長(zhǎng)鏈非編碼RNASox2OT過表達(dá)對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

長(zhǎng)鏈非編碼RNASox2OT過表達(dá)對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

Summary目的探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)Sox2OT過表達(dá)對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷及PI3K/Akt通路的影響。方法選取大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細(xì)胞株(PC12)，利用Aβ1-42對(duì)PC12細(xì)胞進(jìn)行處理，建立AD的細(xì)胞模型。將Aβ1-42誘導(dǎo)前的PC12細(xì)胞設(shè)為空白組；將Aβ1-42誘導(dǎo)后的PC12細(xì)胞分為control組、Sox2OT過表達(dá)(p-Sox2OT)組、p-Sox2OT空載體(p-NC)組、抑制Sox2OT表達(dá)(si-Sox2OT)組和si-Sox2OT空載體(si-NC)組。使用噻唑藍(lán)(MTT)方法對(duì)細(xì)胞的增殖活性進(jìn)行檢測(cè)；采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞周期和凋亡率進(jìn)行檢測(cè)；采用Westernblot檢測(cè)PI3K/Akt通路蛋白的表達(dá)。結(jié)果MTT結(jié)果顯示，與空白組(99.67±10.50)相比，control組(29.33±5.51)的細(xì)胞增殖率顯著降低(t＝10.27，P<0.05)。RT-qPCR結(jié)果顯示，與control組(0.52±0.06)相比，p-Sox2OT組(2.19±0.16)中的Sox2OT的mRNA表達(dá)水平顯著升高(t＝16.93，P<0.05)，si-Sox2OT組(0.22±0.02)中的Sox2OT的mRNA表達(dá)水平顯著下降(t＝15.28，P<0.05)；與p-NC組(0.53±0.12)相比，p-Sox2OT組(2.19±0.16)中的Sox2OT的mRNA表達(dá)水平顯著升高(t＝16.25，P<0.05)；與si-NC組(0.51±0.09)相比，si-Sox2OT組(0.22±0.02)中的Sox2OT的mRNA表達(dá)水平顯著下降(t＝16.93，P<0.05)；control組與p-NC組以及si-NC組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。此外，p-Sox2OT組細(xì)胞的增殖能力(145.00±5.12)顯著高于si-Sox2OT組(23.33±4.93)、control組(55.00±5.00)、si-NC組(57.33±8.51)以及p-NC組(56.00±5.57)(t＝29.65，21.78，27.55，21.35，均P<0.05)。Control組與p-NC組以及si-NC組間細(xì)胞增殖率的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。細(xì)胞周期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)顯示，p-Sox2OT組G1期的細(xì)胞數(shù)量顯著低于control組和p-NC(t＝9.80，8.57；均P<0.05)，而p-Sox2OT組G2期的細(xì)胞數(shù)量與control組和p-NC組相比卻顯著升高(t＝11.02，10.25；均P<0.05)；si-Sox2OT組G1期的細(xì)胞數(shù)量顯著高于control組和si-NC組(t＝8.22，3.11，均P<0.05)，而G2期的細(xì)胞數(shù)量與control組和si-NC組相比卻顯著下降(t＝6.32，5.33；均P<0.05)；control組與p-NC組以及si-NC組間的細(xì)胞周期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。在S期中，只有p-Sox2OT組與control組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝1.84，P<0.05)。p-Sox2OT組細(xì)胞凋亡率[(3.66±0.26)%]低于si-Sox2OT組[(14.25±0.80)%]、control組[(8.46±0.44)%]、si-NC組[(8.78±0.44)%]以及p-NC組[(8.40±0.21)%](t＝21.81，16.27，20.32，21.35，均P<0.05)。Control組與p-NC組以及si-NC組間的細(xì)胞凋亡率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Westernblot結(jié)果顯示，p-Sox2OT組中p-PI3K和p-Akt蛋白的表達(dá)明顯高于p-NC(P<0.05)；與si-NC組相比，si-Sox2OT組PC12細(xì)胞中p-PI3K和p-Ak