小鼠經(jīng)口染毒急性毒性評(píng)價(jià)

亞硝酸鹽的急性毒性評(píng)價(jià)摘要：此次試驗(yàn)主要是研究亞硝酸鈉的急性毒性評(píng)價(jià)，通過對(duì)健康小鼠的選擇，有毒性資料可查得亞硝酸鈉的急性經(jīng)口染毒LD50值，依據(jù)霍恩氏法LD50計(jì)算的設(shè)計(jì)原則按照隨機(jī)數(shù)分組的方法將動(dòng)物分成4個(gè)染毒組，每組4只小白鼠。一次灌胃給予受試物后，觀察動(dòng)物所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，分析中毒死亡的原因，必要時(shí)進(jìn)行解剖，觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系，采用霍恩氏法求出亞硝酸鈉的半數(shù)致死劑量(LD50)，并根據(jù)LD50值將亞硝酸鈉進(jìn)行急性毒性分級(jí)，從而外推到人，推測(cè)亞硝酸鈉的毒性對(duì)人的影響。關(guān)鍵詞：小鼠、亞硝酸鈉、急性毒性、LD50、霍恩氏法1．前言亞硝酸鈉（NaNO2），是亞硝酸根離子與鈉離子化和生成的無機(jī)鹽。亞硝酸鈉易潮解，易溶于水和液氨，其水溶液呈堿性，其pH約為9，微溶于乙醇、甲醇、乙醚等有機(jī)溶劑。亞硝酸鈉有咸味，又是被用來制造假食鹽。亞硝酸鈉暴露于空氣中會(huì)與氧氣反應(yīng)生成硝酸鈉。若加熱到320℃以上則分解，生成氧氣、氧化氮和氧化納。接觸有機(jī)物易燃燒爆炸。由于其具有咸味且價(jià)錢便宜，常在非法食品制作時(shí)用作食鹽的不合理替代品，因?yàn)閬喯跛徕c有毒，含有工業(yè)鹽的食品對(duì)人體危害很大，有致癌性。亞硝酸鈉是國(guó)家規(guī)定允許添加的食品添加劑。肉類制品加工中用作發(fā)色劑，可用于肉類罐頭、肉類制品。在肉制品中對(duì)抑制微生物的增殖有一定作用(對(duì)肉毒梭狀芽孢桿菌有特殊抑制作用)，能提高腌肉的風(fēng)味，而且亞硝酸鈉還可作殺菌劑，抑制肉制品中微生物的生長(zhǎng)。亞硝酸鈉雖然應(yīng)用于多方面的工業(yè)用途途中，但在食品方面，中國(guó)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定:食品級(jí)亞硝酸鈉用作食品添加劑時(shí)，最大使用量為0.15g/kg，殘留量：肉類罐頭≤0.05g/kg，肉制品≤0.03g/kg,因?yàn)槿绻梭w攝入過多的亞硝酸鈉就會(huì)導(dǎo)致機(jī)體致癌和后代畸變，過多的使用對(duì)人體的危害非常巨大。因此，對(duì)亞硝酸鈉的急性毒性評(píng)價(jià)的研究就非常有必要。2．材料與方法2.1材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選取健康成年小鼠（30g左右），試驗(yàn)前要對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)觀察2~3天，以適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境，并淘汰不健康或體重不符合要求的動(dòng)物。2.2儀器與試劑2.2.1器材：注射器，灌胃針，普通天平，電子天平，吸管，吸球，容量瓶，玻璃棒，燒杯，試劑瓶；2.2.2試劑：亞硝酸鈉，蒸餾水。2.3實(shí)驗(yàn)方法2.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組：選健康成年小鼠(30g左右)，同性別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體間體重相差不得超過平均體重的10%，且此次試驗(yàn)所用的小鼠均為雄性小鼠，所得出的結(jié)論只能代表單一性別的實(shí)驗(yàn)情況。試驗(yàn)前動(dòng)物要在試驗(yàn)環(huán)境中至少適應(yīng)2~3d時(shí)間，以適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境，并淘汰不健康或體重不符合要求的動(dòng)物本次試驗(yàn)取體重28.0~34.0的小鼠，試驗(yàn)時(shí)，將小鼠稱體重、編號(hào)、按隨機(jī)分組原則，按隨機(jī)分組表將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成4組，每組4只。16只小鼠的完全隨機(jī)分配表如下動(dòng)物編號(hào)12345678910111213141516隨機(jī)數(shù)字09472796544917460962905284772708余數(shù)121211122021所屬組別ACBDBACDACDBDBAC小鼠體重g28.828.729.928.430.830.029.629.732.231.031.032.035.432.834.4劑量選擇：經(jīng)過預(yù)試或查資料得到LD50的大致范圍，經(jīng)查資料得口服-小鼠LD50為:200mg/kg；各劑量組的間距可根據(jù)LD50計(jì)算方法要求按等比級(jí)數(shù)或等差級(jí)數(shù)安排。本實(shí)驗(yàn)用霍恩氏發(fā)法計(jì)算LD50，各組間計(jì)量遞增公比為10^(2)，，由于溫度越低亞硝酸鈉的毒性越大，且實(shí)驗(yàn)室的溫度較低，因此將LD50為:200mg/kg設(shè)為第三劑量組，則染毒劑量組劑量分別為46.4mg/kg、100mg/kg、215mg/kg、464mg/kg。2.3.3受試化學(xué)物配制與稀釋1、亞硝酸鈉溶液以蒸餾水為溶劑配制成溶液464mg/kg，四只小鼠全部死亡。即四組的死亡數(shù)為2、0、0、4，但是在霍恩表上查不到對(duì)應(yīng)的LD50值。3.2結(jié)果分析第一劑量組也是最低劑量組的小鼠01號(hào)和06號(hào)死亡，經(jīng)后來解剖發(fā)現(xiàn)，它們的胃出現(xiàn)腫脹，其中06號(hào)小鼠在后期有吐血現(xiàn)象，故其死亡原因可能是在灌胃過程中是由于由同一個(gè)人操作，因?yàn)椴僮鞑划?dāng)導(dǎo)致小鼠的食管破裂或者傷害了胃組織。而兩只小鼠體重均出現(xiàn)過度下降，而本身耐受性較差以及對(duì)外界環(huán)境抵抗力較低，最終01號(hào)和06號(hào)小鼠死亡。第二小組也是次低劑量組所有小鼠表現(xiàn)正常，在飼喂后期并未出現(xiàn)任何有異常的情況。第三小組也是半數(shù)致死劑量組都表現(xiàn)正常并未出現(xiàn)死亡可能是因?yàn)檫@四只小鼠對(duì)外源合化物不敏感，有較強(qiáng)的耐受性，對(duì)外界不良環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗力，而且第三組小鼠在后期觀察中發(fā)現(xiàn)進(jìn)食量比其他小鼠都多且體重下降不明顯，說明這組小鼠的抵抗力稍強(qiáng)。第四組四只全