實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合

實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合第1頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

了解細(xì)胞融合原理掌握細(xì)胞融合基礎(chǔ)方法實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合第2頁(yè)

細(xì)胞融合概念

二、試驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合第3頁(yè)病毒誘導(dǎo)融合聚乙二醇誘導(dǎo)融合電場(chǎng)誘導(dǎo)融合激光誘導(dǎo)融合常見誘導(dǎo)融合伎倆有哪些？二、試驗(yàn)原理細(xì)胞融合概念實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合第4頁(yè)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合第5頁(yè)三、儀器、材料與試劑

儀器：離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、37℃恒溫水浴鍋、顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、解剖器械、燒杯、載玻片、蓋玻片、離心管。

材料：

SP2/0細(xì)胞、昆明小鼠

試劑：

Hanks液、45%PEG，75%乙醇實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合第6頁(yè)四、實(shí)驗(yàn)步驟（1）小鼠摘眼球放血（可不做）,

拉頸處死，浸泡在75%酒精內(nèi)，3～5min（2）無(wú)菌取脾臟，Hanks液洗一次，脾臟剪碎，培養(yǎng)液洗一次，過(guò)不銹鋼篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)移至10mL離心管（3）800g離心10分鐘，取沉淀細(xì)胞用Hanks液洗2次（每次加入5mL溶液，輕輕混勻800g離心10分鐘）

實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合小鼠骨髓瘤sp20細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合第7頁(yè)（4）細(xì)胞計(jì)數(shù)，待用。（5）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)骨髓瘤細(xì)胞，800g離心10分鐘，取沉淀細(xì)胞用Hanks液洗2次（每次加入5mLHanks液，輕輕混勻800g離心10分鐘）（6）細(xì)胞計(jì)數(shù)，待用。（7）將骨髓瘤細(xì)胞(105-6)與脾細(xì)胞(106-7)按1：10百分比混合在一起800g離心10分鐘，棄上清，用吸管吸凈殘留液體，以免影響聚乙二醇（PEG）濃度。輕輕彈擊離心管底，使細(xì)胞沉淀略松動(dòng)。（每組混合兩份樣品)（8）90s內(nèi)加入37℃預(yù)溫1mL45%PEG（分子量4000）或Hanks液，邊加邊輕微搖動(dòng)。37℃水浴90s。（9）加37℃預(yù)溫Hanks液8mL以終止PEG作用（10）800g離心