常職院儀器分析測試技術課件2-2紫外-可見分光光度法：紫外可見分光光度計的基本操作

?紫外-可見分光光度法模塊之任務2：紫外可見分光光度計的基本操作UV-VIS怕口口I未f王?能力目標1義器幻析》精品課程口能認知儀器組成、配套部件和控制面板口閱讀說明書，編寫儀器操作規(guī)程口能熟練操作紫外-可見分光光度計口能對儀器進行校驗，和對儀器進行日常維護與保養(yǎng)?課程引入1義器幻析》精品課程I口

2005年中央12臺曾報道，上海市的蔡女士一家剛住進新房沒多久,丈夫就得了白血病去世。通過檢測機構對室內的空氣質量進行一次檢測，發(fā)現儲藏室和臥室中的甲醛含量竟然遠遠超出標準值的三倍?？谡埓蠹宜伎迹F代家裝過程中經常會出現甲醛超標，如何進行測定?0國家標準《公共場所空氣中甲醛測定方法》(GB/T18204.26-2000)0第一法：酚試劑分光光度法（仲裁法）0第二法：氣相色譜法。口學生根據所查資料現場討論以決定各方法的優(yōu)劣~測定過程1又器分析》精品課程口打開電源開關口檢驗吸收池的成套性（具體過程在后面內容中操作）口選擇工作波長（按設定鍵，以及增加、減小按鈕，進行設定）?測定過程二1義器幻析》精品課程口選擇測量方式（按方式鍵選擇透射比模式與吸光度模式）口潤洗比色皿，依次裝入參比溶液和測量溶液口參比溶液于光路中，透射比模式下同時調0和100%口在吸光度模式下，測定測量溶液的吸光度N學生自學儀器使用說明書口學生閱讀儀器UV-7504使用說明書口對照說明書，學生認知儀器的主要組成部分?組成結構1義器幻析》精品課程光源單色器吸收池檢測器＞信號顯示系統(tǒng)_.■?光源1義器幻析》精品課程光源：提供符合要求的入射光。要求：在整個紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用壽命。紫外光源一氘燈(185-375nm)可見光源一鎢燈(320-1000nm)?單色器、1義器幻析》精品課程忸定口單色器：將光源發(fā)射的復合光分解成連續(xù)光譜并可從中選岀任一波長單色光的光學系統(tǒng)?？趩紊髦饕瑟M縫、色散元件和透鏡系統(tǒng)組成。0色散元件是棱鏡和反射光柵的組合0狹縫和透鏡系統(tǒng)控制光的方向口棱鏡單色器0利用不同波長的光在棱鏡內折射率不同將復合光色散為單色光?？诠鈻艈紊?一系列等寬、等距離的平行狹縫0以光的衍射現象和干涉現象為基礎（平面反射光柵和平面凹面光柵）?吸收池1義器幻析》精品課程口吸收池：又叫比色皿，用于盛放待測溶液和決定透光液層厚度的器件?？谥饕惺⑽粘睾筒Ａ粘貎煞N。___口在紫外區(qū)須采用石英吸收池,可見區(qū)一般用吸收玻璃池。口

主要規(guī)格0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm和5.0cm注意事項：手執(zhí)兩側的毛面，盛放液體高度四分之三。~檢測器1義器幻析》精品課程口檢測器：利用光電效應將透過吸收池的光信號變成可測的電信號?？诔Ｓ玫臋z測器有光電池、光電管及光電倍增管。光電池光電管光電倍增管?信號顯示系統(tǒng)1義器幻析》精品課程信號顯示器口以檢流計或微安表指示儀表口數字顯示和自動記錄型裝置?其他型號儀器IX器分析請學生對其他類型的分光光度計認知7230型紫外可見分光光度計?學生進行儀器的基本操作訓練T冃口口咪f王?儀器操作規(guī)程71義器幻析》精品課程口學生總結、歸納并示范Uv7504儀器的操作規(guī)程?？趯W生總結、歸納7230儀器的操作規(guī)程。1儀器的校驗一儀器幻析》精品課程波長準確度的準確檢查同學們根據教師的要求用白紙片遮住光路，改變波長從750nm到400nm,觀察白紙片中顏色的變化。譜釹濾光片吸收曲線苯蒸汽的吸收曲線?儀器的校驗二1義器幻析》精品課程透射比正確度的檢驗WKCrO7

=0.006000%的溶液的透射比波長/nm溫度/°c2352573133502518.213.751.322.9以0.001mol.LTHCQ4為參比，以1cm的石英比色皿做吸收池，分別在235、257、313、350波長處測定相應溶液的透射比。?儀器的校驗三1義器幻析》精品課程吸收池成套性檢驗___JJG178-96規(guī)定：石英吸收池：220nm、蒸餾水；350nm、K2Cr2O7Q.Q01mol.L-1HClQ4溶液；玻璃吸收池：600nm、蒸餾水；相對校正法：用一套比色皿裝待測試樣的溶劑，以其中一個為參比，測定其他吸收池的吸光度。若吸光度為零，或相等，即可配對。若不相等，可選最小吸光度值的作參比，測定其它的吸光度，求修正值。軸學生操作訓練、教師指導口學生操作，教師指導?？陔S機抽查學生進行操作演示。口學生評價。1日常維護、保養(yǎng)1義器幻析》精品課程口對儀器工作環(huán)境的要求穩(wěn)固的工作臺溫度、濕度合適口

