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文檔簡介

《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》微課----稀釋法藥敏試驗(yàn)原理及操作方法稀釋法藥敏試驗(yàn)定量

原理以水解酪蛋白（M-H）液體培養(yǎng)基將藥品進(jìn)行不同濃度的稀釋，然后接種待檢菌，定量測(cè)定抗菌藥物抑制或殺死待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）或最低殺菌濃度（MBC）。稀釋液M-H培養(yǎng)基稀釋物接種菌液1:200稀釋材料同法做對(duì)照菌藥敏試驗(yàn)010203加稀釋液排列10-15支試管，從第2管起每管加入M-H液體培養(yǎng)基1ml。

倍比稀釋

吸取抗菌藥物原液（1000μg/ml）5.12ml、M-H液體培養(yǎng)基4.88ml

于第1管中混勻，取出1ml加入第2管混勻，從第2管取1ml加入第3

管混勻，依次倍比稀釋至第15管。待檢菌加入加入待檢菌懸液每管0.05ml混勻。置35℃培養(yǎng)12~18h后觀察結(jié)果。方法步驟抗菌藥物的溶解和稀釋抗菌藥物母液的稀釋步驟培養(yǎng)菌液稀釋混勻挑選18~24小時(shí)的菌落置M-H肉湯增菌4~6小時(shí)制備0.5麥?zhǔn)媳葷峁?:200稀釋，使之最終濃度105CFU/ml。將稀釋好的菌液分別加入不同濃度抗菌溶液中微量液體稀釋法

在微量聚乙烯微板孔中加入各種不同濃度的抗生素100μl，從低濃度往高濃度加樣，不需要更換吸管。微量液體稀釋法

用微量加樣器接種100μl菌液到96孔中，蓋上蓋板。同時(shí)作陽性、陰性對(duì)照。微量液體稀釋法手工看濁度或儀器自動(dòng)判讀。按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告細(xì)菌對(duì)某抗菌藥物為敏感、耐藥和中介。

孔底部清晰不出現(xiàn)細(xì)菌沉淀的最低抗菌藥物濃度即為該抗菌藥物對(duì)細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)，CLSI標(biāo)準(zhǔn)判斷其敏感和耐藥。

再用0.01ml容量接種環(huán)取肉眼觀察無菌生長的液體接種于血瓊脂平板作次代培養(yǎng)，經(jīng)35℃過夜培養(yǎng)后

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