雞飼料加工工藝及飼料檢測-陳德林

蛋雞飼料的加工及檢測陳德林S20153415（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所，動物抗病營養(yǎng)教育部重點實驗室，成都611130）摘要：我國飼料加工業(yè)已經(jīng)走過30多年的歷程，蛋雞飼料加工一直沿用傳統(tǒng)的加工工藝，一般都是粉碎料較粗的粉狀配合飼料。隨著人們生活水平的提高和對食品安全的高度關(guān)注，飼料安全也越來越引起人們的重視，而傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的蛋雞飼料未經(jīng)熟化處理存在著含菌率高、飼料安全性較差和飼料消化吸收率低等問題，對雞蛋的品質(zhì)產(chǎn)生著較大的影響。如何從加工工藝上對蛋雞飼料的生產(chǎn)這個專題進行研發(fā)、改進，以保證和提升產(chǎn)品的品質(zhì)和安全性，關(guān)注的人并不多。本文中就這個專題進行了較全面的論述，希望能對業(yè)內(nèi)相關(guān)科技工作者起到參考和借鑒的作用。關(guān)鍵詞：肉雞飼料加工工藝檢測蛋雞是我國重要的養(yǎng)殖對象，30年來我國蛋雞飼養(yǎng)量和產(chǎn)蛋量均居世界第一，人均消費量2007年達19kg，已趕上發(fā)達國家。2007年雞蛋產(chǎn)量2045萬噸，每年10%～12%遞增。2010年蛋雞飼料的消耗量約3000萬噸左右。蛋雞的飼料加工在國內(nèi)飼料加工廠一直沿用著傳統(tǒng)加工工藝，即將玉米等原料破碎成3～4塊的大顆粒，飼料全部為生粉料，未經(jīng)熟化處理的飼料則含菌率高、飼料安全性較差和飼料消化吸收率低等問題，在人們對食品安全標(biāo)準(zhǔn)要求高的今天，現(xiàn)有的飼料加工工藝就不符合安全要求了。為此，對該加工工藝進行討論以供參考。1國內(nèi)外蛋雞飼料加工概況20世紀(jì)70~90年代，粉狀配合飼料幾乎都是生粉料。由于有些禽仍須用粉狀配合飼料來喂養(yǎng)，才能獲得較好的喂養(yǎng)效果，但生粉料在飼料的安全性和消化吸收率方面有一定的不足。特別在流行病的蔓延時，粉狀配合飼料缺陷就充分顯示出來。為此，歐盟對飼料的安全性提出了新的標(biāo)準(zhǔn)和要求。1997年歐盟提出解決飼料安全問題的提議；1998年歐盟提出了飼料監(jiān)督檢查規(guī)范；1999年歐盟成立健康與消費者協(xié)會；2000年歐洲飼料工業(yè)白皮書，論述了飼料安全的重要性和飼料不安全的現(xiàn)狀；2002年歐洲安全飼料(機構(gòu))的創(chuàng)立。飼料安全的重要性已引起各國飼料工作者嚴(yán)重的關(guān)注。90年代末熟化粉狀飼料在歐洲問世，成為飼料家屬中新的一員。先進國家在2000年前后提出熟化粉料的加工工藝；并用于蛋雞飼料加工，在國際上得到認(rèn)可，已在歐洲、美洲和亞洲等各大洲得到廣泛的應(yīng)用，取得較好的效果，日本就介紹采用該工藝生產(chǎn)的雞飼料，雞所生的雞蛋是絕對安全的。但我國飼料加工的技術(shù)人員和養(yǎng)殖戶對飼料安全的理念落后于國外先進國家，尚不認(rèn)可和運用既節(jié)能(與制粒相比)，又環(huán)保，又節(jié)約飼料資源的加工工藝。國外從上世紀(jì)60年代提出動物福利的概念：動物有不受饑渴的自由；有不受痛苦和疾病威脅的自由；有生活無恐懼和應(yīng)激的自由；有生活舒適的自由等。2002年召開了國際動物與立法研究會，2005年在北京召開了動物福利與肉品安全國際論壇。近年來動物福利的概念開始引起國內(nèi)外養(yǎng)殖者的關(guān)注，特別是瑞士成為動物福利待遇最好的國家，該國早已立法禁止出售和進口籠養(yǎng)蛋雞所生的雞蛋。動物福利概念正將成為一種普遍原則，亦有可能成為國際貿(mào)易標(biāo)準(zhǔn)和壁壘。目前已有100多個國家制定了禁止虐待動物法案。對我國蛋品出口不僅要求雞蛋品質(zhì)的安全，而且要求蛋禽生產(chǎn)環(huán)境的自由。蛋雞的飼料加工工藝一直沿用著傳統(tǒng)加工工藝，即將玉米等原料開破成3～4塊的大顆粒，然后就參與配料、混合等未熟化的加工工藝，影響蛋雞的生長和安全，因此，蛋雞的死淘率達20%以上，不僅影響雞蛋的產(chǎn)量，而且影響蛋的質(zhì)量和造成飼料資源浪費，使雞蛋含菌率較高，不能達到安全衛(wèi)生雞蛋的標(biāo)準(zhǔn)。2蛋雞飼料的特點蛋雞飼料一般采用大顆粒粉狀飼料，而不用顆粒飼料，如用顆粒飼料，飼料的能量密度應(yīng)有所調(diào)整和降低才能符合要求。粉狀蛋雞飼料的能量11.51MJ/kg[1]，同時要求飼料為大顆粒的粉狀飼料，使蛋雞要較長時間的采食，消耗過多的能量。從雞的消化特性來看粉狀飼料不能過細。目的是不希望育成期的蛋雞得到過多的能量，在體內(nèi)積存過多的脂肪，否則會影響雞的骨骼和內(nèi)臟生長發(fā)育，使生殖系統(tǒng)功能減退，而影響產(chǎn)蛋率和產(chǎn)蛋的質(zhì)量。所以，飼料配方與飼料的料型都將影響產(chǎn)蛋率，只有合理的配方和料型，才能確保蛋雞達到80%～90%的高產(chǎn)蛋率。3蛋雞飼料的加工工藝及設(shè)備飼料加工過程是指飼料原料處理及飼料產(chǎn)品生產(chǎn)的過程。飼料加工過程包括粉碎、配料、混合、制粒、破碎、發(fā)酵、膨化等。其中，粉碎、制粒、發(fā)酵及膨化加工工藝對飼料營養(yǎng)及其飼喂效果影響較大。我國家禽飼料的加工目前仍然采用先粉碎后配料的傳統(tǒng)工藝，流程圖如2[2]養(yǎng)成分未發(fā)生變化，但是飼料原料粒度由大變小，飼料原料表面積增加，相應(yīng)地在家禽腸道中飼料原料與消化液中的消化酶、腸道黏膜表面接觸的面積增大，飼料原料消化吸收率提高。粉碎能夠提高飼料原料營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率，但是并非飼料粉碎粒度越小越好，李清曉等[3]研究顯示，豆粕粉碎粒度分別為529、449、334、210μm時，飼料能量代謝率、干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)及主要氨基酸消化率不同，其中豆粕粉碎粒度為449μm的日糧上述營養(yǎng)物質(zhì)消化率最高。孟艷莉等[4]在蛋雞上的研究也顯示，小麥粉碎過4mm篩配制的日糧比過2、6mm篩配制的日糧粗蛋白質(zhì)消化率高，造成上述試驗結(jié)果的原因：一方面是因為飼料原料粉碎后，在腸道內(nèi)與消化酶、腸黏膜表面接觸面積變大導(dǎo)致消化率提高所致；另一方面也與較大粒度飼料在動物腸道內(nèi)能夠通過機械刺激促進腸道發(fā)育有關(guān)，所以飼料原料并非粉碎粒度越小，營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收率提高越大，而是有一定的適宜范圍。3.2制粒工藝飼料加工過程中完整的制粒工藝包括調(diào)質(zhì)和制粒兩個過程，其中調(diào)質(zhì)就是對飼料進行水熱處理，使其淀粉糊化、蛋白質(zhì)變性、物料軟化，提高壓制顆粒的質(zhì)量和效果，最常見的調(diào)質(zhì)方法是直接通入蒸汽進行水熱處理；制粒主要指經(jīng)過調(diào)質(zhì)的粉狀飼料在顆粒機的機械擠壓作用下制成顆粒飼料的過程。家禽飼料制粒效果的主要評價指標(biāo)是飼料含粉率、粉化率及顆粒硬度，其中含粉率是指顆粒飼料中未成顆粒的粉料占總飼料量的百分比，粉化率是指顆粒飼料在特定條件下產(chǎn)生的粉料占總飼料量的百分比，硬度是指顆粒在徑向所能承受的垂直壓力，以千克力為單位。3.3膨化工藝膨化工藝是指將飼料加溫、加壓處理，并擠出模孔或突然噴出壓力容器，壓力迅速降低而體積突然膨大的過程，飼料在膨化機中的溫度可達到120～170℃，壓力可達到2.94～19.71MPa，停留時間可達5～15s。根據(jù)膨化過程中是否進行水熱處理，可將膨化工藝分為干法膨化和濕法膨化兩種，濕法膨化相對干法膨化更具優(yōu)勢，一方面生產(chǎn)效率大大提高，另一方面也降低了機器部件的磨損，所以目前常用的膨化工藝是濕法膨化。與制粒工藝相似，膨化工藝也包括調(diào)質(zhì)和膨化兩個過程，不同的是膨化過程中的溫度及壓力等參數(shù)比制粒過程中的相應(yīng)參數(shù)值高，正是因為制粒和膨化工藝有相似的水溫調(diào)質(zhì)過程，同時在制粒和膨化時均有高溫處理過程，所以兩者對飼料營養(yǎng)價值的影響相似，但是由于處理過程中溫度、壓力等參數(shù)的不同，所以兩者也不完全一致。3.4發(fā)酵工藝飼料發(fā)酵工藝主要是在人工控制條件下，利用微生物對單一飼料原料或混合飼料進行發(fā)酵處理，從而改善飼料原料或飼料品質(zhì)的飼料加工過程。按照發(fā)酵介質(zhì)形態(tài)的不同可將發(fā)酵工藝概況的分為液體發(fā)酵工藝和固體發(fā)酵工藝，本文中所指的發(fā)酵工藝主要指固體發(fā)酵工藝，即微生物在沒有或基本沒有游離水的固態(tài)介質(zhì)上（飼料原料或飼料）進行發(fā)酵的飼料加工工藝。固體發(fā)酵工藝生產(chǎn)發(fā)酵飼料的過程受多種因素的影響，主要包括發(fā)酵物料碳氮比例、物料粉碎粒度與疏松程度、物料含水率、物料初始pH值、菌種種類與接種數(shù)量、發(fā)酵溫度與發(fā)酵時間等，正是由于這些因素的影響，發(fā)酵飼料產(chǎn)品品質(zhì)非常不穩(wěn)定，在實際生產(chǎn)中，要盡可能的對上述參數(shù)進行優(yōu)化和控制，以生產(chǎn)出品質(zhì)優(yōu)良穩(wěn)定的發(fā)酵飼料產(chǎn)品。4建立飼料安全系統(tǒng)現(xiàn)如今飼料的加工工藝已經(jīng)基本能夠滿足動物的各種生長需要和動物產(chǎn)品的生產(chǎn)，但是動物飼料的安全性問題便浮出水面，顯得尤為突出。因此建立飼料安全系統(tǒng)非常重要。4.1危險因素4.1.1物理性:雜質(zhì)，如玻璃和金屬。4.1.2化學(xué)性:污染物或雜質(zhì)，如殺蟲劑殘留、處理種子的藥物、防凍劑、化肥。4.1.3生物性:雜質(zhì)或污染物，如真菌毒素、沙門氏菌、有毒種子、昆蟲。4.2關(guān)鍵控制點及檢測方法4.2.1原料接受工段:如控制毒素和雜物等。4.2.1.1重金屬殘留原子吸收光譜分析在飼料中廣泛應(yīng)用，主要是對飼料中金屬元素總量進行檢測，如飼料中的銅、鋅、鐵、錳、鈷、鎳等金屬元素的檢測[5]。目前電感耦合等離子體發(fā)射光譜主要用于飼料中金屬元素的分析，因為儀器的普及程度不如其他兩種類型的儀器，因此在制定標(biāo)準(zhǔn)時很少采用。對飼料中金屬元素的檢測除應(yīng)用光譜分析技術(shù)外，Mahesar等[6]應(yīng)用微分脈沖陽極溶出伏安法（DPASV）檢測28中不同商業(yè)家禽飼料中的鋅、鎘、鉛和銅，檢出限分為0.69、0.35、0.68和0.24μg/kg。4.2.1.2農(nóng)藥殘留及違禁藥物添加我國國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的飼料中農(nóng)藥殘留如有機磷（GB/T18969—2003）、除蟲菊酯類（GB/T19372—2003）、氨基甲酸酯類（GB/T19373—2003）等大多數(shù)農(nóng)藥殘留的檢測均采用氣相色譜分析方法。隨著國家對飼料安全問題的重視，飼料標(biāo)準(zhǔn)化委員會組織制定了大批飼料中違禁藥物的檢測方法，如飼料中鹽酸克倫特羅、呋喃唑酮、磺胺喹惡啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、鹽酸氯苯胍等，飼料中西馬特羅、地西泮、苯巴比妥、氯丙嗪、己烯雌酚、雌二醇、玉米赤霉烯酮、氫化可的松、氯霉素、金霉素、土素、氯苯胍、喹乙醇、莫能菌素、拉沙絡(luò)西鈉、桿菌肽鋅、氯羥吡啶、尼卡巴嗪、鹽霉素、林可霉素、百里霉素、鹽酸氨丙啉、二甲硝咪唑等等，大部分采用液相譜或液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進行分析。此外，也進行了一些飼料中藥物尤其是違禁藥物的分析研究工作，如Wang等[7]通過固相萃取等凈化技術(shù)，對飼料中硝呋烯腙進行液相色譜分析，檢出限達到0.05mg/kg，定量限為0.2mg/kg。對飼料中多種藥物的同步檢測分析是現(xiàn)今飼料分析技術(shù)的主流方向之一。Shen等[8]應(yīng)用高效毛細管電泳測定了飼料中5種苯并咪唑類藥物，檢出限低于2mg/kg，所有藥物的回收率均大于73%，變異系數(shù)低于10%。Galarini等[9]應(yīng)用液相色譜熒光檢測器和紫外檢測器檢測了飼料中的11種喹諾酮類藥物，檢出限為0.04~0.8mg/kg，回收率為69%~98%，變異系數(shù)低于10%。Driver等[10]用柱后衍生離子交換色譜熒光檢測了飼料中的新霉素B和新霉素C，在治療劑量的飼料產(chǎn)品中新霉素含量范圍為50%~0.005%（質(zhì)量比，以新霉素為基礎(chǔ)計）時，新霉素B平均回收率是100.4%，變異系數(shù)2.28%，新霉素C的回收率是97.5%，變異系數(shù)4.36%，均有良好的分析效果。免疫學(xué)方法是在特異性抗體-抗原反應(yīng)原理基礎(chǔ)上建立的，在20世紀(jì)初被用來進行肉的種類的鑒別，主要有酶聯(lián)免疫法（ELISA）、放射免疫法（RIA）和免疫熒光法（FIA）?，F(xiàn)在已有多種試劑盒被研發(fā)出來，用于飼料中違禁藥物如鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、地西泮、沙丁胺醇、氯丙嗪、四環(huán)素、呋喃類藥物等。Jiménez等[11]應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法檢測飼料中的磺胺類藥物。Shiu等[12]建立了靈敏的檢測谷物飼料及飼料產(chǎn)品中伏馬菌素B1。完全競爭酶聯(lián)免疫法檢測商業(yè)飼料中的重組牛生長激素，在20~500μg/g有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.98，日內(nèi)和日間的變異系數(shù)為3.4%和5.3%，并且添加回收率為105%。Li等[13]應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測飼料中的四種呋喃類藥物，檢出限為0.2~2.1ng/g，平均回收率為75.9%~86.4%。Zhao等[14]應(yīng)用單克隆抗體酶聯(lián)免疫法堿性飼料中的喹乙醇，與液相色譜檢測方法有很高的相關(guān)性。4.2.1.3生物污染蛋雞飼料中的動物源性成分主要來自肉骨粉、魚粉等，這可能導(dǎo)致傳染性動物疾病的傳播。而飼料在倉庫中存放時，由于管理不當(dāng)，也會造成飼料的污染，目前對飼料中動物源性成分檢測主要以樣品的組織學(xué)特性和品種特異性的生物標(biāo)記物為對象（如蛋白質(zhì)、DNA[15]和其它生物大分子[16]等），由于PCR技術(shù)發(fā)展迅速，已逐步被世界各國采用。經(jīng)DNA提取，PCR擴增，電泳，純化提取等步驟后，可以準(zhǔn)確的檢測其中的生物源性成分。該方法與平板培養(yǎng)的靈敏度及專屬性基本一致。但也會有一些PCR檢測陽性的飼料中并不能分離出相關(guān)細菌，因此PCR方法目前還不能完全替代平板培養(yǎng)法，但可以用來進行流行病學(xué)調(diào)查研究的方法。4.2.1.4霉菌毒素飼料中的霉菌毒素是必檢項目，常采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行測定。方法如下：1方法原理樣品以三氯甲烷萃取，凈化并濃縮后，在選定的儀器參數(shù)下，進行液相色譜－質(zhì)譜分析。采用對照標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間和特征碎片離子定性，外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。2樣品制備與凈化按YC/T31-1996要求制備試樣。稱取研磨好的試樣5.0g，置于50ml具塞錐形瓶中，加入20ml三氯甲烷，超聲提取30min。過濾，收集濾液于帶有刻度尾管的濃縮瓶內(nèi)，并用三氯甲烷洗滌濾渣，收集清洗液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上述濾液在50℃水浴中濃縮至約1ml，加入4ml正己烷混勻，注入活化好的硅膠SPE小柱中。依次用5ml正己烷、5ml三氯甲烷淋洗，棄去流出液。