儀器保養(yǎng)和維護方法儀器工作電源光源使用注意事項單色器使用注意事項正確使用吸收池1故障排除1義器幻析》精品課程故障現象可能原因排除方法1.開啟電源開美，儀器無反應2.光源燈不工作(1)電源未接通(2)電源保險絲斷(3)儀器電源開關接觸不良(1)光源燈壞⑵光源供電器壞(1)檢查供電電源和連接線(2)更換保險絲(3)更換儀器電源開關(1)更換新燈(2)檢查電路，看是否有電壓輸出，請求維修人員維修或更換電路板3.光源亮度不可調電路故障請求維修或更換有關電路元件1故障排除1義器幻析》精品課程?引入IX器分析T冃口口咪f王口問題：為什么分光光度法能測定空氣中甲醛的含量?口主要是由于空氣中的甲醛與酚試劑反應生成嗪，嗪在酸性溶液中被高鐵離子氧化形成蘭綠色化合物，可以對630nm的光產生選擇性吸收,而可以建立相應的分析方法?？趩栴}：為什么不同的物質呈現不同的顏色？?原因口由于溶液對光的選擇性吸收引起的，溶液呈現的是被吸收物質的互補色?？诹蛩徙~溶液吸收黃光，呈現蘭色?？诟咤i酸鉀溶液吸收綠色光，呈現紫紅色?幾種光的性質1義器幻析》精品課程200-780nm區(qū)域光的選擇性吸收而建立起來的分析方法。?紫外可見分光光度法概念口紫外可見分光光度法是基于物質分子對紫外區(qū)口單色光：具有同一波長的光稱為單色光?！鯊秃瞎猓汉卸喾N波長的光稱為復合光?？诨パa光：如果把適當顏色的兩種光按一定強度比例混合,可合成白色光，這兩種顏色的光稱為互補色?？诳梢姽猓悍彩悄鼙蝗庋鄹杏X到的光稱為可見光?？梢妳^(qū)紅軒區(qū)J--ooOO6O.478?紫外可見分光光度法分類1義器幻析》精品課程,目視比色法［紫外分光光度法］?光電比色法一分光光度法A紫外可見分光光度法?可見分光光度法」比色分析法：利用比較待測溶液本身的顏色或加入試劑后呈現的顏色深淺來測定溶液中待測物質的濃度的方法按檢測器不同分為目視比色法和光電比色法。以人的眼睛來檢測顏色深淺的方法稱目視比色法；以光電轉換器為檢測器來區(qū)別顏色深淺的方法稱光電比色法；根據物質對不同波長的單色光的吸收程度不同而對物質進行定性和定量分析的方法稱為分光光度法。?紫外可見分光光度法特點IX器分析T冃口口咪f王口較咼的靈敏度；口適合于測定低含量和微量組分，而不適用于中高組分口分析速度快，操作簡便；口價格低廉，應用廣泛?紫外可見分光光度法應用口紫外吸收光譜可用于芳香化合物及含共軛體系化合物的鑒定與結構分析口紫外與可見分光光度法均可用于定量分析?！踝贤馀c可見分光光度法還可用于化學反應平衡的研究。?紫外可見分光光度計類型》蚌匚I;田壬口f徊口口誅不王口按波長范圍劃分：0可見分光光度計(400-780nm)0紫外可見分光光度計(200-1000nm)口按光路劃分：0單光束分光光度計0雙光束分光光度計0雙波長分光光度計?光路1義器幻析》精品課程單光束分光?吸收光譜曲線（定性分析）1義器幻析》精品課程1-c(KMnO4)=1.56X10-4mol-L-12-c(KMnO4)=3.12X10-4mol-L-13-c(KMnO4)=4.68X10-4mol-L-1KMnO4溶液的光吸收曲線口將不同波長的光依次通過某一固定濃度和厚度的有色溶液，分別測出它們對各種波長光的吸收程度（用吸光度A表示）。口以波長為橫坐標，以吸光度為縱坐標作圖畫出曲線，此曲線即稱為該物質的光吸收曲線（或吸收光譜曲線）。0溶液對不同波長的光的吸收程度是不同的，存在最大吸收峰的位置稱為最大吸收波長。0不同濃度的溶液，其吸收曲線的形狀相似,最大吸收波長也一樣。0不同物質的吸收曲線，其形狀和最大吸收波長都各不相同，可利用吸收曲線來作為物質定性分析的依據。?朗伯定律《僅器分析k_T冃口口咪f王光的吸收程度與光程長的關系?2.0x10-40.4273.0x10-41.0x10-3(mol/L)0.6410.750KMnO4c/mol/Ll.OxlO-4A.

0.216?比爾定律1義器幻析》精品課程光的吸收程度與濃度的關系??光吸收定律（定量分析）1義器幻析》精品課程光吸收定律：A

=lg虹=lg1=Kbc幾個概念：入射光通量、透射光通量、透射比、吸光度、比例常數成立的條件：＞一是必須使用單色光＞二是吸收發(fā)生在均勻的介質＞三是吸收過程中，吸收物質互相不發(fā)生作用?吸收系數1義器幻斬》精品課程gy吸收系數的物理意義：單位濃度的溶液液層線厚度為1cm時，在一定波長下測得的吸光度。A=ebcA=abp影響吸收定律的主要因素：入射光非單色性、溶液因素、