高中生物人教版高中生物技術(shù)實(shí)踐專題微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用《土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)》

導(dǎo)入新課

上一節(jié)課我們已經(jīng)學(xué)習(xí)了培養(yǎng)基的配制以及接種技術(shù)，現(xiàn)在我們就來(lái)學(xué)習(xí)如何從土壤中將我們需要的微生物進(jìn)行分離。土壤微生物尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，不能直接被農(nóng)作物吸收，土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。原因:土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)2+H2O脲酶CO2+2NH3

哪里能找到能分解尿素的細(xì)菌？想一想（一）篩選菌株耐熱微生物熱泉耐寒微生物冰川如：能合成耐高溫DNA聚合酶的Taq細(xì)菌1.自然篩選分解石油的細(xì)菌油田篩選原則：根據(jù)微生物對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。

怎樣才能將分解尿素的細(xì)菌從土壤中分離出來(lái)？想一想長(zhǎng)期使用尿素的土壤微生物2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。（一）篩選菌株原理：選擇培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（一）篩選菌株加入青霉素的培養(yǎng)基

——細(xì)菌不生長(zhǎng)，酵母菌、霉菌等真菌能生長(zhǎng)不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基

——分離自養(yǎng)型微生物1.在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是是什么物質(zhì)？碳源是葡萄糖和尿素，氮源是尿素2.分析該配方的培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果有，又是如何進(jìn)行選擇的？有篩選作用。尿素是培養(yǎng)基中的唯一氮源，因此，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。閱讀22頁(yè)本課題使用的培養(yǎng)基配方怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

是實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組培養(yǎng)基類型是否接種

結(jié)果菌落數(shù)量少且特征相同多種類型的菌落是1、稀釋涂布平板法——統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目思考1：為什么測(cè)平板上的菌落數(shù)可以推測(cè)樣品中的活菌的數(shù)目？當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選用菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說(shuō)服力。

第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。實(shí)例分析啟示在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，至少要涂布3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。思考2：如何根據(jù)平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每mL樣品中的菌株數(shù)？每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×MC：某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)M：稀釋倍數(shù)【例】某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上測(cè)得平板上的菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL）（）A.2.34×108

B.2.34×109C.234

D.23.4B思考3：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目高還是低，為什么？低。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。2、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（血球計(jì)數(shù)法）想一想是否有更準(zhǔn)確在計(jì)數(shù)方法呢每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1mm，則每一大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間的高度為0.1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3。1mm下面以一個(gè)大方格有25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行計(jì)算：設(shè)五個(gè)中方格中總菌數(shù)為A，那么，一個(gè)大方格中的總菌數(shù)是多少?如果菌液稀釋倍數(shù)為B，1ml菌液中的總菌數(shù)?(1ml=1cm3=1000mm3）

5AB×1045A缺點(diǎn)：①不能區(qū)分死菌與活菌②個(gè)體小的細(xì)菌難以觀察；1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（）

A.培養(yǎng)細(xì)菌

B.培養(yǎng)真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素實(shí)踐訓(xùn)練CD

一