然后，用10ml三氯甲烷－甲醇溶液（體積比為9:1）分2次洗脫，收集洗脫液于帶有刻度尾管的濃縮瓶內(nèi)。在氮氣保護，50℃水浴條件下，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將樣品濃縮至0.5ml。待液相色譜、質(zhì)譜分析。3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制用甲醇將黃曲霉素混標(biāo)稀釋為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度如表１所示。表1黃曲霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度ng/ml名稱1級2級3級4級5級6級AFB120105210.5AFB2631.50.60.30.15AFG120105210.5AFG2631.50.60.30.154儀器條件4.1色譜條件進樣量：10μg；色譜柱：ZorbaxSB-C18(2.1×50mm,1.8μm)；柱溫：45℃；流速：0.5ml/min；流動相：A---10mol/L乙酸銨－水溶液，B---10mmol/L乙酸銨－甲醇溶液；梯度洗脫：0minw(B)=5%、10minw(B)=40%、15minw(B)=100%、20minw(B)=100%，后運行5min。4.2質(zhì)譜條件離子源：ESI；干燥氣溫度：325℃；干燥氣流量：10L/min；霧化器壓力：34.75KPa(50psi)；毛細管電壓4000V；采集方式：MRM；三重串聯(lián)四極桿液質(zhì)多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），參數(shù)見表2。表２ＭＲＭ采集參數(shù)表名稱母離子／ｍ·ｚ－１子離子／ｍ·ｚ－１掃描時間／ｍｓ解離電壓／Ｖ碰撞能／ｅＶ采集模式定性／定量ＡＦＢ１３１３．１２８５．１５０１３０２０ｐｏｓｉｔｉｖｅ定量ＡＦＢ１３１３．１２６９．１５０１３０２５ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性ＡＦＢ１３１３．１２４１．０５０１３０３５ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性ＡＦＢ２３１５．１２８７．１５０１３０２５ｐｏｓｉｔｉｖｅ定量ＡＦＢ２３１５．１２５９．１５０１３０２５ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性ＡＦＢ２３１５．１２４３．０５０１３０４０ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性ＡＦＧ１３２９．１３１１．１５０１３０２０ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性ＡＦＧ１３２９．１２８３．０５０１３０２０ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性ＡＦＧ１３２９．１２４３．１５０１３０２５ｐｏｓｉｔｉｖｅ定量ＡＦＧ２３３１．１３１３．１５０１３０２５ｐｏｓｉｔｉｖｅ定量ＡＦＧ２３３１．１２８５．１５０１３０２５ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性ＡＦＧ２３３１．１２４５．１５０１３０３０ｐｏｓｉｔｉｖｅ定性此外，酶聯(lián)免疫法用于霉菌毒素的測定研究取得新的進展，現(xiàn)已經(jīng)研究并建立了黃曲霉素B1、赭曲毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體酶聯(lián)免疫方法，利用酶聯(lián)免疫藥盒可以快速測定飼料原料和成品飼料中霉菌毒素污染狀況，為防霉保鮮和防霉劑的使用提供依據(jù)。4.2.2存貨控制:如藥物添加劑。4.2.3配料工段:秤的準(zhǔn)確度。4.2.4調(diào)質(zhì)、制粒工段:溫度、時間。4.2.5建立HACCP系統(tǒng):在飼料加工過程中，找出最關(guān)鍵的加工工序或加工點，可進行記錄、分析的方法，并能正確操作，不要所有過程都監(jiān)測，也不要使HACCP成為一紙空文。