檢驗(yàn)科D-二聚體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

檢驗(yàn)科D-二聚體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.【目的】為保障血漿D-二聚體測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，特制作本規(guī)程。.【職責(zé)】.實(shí)驗(yàn)室工作人員均應(yīng)熟知并嚴(yán)格遵守本SOP，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實(shí)。.本SOP的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：室負(fù)責(zé)人、科主任。3.1標(biāo)本類型及實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】.標(biāo)本類型1小時(shí)內(nèi)（3000r/minX15min）分離血漿，室溫放置不超過2小時(shí),2?8℃保存不超過4小時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間保存需在冰凍條件下，（-70℃不超過6個(gè)月），只能凍融1次，在37℃迅速解凍，以減低凝血因子的消耗，解凍后立即測(cè)試?？鼓齽┎环?采血量不準(zhǔn)確,凝固,溶血,脂血標(biāo)本不能作測(cè)定。.患者準(zhǔn)備早晨空腹采血（空腹12小時(shí)左右），靜脈采血。.容器、添加劑類型3.8%枸椽酸鈉0.2ml+靜脈血1.8ml,混勻。.儀器設(shè)備.儀器名稱：SysmexCA-1500全自動(dòng)血液凝固分析儀.儀器廠家：日本Sysmex公司.儀器型號(hào)：SysmexCA-1500.儀器技術(shù)參數(shù):速度：最快檢測(cè)速度180測(cè)試/小時(shí),組合檢測(cè)約140測(cè)試/小時(shí)試劑位:36個(gè),具冷藏功能。樣本位:50個(gè)，可自動(dòng)連續(xù)添加。.儀器校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)頻率:當(dāng)方法改變,試劑廠家或試劑批號(hào)改變,儀器維修影響測(cè)定結(jié)果等情況時(shí),必須進(jìn)行校準(zhǔn)。校準(zhǔn)操作：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線分析（由儀器提供商指定工程師執(zhí)行）。.實(shí)驗(yàn)試劑德國(guó)DadeBehringMarburg公司的D-Dimer測(cè)定試劑（60人份/套），未開封試劑2?8℃貯存到說明書上有效期，開封試劑2?8℃保存不超過5天。.【測(cè)定原理】免疫比濁法：當(dāng)混合標(biāo)本中含有D-二聚體時(shí)，聚苯乙烯顆粒包被到單克隆抗體（DD5）,與交聯(lián)纖維蛋白降解產(chǎn)物①-二聚體）的交聯(lián)區(qū)域結(jié)合。交聯(lián)區(qū)域呈立體結(jié)構(gòu)，有兩個(gè)單克隆抗體表位。總之，一個(gè)單克隆抗體就能觸發(fā)凝集反應(yīng)，隨后檢測(cè)濁度的增加。儀器在575nm處通過對(duì)濁度改變的監(jiān)測(cè)，將吸光度轉(zhuǎn)換成濃度值，由此獲得樣本中D-二聚體的量。.【操作步驟】.檢查前準(zhǔn)備：清空廢液瓶,清空反應(yīng)杯拋棄槽.添加足夠反應(yīng)杯（不能超出警告線）添加清潔液試劑，清洗用蒸鎦水等..開機(jī)先開打印機(jī)再開主機(jī)，開機(jī)后儀器自檢，約15分鐘，屏幕上方“NotReady”變?yōu)椤癛eady”，表示儀器預(yù)熱完成，進(jìn)入系統(tǒng)準(zhǔn)備工作狀態(tài),可進(jìn)行測(cè)定..輸入工作清單：從主菜單選WOrkList|f出現(xiàn)第一架樣本工作清單輸入畫面,選叵NOEntry輸入第一個(gè)樣本號(hào)一按相應(yīng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱鍵呵并同時(shí)輸入此標(biāo)本的其他測(cè)試項(xiàng)目，若選“凝血四項(xiàng)（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按|Profile#1組合選項(xiàng)選擇，選中項(xiàng)目相應(yīng)位置標(biāo)記為“O”,選完項(xiàng)目后按ENTEq確認(rèn)，要?jiǎng)h除某項(xiàng)目時(shí)只需按該項(xiàng)目（按鍵如同回變?yōu)樗帲┘纯?，一用tJ鍵，同樣輸入其他標(biāo)本編號(hào)項(xiàng)目。（快速輸入可用叵回鍵，輸入重復(fù)標(biāo)本數(shù)，復(fù)制同樣項(xiàng)目的輸入..放置樣本按3所設(shè)好的工作清單順序?qū)㈦x心分離好的樣本放置于樣本架上,并按順序把樣本架排列于Sampler進(jìn)樣器右邊位置（最多同時(shí)放5架共50個(gè)樣本）.按叵口鍵開始測(cè)定.