HPLC流動(dòng)相和固定相

基礎(chǔ)化學(xué)教研室高效液相色譜法引入高效液相色譜法是以高壓輸送流動(dòng)相，采用高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器進(jìn)行在線檢測(cè)的色譜分析技術(shù)。

固定相和流動(dòng)相是整個(gè)分析方法的核心。直接關(guān)系到柱效、選擇性和分離度

第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動(dòng)相一、固定相二、流動(dòng)相一、固定相高效液相色譜法的固定相應(yīng)符合下列要求：①顆粒細(xì)且均勻；②傳質(zhì)快；③機(jī)械強(qiáng)度高，能耐高壓；④化學(xué)穩(wěn)定性好，不與流動(dòng)相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

分類：經(jīng)典的液-固色譜固定相經(jīng)典的液-液色譜固定相新型的化學(xué)鍵合固定相（一）液-固吸附色譜固定相通常為不同極性的固體吸附劑，分為極性和非極性兩類。常用的極性固定相有硅膠、氧化鋁、聚酰胺等；非極性固定相有高分子多孔微球、分子篩等。主要分析有一定極性的分子型化合物。

（二）液-液分配色譜固定相液-液色譜固定相由載體與固定相構(gòu)成。根據(jù)涂漬方法的不同，可將固定相分為機(jī)械涂漬型和化學(xué)鍵合型，后者應(yīng)用更為廣泛。1.機(jī)械涂漬固定相固定液通過機(jī)械涂漬在載體上形成。該種固定相最大的不足是固定液易流失、分離穩(wěn)定性及重現(xiàn)性差，不適合梯度洗脫。借助于化學(xué)反應(yīng)的方法將有機(jī)分子以共價(jià)鍵連接在載體（硅膠）上而獲得的固定相稱為化學(xué)鍵合固定相。其優(yōu)點(diǎn)是：傳質(zhì)速度快，柱效高；化學(xué)性能穩(wěn)定；耐溶劑沖洗；可以通過改變鍵合相的官能團(tuán)的類型來改變分離的選擇性；適用于梯度洗脫。2.化學(xué)鍵合固定相

化學(xué)鍵合相的載體主要是硅膠（表面有硅醇基）硅膠鍵合相應(yīng)在pH=28的介質(zhì)中使用化學(xué)鍵合相根據(jù)應(yīng)用通常分為以下兩類：（1）反相鍵合相：非極性鍵合相，通常用于反相色譜法。如：十八烷基硅烷（C18）鍵合相（2）正相鍵合相：極性鍵合相，通常用于正相色譜法。如：氰基、氨基鍵合相（三）離子交換色譜固定相離子交換色譜法常用離子交換鍵合相。其特點(diǎn)：1.較穩(wěn)定；2.機(jī)械強(qiáng)度高；3.化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性好；4.柱效高；5.交換容量大。

（四）分子排阻色譜固定相常用的固定相為一定孔徑范圍的多孔性凝膠。新型凝膠色譜填料是以薄殼型或全多孔微粒型硅膠為載體，表面經(jīng)化學(xué)反應(yīng)鍵合上各種類型軟質(zhì)凝膠制成。其特點(diǎn)：粒度細(xì)，機(jī)械強(qiáng)度高，分離速度快，分離效果好。二、流動(dòng)相與GC流動(dòng)相不同，HPLC流動(dòng)相為溶劑，它既有運(yùn)載作用，又和固定相一樣，參予對(duì)組分的競(jìng)爭(zhēng)，因此溶劑的選擇對(duì)分離十分重要。

（一）對(duì)流動(dòng)相的基本要求1.溶劑純度高，與固定相不互溶。2.對(duì)試樣有適宜的溶解度。3.化學(xué)穩(wěn)定性好。4.黏度小。5.與檢測(cè)器匹配。液-液分配色譜中流動(dòng)相的洗脫能力與極性相關(guān)：正相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性增強(qiáng)而增加；反相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性增強(qiáng)而減弱。

1.正相色譜：烷烴+極性調(diào)整劑（常用乙醇、異丙醇、四氫呋喃、氯仿等））

2.反相色譜：水+與水互溶的極性調(diào)整劑（甲醇、乙腈)（二）流動(dòng)相的選擇正相和反相色譜中流動(dòng)相的極性和保留時(shí)間的關(guān)系示意圖反相離子抑制技術(shù)：反相色譜法中，在分離弱酸或弱堿樣品時(shí)，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH