《環(huán)境毒理學(xué)》06 化學(xué)物質(zhì)的毒理學(xué)安全性評價程序

第六章化學(xué)物質(zhì)的毒理學(xué)安全性評價程序化學(xué)物質(zhì)總量：超過1000萬種

投入生產(chǎn)和使用：約10萬種每年近千種新化學(xué)物質(zhì)投入生產(chǎn)和使用化學(xué)物質(zhì)的毒理學(xué)安全性評價：通過動物實驗和人群觀察，闡明某種物質(zhì)的毒理及潛在危害，對該物質(zhì)能否投入市場作出取舍的決定，或提出人類安全的接觸條件，即對人類使用這種物質(zhì)的安全性作出評價的研究過程。1982：《農(nóng)藥毒性試驗方法暫行規(guī)定（試行）》1991：《農(nóng)藥安全性毒理學(xué)評價程序》1983：《食品安全性毒理學(xué)評價程序（試行）》1994：《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》1987：《化妝品安全性評價程序和方法》1988：《新藥（西藥）毒理學(xué)研究指導(dǎo)原則》2004：

《保健食品安全性毒理學(xué)評價程序》第一節(jié)毒理學(xué)安全性評價程序的內(nèi)容

一.試驗前的準(zhǔn)備工作

1.

收集受試物有關(guān)的基本資料（1）化學(xué)結(jié)構(gòu)

亞硝胺類對哺乳動物的致癌性因取代基不同而不同二苯甲基、二丙烯基亞硝胺不致癌二乙基、二丁基亞硝胺誘發(fā)肝癌、食道癌膀胱癌（2）理化性質(zhì)和純度溶解度、沸點、蒸氣壓、分散度、化學(xué)穩(wěn)定性（3）受試物的應(yīng)用情況及其用量2.

受試物樣品及試驗動物

受試物試驗樣品：與實際生產(chǎn)和使用中人類直接或間接接觸相同的物質(zhì)

試驗動物的選擇

：

對受試物的代謝方式盡可能與人類相似

大鼠

純系動物：來自同一祖先，經(jīng)同窩近親交配至少20代以上所繁殖的動物

內(nèi)部雜交動物：同一單位自身品系內(nèi)經(jīng)多代繁殖所得的動物

第一代雜交動物：兩種純品系動物雜交后的第一代雜交動物

穩(wěn)定的遺傳性個體差異小，重復(fù)性好

二.安全性評價的程序正式投產(chǎn)前的毒理學(xué)評價投產(chǎn)后在使用人群中繼續(xù)觀察毒副作用

1.第一階段（急性毒性試驗）

2.第二階段（致突變試驗）

3.第三階段（亞慢性毒性試驗、致畸試驗、生殖試驗和代謝試驗）

4.第四階段（慢性毒性試驗和致癌試驗）三.安全性評價試驗的選用原則

?

根據(jù)受試物的種類選擇相應(yīng)的毒理學(xué)試驗

四.安全性評價中需注意的問題

1.試驗方法的標(biāo)準(zhǔn)化

2.評價結(jié)論的綜合性第二節(jié)現(xiàn)有的化學(xué)物安全性毒理學(xué)評價程序一.農(nóng)藥安全性毒理學(xué)評價程序

農(nóng)藥登記要求：

?

申請正式登記需具備4個階段全套資料，進(jìn)口農(nóng)藥須提交4個階段試驗資料，并進(jìn)行必要的驗證試驗

?申請臨時登記或用于藥效實驗，可先提交第一、二階段的試驗資料

?補(bǔ)充登記（改變劑型或含量），需提交第一階段試驗資料，據(jù)評審結(jié)果確定是否需補(bǔ)充其他試驗項目

?要求將已登記的原藥混配成各種劑型的制劑，應(yīng)先提供急性經(jīng)口聯(lián)合毒性的試驗資料，如有明顯協(xié)同作用，則需進(jìn)行其他試驗

1.第一階段——急性毒性試驗和皮膚及眼睛粘膜試驗

試驗?zāi)康模孩僭u價農(nóng)藥的急性毒性

②為以后幾個階段的試驗設(shè)計提供依據(jù)（1）急性毒性試驗

試驗項目：

急性經(jīng)口毒性試驗（LD50）（大鼠和小鼠）

急性經(jīng)皮毒性試驗（LD50）（大鼠）

急性吸入毒性試驗（LC50）（大鼠）

計算方法：機(jī)率單位法、寇氏法、霍恩氏法等

結(jié)果評定：參照農(nóng)藥急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)

（2）皮膚及眼睛粘膜試驗

試驗項目：

眼刺激試驗（兔）

皮膚刺激試驗（兔或豚鼠）

皮膚致敏試驗（豚鼠）

結(jié)果評定：參照相應(yīng)的評價標(biāo)準(zhǔn)

?第一階段必做項目：急性經(jīng)口毒性試驗急性經(jīng)皮毒性試驗眼刺激試驗

2.第二階段——蓄積毒性試驗和致突變試驗

試驗?zāi)康模孩倭私廪r(nóng)藥在體內(nèi)的蓄積情況②確定農(nóng)藥有無致突變作用，及潛在的遺傳危害和致癌性

（1）蓄積毒性試驗

試驗項目：蓄積系數(shù)法或20天蓄積法受試動物：大鼠或小鼠

結(jié)果評定：蓄積系數(shù)法：蓄積系數(shù)<1，高度蓄積

1～3，明顯蓄積

3～5，中等蓄積＞5，輕度蓄積

20天蓄積法：如1/20LD50劑量組有動物死亡，且試驗結(jié)果存在劑量-反應(yīng)關(guān)系，為強(qiáng)蓄積性；若1/20LD50劑量組無死亡，但有劑量-反應(yīng)關(guān)系，為中等蓄積，無劑量-反應(yīng)關(guān)系為弱蓄積

（2）致突變試驗

試驗項目：

①原核細(xì)胞基因突變試驗：

Ames試驗或大腸桿菌回變試驗

②哺乳動物細(xì)胞染色體畸變分析：

體細(xì)胞：骨髓細(xì)胞微核試驗（大鼠或小鼠）或骨髓細(xì)胞染色體畸變分析試驗（大鼠和小鼠）中任選一項

生殖細(xì)胞：睪丸細(xì)胞（M1期精母細(xì)胞）染色體畸變分析試驗（小鼠）或顯性致死試驗（小鼠）中任選一項

結(jié)果評定：

①如三項試驗中有兩項或兩項以上陽性，且受試物為強(qiáng)蓄積性，一般應(yīng)予放棄；但如該產(chǎn)品在目前生產(chǎn)和使用中不可缺少，則應(yīng)進(jìn)行第三、第四階段試驗，并綜合衡量②如三項試驗中出現(xiàn)一項陽性，應(yīng)再選擇兩項其它致突變試驗

3.第三階段——亞慢性毒性試驗和代謝試驗（1）亞慢性毒性試驗

試驗?zāi)康模?/p>

①觀察農(nóng)藥以不同劑量水平長期喂養(yǎng)對動物的毒作用性質(zhì)和靶器官，初步確定最大無作用劑量和最小有作用劑量，以及劑量-反應(yīng)關(guān)系②了解農(nóng)藥對動物繁殖的影響及對子代的致畸作用③為慢性毒性和致癌試驗的劑量選擇、實驗設(shè)計提供依據(jù)④為農(nóng)藥安全使用提供依據(jù)

試驗項目：90日經(jīng)口試驗大鼠21日經(jīng)皮試驗大鼠或兔21日或28日吸入試驗（根據(jù)需要確定）

大鼠每日吸入4h遲發(fā)性神經(jīng)毒性試驗（根據(jù)需要確定）

母雞兩代繁殖試驗（根據(jù)需要確定）

大鼠致畸試驗（根據(jù)需要確定）

結(jié)果評定：

90日經(jīng)口試驗：最大無作用劑量≤人可能攝入量的100倍，表示毒性較強(qiáng)，一般應(yīng)予放棄，特殊情況需經(jīng)專家評議

21日吸入試驗和21日經(jīng)皮試驗：按工業(yè)毒物對人接觸性危害進(jìn)行評價

遲發(fā)性神經(jīng)毒性試驗：根據(jù)神經(jīng)毒性反應(yīng)評價

兩代繁殖試驗：根據(jù)動物的異?，F(xiàn)象、發(fā)生率及嚴(yán)重程度評價

致畸試驗：

致畸指數(shù)=雌性動物L(fēng)D50/最小致畸劑量致畸指數(shù)＜10，基本無致畸危害

10～100，有致畸危害＞100，強(qiáng)致畸危害

致畸危害指數(shù)=最大不致畸劑量/最大可能攝入量致畸危害指數(shù)＞300，危害性小

100～300，中等危害性＜100，嚴(yán)重危害性

（2）代謝試驗

試驗?zāi)康模?/p>

①了解農(nóng)藥在體內(nèi)的吸收、分布和排泄速度以及蓄積性②測定其在主要器官組織中的分布

4.第四階段——慢性毒性（包括致癌）試驗

試驗?zāi)康模?/p>

①確定動物長期接觸農(nóng)藥后產(chǎn)生的危害，尤其是進(jìn)行性或不可逆的毒作用和致癌作用②確定最大無作用劑量，為制定每人每日容許攝入量（ADI）和農(nóng)藥最大殘留限量（MRL）或施藥現(xiàn)場空氣最高容許濃度（MAC）提供依據(jù)

試驗時間：大鼠24個月，小鼠18個月

結(jié)果評定：

慢性毒性試驗：

①最大無作用劑量≤人可能攝入量的50倍，表示毒性較強(qiáng)，一般應(yīng)予放棄②最大無作用劑量為50倍～100倍人可能攝入量，由專家共同評議后決定③最大無作用劑量＞100倍人可能攝入量，可以考慮允許使用

致癌試驗：參照世界衛(wèi)生組織提出的判斷標(biāo)準(zhǔn)二.食品安全性毒理學(xué)評價程序

適用范圍：食品生產(chǎn)、加工、保藏、運(yùn)輸和銷售過程中使用的化學(xué)和生物物質(zhì)以及在這些過程中產(chǎn)生污染的有害物質(zhì)，食物新資源及其成分和新資源食品，及食品中其他有害物質(zhì)

不同受試物試驗選擇原則：

創(chuàng)新的物質(zhì)：四個階段的試驗

與已知物質(zhì)（指經(jīng)過安全性評價并允許使用者）的化學(xué)結(jié)構(gòu)基本相同的衍生物或類似物：由前三階段試驗結(jié)果決定是否進(jìn)行第四階段試驗

已知的化學(xué)物質(zhì)（WHO已公布ADI，我國產(chǎn)品的質(zhì)量、規(guī)格與國外產(chǎn)品一致）：

第一、二階段試驗

結(jié)果與國外是否一致

允許使用第三階段試驗

1.第一階段——急性毒性試驗

試驗?zāi)康模孩贉y定LD50，了解受試物的毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官②為后續(xù)試驗劑量和毒性判定指標(biāo)的選擇提供依據(jù)

試驗項目：經(jīng)口急性毒性試驗和聯(lián)合急性毒性試驗

結(jié)果評定：

LD50＜人可能攝入量的10倍，受試物毒性過大，放棄用于食品

LD50＞人可能攝入量的10倍，可進(jìn)入第二階段試驗

LD50在人可能攝入量的10倍左右，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)試驗2.第二階段——遺傳毒性試驗，傳統(tǒng)致畸試驗，短期喂養(yǎng)試驗

試驗?zāi)康模?/p>

①對受試物的遺傳毒性以及是否具有潛在致癌作用進(jìn)行篩選②了解受試物對胎仔是否具有致畸作用③對只需進(jìn)行第一、二階段試驗的受試物，可進(jìn)一步了解其毒性作用，并初步估計最大無作用劑量（短期喂養(yǎng)試驗）

（1）遺傳毒性試驗

試驗項目：①細(xì)菌致突變試驗（首選Ames試驗）②小鼠骨髓微核率測定和骨髓細(xì)胞染色體畸變分析試驗③小鼠精子畸形分析和睪丸染色體畸變分析

試驗

?

在以上三大類中選擇四項進(jìn)行試驗

三大類中選擇四項試驗結(jié)果評定

四項陰性一項陽性二項陽性三項陽性補(bǔ)充兩項其它短期喂養(yǎng)試驗遺傳毒性試驗顯示顯著毒性，

進(jìn)放棄放

入一項陽性二項陽性

短期喂養(yǎng)試驗棄短期喂養(yǎng)試驗、顯示可疑毒性，傳統(tǒng)致畸試驗放綜合權(quán)衡評議

未顯示明顯毒棄可否進(jìn)入

性和致畸作用可進(jìn)入

第三階段試驗

（2）短期喂養(yǎng)試驗（30天喂養(yǎng)試驗）

適用范圍：一般用于只需進(jìn)行第一、二階段毒性試驗的受試物

結(jié)果評定：①未顯示明顯毒性作用，則綜合各項試驗結(jié)果可作出初步評價

②顯示明顯毒性作用，尤其有劑量-反應(yīng)關(guān)系時，應(yīng)考慮進(jìn)一步試驗

3.第三階段——亞慢性毒性試驗（90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、代謝試驗）

（1）90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗

試驗?zāi)康模?/p>

①觀察受試物以不同劑量水平較長期喂養(yǎng)后，對動物的毒性作用性質(zhì)和靶器官，并初步確定最大無作用劑量②了解受試物對動物繁殖的影響及對子代的致畸作用③為慢性毒性和致癌試驗的劑量選擇提供依據(jù)90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗和傳統(tǒng)致畸試驗的結(jié)果評定

以3項試驗中采用的最感敏指標(biāo)所得最大無作用劑量進(jìn)行評價

最大無作用劑量最大無作用劑量最大無作用劑量≥300倍人可能＞100倍、＜300倍≤100倍人可能攝入量人可能攝入量攝入量

不必進(jìn)放進(jìn)入入