4.3簡易的監(jiān)督和檢查4.3.1故障報告:必須有一個嚴(yán)格的文字報告程序。如原料漏加、蒸汽壓力太低、液體添加設(shè)備不準(zhǔn)等。4.3.2跟蹤和回收系統(tǒng):在檢測中發(fā)現(xiàn)有問題，而飼料已經(jīng)售出，如何回收這批飼料。同時應(yīng)做好用戶意見反饋的記錄與分析。4.3.3建筑和地面:要把建筑物和地面建好和維修好，以防塵、防曬、防潮、防鼠、蟲、鳥等。總之，飼料品質(zhì)的控制是一個系統(tǒng)工程，是動靜相結(jié)合的過程，在靜止中控制，同時也要在流動中控制。需要過程控制和實驗室的分析結(jié)合，過程控制是本，實驗室分析是有效的補充。參考文獻[1]張宏福,張子儀.動物營養(yǎng)參數(shù)與飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)[M].中國農(nóng)業(yè)出版社,1998：6.[2]對外科技交流資料選編[M].中國農(nóng)業(yè)機械化科學(xué)研究院,1984：10.[3]李清曉，李忠平，顏培實，等.豆粕粉碎粒度對肉雞日糧養(yǎng)分利用率的影響[J].家畜生態(tài)學(xué)報，2006，5（27）：20～25.[4]孟艷莉，李勇，張甦寅，等.小麥粉碎粒度對蛋雛雞生長性能、抗體水平及粗蛋白質(zhì)消化率的影響[J].中國飼料，2013，4：22～28.[5]王加啟，于建國.飼料分析與檢驗[M].北京：中國計量出版社，2004：74-95.[6]MahesarSA,SheraziST,NiazA,etal.Simultaneousassessmentofzinc,cadmium,leadandcopperinpoultryfeedsbydifferentialpulseanodicstrippingvoltammetry[J].FoodChemToxicol,2010,48(8-9):2357-2360.[7]WangJR,FuZL,WangJJ.improvingtheDeterminationofNi－trovininFeedsbyReversed-PhaseLCwithSPE[J].Chro－matographia,2010,70(7/8):1259-1263.[8]ShenJ,TongJ,JiangH,etal.Simultaneousdeterminationoffivebenzimidazolesinfeedsusinghigh-performancecapillaryelec－trophoresis[J].JAOACInt.2009,92(4):1009-1015.[9]GalariniR,FioroniL,AnqelucciF,etal.Simultaneousdetermi－nationofelevenquinolonesinanimalfeedbyliquidchromatog－raphywithfluorescenceandultravioletabsorbancedetection[J].2009,16(46):8158-8164.[10]DriverJL,ThiexN,RavnieD,etal.Single-laboratoryvalidationforthequantificationofneomycinBandneomycinCinanimalfeedsbyliquidchromatographyfluorescencedetectionwithpost-columnderivation[J].JAOACInt,2009,92(1):34-41.[11]JiménezV,AsrianJ,GuiterasJ,etal.Validationofanenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectingsulfonamidesinfeedre－sources[J].JAgricFoodChem,2010,58(13):7526-7531.[12]ShiuCM,WangJJ,YuFY.Sensitiveenzyme-linkedim－munosorbentassayandrapidone-stepimmunochromatograph