅活，影響蛋白質(zhì)的合成。白喉毒素有劇毒，但人和鼠的正常細(xì)胞對(duì)該毒素有一定的耐受性，而腫瘤細(xì)胞則高度敏感，據(jù)此有人提出生物導(dǎo)彈法治療腫瘤。當(dāng)前第36頁\共有38頁\編于星期三\21點(diǎn)2.索狀因子(cordfactor)和K