蓋好遮光蓋,確認(rèn)儀器為準(zhǔn)備狀態(tài)（顯示屏正上方顯示“Ready"）按即口鍵,進(jìn)樣開始,一測(cè)定進(jìn)行,儀器顯示為“Analying”（被選擇項(xiàng)目背景變?yōu)椤啊颉?，此時(shí)可重復(fù)3,4,繼續(xù)輸入其他架樣本工作清單，按Rigester,繼續(xù)確認(rèn)測(cè)試任務(wù)，添加樣本架繼續(xù)測(cè)試，一測(cè)定完成，測(cè)定項(xiàng)目背景變?yōu)椤?"，打印機(jī)打印出測(cè)定結(jié)果，所有測(cè)定清單完成，系統(tǒng)恢復(fù)“Ready”狀態(tài)..每日維護(hù):完成每日的測(cè)定后,關(guān)機(jī)前維護(hù).沖冼針RinseProbe清空廢液瓶，和已使用過的反應(yīng)杯.將試劑架連用試劑放入冰箱..關(guān)機(jī):先關(guān)主機(jī),再關(guān)打印機(jī).6.【質(zhì)控程序】.質(zhì)控DadeCitrol質(zhì)控血漿.用蒸鎦水1ml溶解后放置30分鐘,才能使用或分裝。復(fù)溶后，室溫保存2小時(shí),2?8℃4小時(shí)。每批樣本同時(shí)測(cè)定兩個(gè)濃度水平（高值和正常值）的質(zhì)控品，以2S為警告限,3S為失控限,繪制質(zhì)控圖,判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則詳見室內(nèi)質(zhì)控作業(yè)指導(dǎo)書。.維護(hù)每日維護(hù)：（完成每日的測(cè)定后,關(guān)機(jī)前維護(hù)。）沖冼針RinseProbe清空廢液瓶,和已使用過的反應(yīng)杯。將試劑架連用試劑放入冰箱。.保養(yǎng)每周維護(hù)液路沖洗：儀器在“Ready”狀態(tài)下，從主菜單按Special按Execute鍵運(yùn)行此Maintainf按Execute鍵運(yùn)行此程序f完成后按Return返回。清潔儀器：定期用擦布擦干凈儀器內(nèi)外，包括試劑槽。需要時(shí)維護(hù)：1調(diào)整壓力：儀器在“Ready”狀態(tài)下，以主菜單按河插jMenuf按Maintainf按PressureAdjust鍵，顯示壓力是否在其調(diào)整范圍內(nèi)？若不在，則打開儀器右側(cè)相應(yīng)壓力調(diào)整旋鈕，旋動(dòng)調(diào)整好壓力，再鎖緊旋鈕。更換燈泡：關(guān)機(jī)一從儀器右側(cè)取下燈泡外蓋及內(nèi)蓋一換上好的燈泡f裝上內(nèi)外蓋一從主菜單按〔SpecialMenuf再按Maintainf按Caliblampf確認(rèn)關(guān)上遮光蓋，按Execute運(yùn)行調(diào)整程序。更換保險(xiǎn)管：關(guān)機(jī)f從儀器左側(cè)旋下保險(xiǎn)蓋f更換上好的保險(xiǎn)管f裝上保險(xiǎn)管蓋。7.1結(jié)果計(jì)算與判斷】?jī)x器測(cè)定D-Dimer的線性范圍在40-2000ug/L,測(cè)定完成后儀器顯示D-D含量等參數(shù)。若不能對(duì)參數(shù)進(jìn)行正確計(jì)算，將出現(xiàn)下列信息：(***.*出現(xiàn)錯(cuò)誤,不能得到分析數(shù)據(jù)； .一不能計(jì)算參數(shù)；+++.+數(shù)值超出線性范圍.)儀器設(shè)定D-D參考范圍在40-2000ug/L,如果得不到一個(gè)正常數(shù)值,在數(shù)據(jù)的左側(cè)將出現(xiàn)下列標(biāo)記：出現(xiàn)錯(cuò)誤信息數(shù)據(jù)低于可報(bào)告的低限數(shù)據(jù)高于可報(bào)告的高限.【生物參考區(qū)間】D-二聚體生物參考區(qū)間：<0.5mg/L.【臨床意義】.血栓前狀態(tài)與血栓性疾病活動(dòng)性深靜脈血栓形成與肺栓塞時(shí)，血漿D-二聚體顯著升高。由于血漿-二聚體具有較高的陰性預(yù)測(cè)值，當(dāng)臨床懷疑有深靜脈血栓形成與肺栓塞時(shí)，若DD<0.5mg/L,發(fā)生急性或活動(dòng)性血栓形成的可能性較小。如果患者已有明顯的血栓癥狀與體征時(shí)，DD仍<0.5mg/L,應(yīng)考慮患者有無纖溶活性低下的可能，如纖溶酶原激活物抑制劑增多等。.血漿D-二聚體是DIC早期診斷的重要依據(jù)，其檢測(cè)呈陽性或增高早于FDPs及3P變化。DD也是繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)和原發(fā)性纖溶亢進(jìn)鑒別診斷的重要指標(biāo)。DIC時(shí)，血漿DD顯著增高，是繼發(fā)性纖溶的特異性標(biāo)志物。原發(fā)性纖溶亢進(jìn)時(shí)，由于無血栓形成，僅有血漿FDPs增高，DD一般不增高。.溶栓治療監(jiān)測(cè)深靜脈血栓的溶栓治療有效后，血漿DD在栓后的兩天內(nèi)增高，其增高幅度可達(dá)溶栓前的2-3倍。急性腦梗死溶栓治療有效后，血漿DD在4-6小時(shí)升高至溶栓前2-3倍，F(xiàn)DPs升高約10-13倍，以后逐漸下降；到7天時(shí)，DD一般已低于溶栓前水平，但FDPs仍壁溶栓前高5倍左右，可見DD監(jiān)測(cè)溶栓