人感染H7N9禽流感防控樣本采集、檢測(cè)與運(yùn)送要求(市CDC劉愛平)

人感染H7N9禽流感防控樣本采集、檢測(cè)與運(yùn)送要求(市CDC劉愛平)第一頁，共26頁。采集對(duì)象人感染H7N9禽流感疑似病例經(jīng)醫(yī)院專家會(huì)診，不能排除人感染H7N9禽流感的肺炎病例,應(yīng)同時(shí)具備以下4條:1、發(fā)熱(腋下體溫≥38℃)；2、具有肺炎的影像學(xué)特征；3、發(fā)病早期白細(xì)胞總數(shù)降低或正常,或淋巴細(xì)胞分類計(jì)數(shù)減少；4、不能從臨床或?qū)嶒?yàn)室角度診斷為常見病原所致的肺炎。出現(xiàn)發(fā)熱及咳嗽等急性呼吸道感染癥狀的人感染H7N9禽流感確診病例的密切接觸者。2023/4/272第二頁，共26頁。標(biāo)本采集的種類抗病毒治療之前必須采集：鼻咽分泌物口腔含漱液呼吸道分泌物氣管深部咳痰氣管吸取物肺深部吸取物/灌洗液雙份血清優(yōu)先采集下呼吸道標(biāo)本2023/4/273第三頁，共26頁。病毒采樣液（4ml）

MEM或DMEM液

Hanks液商品化采樣管聚丙乙烯纖維頭拭子（2根）常規(guī)采血管全血5ml血清2ml2023/4/274采樣用具第四頁，共26頁。2023/4/275第五頁，共26頁。Hanks液的配制①NaCl8g、KCl0.4g、MgSO47H2O0.1g、MgCl·6H2O0.1g溶于800ml超純水中②CaCl2(無水)0.14g溶于100ml超純水中③葡萄糖1.0mg、NaHPO40.154g、KH2PO40.06g、0.4%酚紅液5ml溶于100ml超純水中④將上述3種溶液混和，8磅30分鐘滅活菌，或用玻璃濾器過濾。保存在5℃?zhèn)溆?，用前?%NaCO3調(diào)pH7.4-7.6。2023/4/276第六頁，共26頁。標(biāo)本采集的方法咽拭子：用2根拭子同時(shí)擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入含4ml采樣液的管中，尾部折斷棄去。2023/4/277第七頁，共26頁。鼻拭子：將1根拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出；取另1根以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔；將上述2根拭子浸入同一含4ml采樣液的管中，尾部折斷棄去。2023/4/278第八頁，共26頁。1插入鼻腔2放置數(shù)秒鼻拭子采集4放入VTM3旋轉(zhuǎn)2-3Ts5折斷多余部分6蓋緊蓋子第九頁，共26頁。鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：

用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。先將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出；收集抽取的粘液，并用采樣液4ml涮洗收集器1次。呼吸道灌洗液：

將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm深處），注入5ml生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出；收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器1次（可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來代替收集）。2023/4/2710第十頁，共26頁。咽漱液：用10ml生理鹽水漱喉。漱時(shí)讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉(zhuǎn)動(dòng)，然后，用50ml的無菌螺口塑料管收集洗液。痰液：醫(yī)護(hù)人員采取拍背的方式幫助患者深咳，將咳出的痰液收集到50ml的無菌螺口塑料管中。最好是醫(yī)護(hù)人員采取吸痰的方法收集深部痰液，注入至15ml無菌螺口塑料管中。第十一頁，共26頁。環(huán)境污水：選擇禽類飲水槽、清洗禽類的盆或桶、禽類活動(dòng)或籠具旁的水溝或水池，用一次性玻璃棒或吸管充分?jǐn)噭蚝蟛杉?-10ml污水于無菌的外螺旋蓋的管內(nèi)，旋緊管蓋。禽類糞便：選擇禽舍或環(huán)境中的新鮮禽類糞便，用無菌拭子夾或挑取糞便3-5g置于含5ml采樣液的管中，棄去尾部，旋緊管蓋。籠具涂抹拭子：用蘸有采樣液的拭子擦拭籠具表面禽類最常接觸的3-5個(gè)不同部位（包括籠具底部），然后將擦拭過的拭子放入含5ml采樣液的采樣管中，棄去尾部，旋緊管蓋。也可以用多個(gè)拭子充分擦拭籠具表面后放到一個(gè)采樣管中。禽流感外環(huán)境標(biāo)本采集第十二頁，共26頁。環(huán)境標(biāo)本應(yīng)急監(jiān)測(cè)各縣市區(qū)疾控中心每月2次采集活禽批發(fā)市場(chǎng)、中心農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的環(huán)境標(biāo)本，每地點(diǎn)不少于3份標(biāo)本/次，采集的標(biāo)本以禽類飲水和市場(chǎng)污水為重點(diǎn)。2023/4/2713注意事項(xiàng)1、出去采樣時(shí)一定要帶夠大冰袋，用泡沫箱運(yùn)輸采集后的樣本，48h內(nèi)低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室2、采集糞便時(shí)一定要采集新鮮的（一般較濕潤(rùn)）糞便，太陳舊（干燥）的糞便對(duì)我們的檢測(cè)意義不大。尤其在緩沖區(qū)養(yǎng)殖戶家中采集糞便標(biāo)本時(shí)，由于多雞鴨混養(yǎng)難以分辨鴨糞和雞糞，最好能找到鴨子剛排泄的新鮮糞便。第十三頁，共26頁。標(biāo)本的運(yùn)送H7N9禽流感病毒實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)和樣本運(yùn)輸按照《人間傳染的病原微生物名錄》中高致病性禽流感病毒進(jìn)行管理。標(biāo)本采集、包裝、運(yùn)送等應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（衛(wèi)生部第45號(hào)令）等生物安全相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。病例的臨床標(biāo)本采集后，縣級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和病例收治的醫(yī)療機(jī)構(gòu)要密切配合，按照B類感染性物質(zhì)進(jìn)行包裝運(yùn)輸，在低溫條件下，24小時(shí)內(nèi)送到當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。第十四頁，共26頁。B類感染性物質(zhì)包裝第十五頁，共26頁。第十六頁，共26頁。2023/4/2717第十七頁，共26頁。2023/4/2718第十八頁，共26頁。2023/4/2719第十九頁，共26頁。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢測(cè)流程第二十頁，共26頁。常規(guī)監(jiān)測(cè)流感樣病例實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后1周內(nèi)完成甲、乙型流感病毒通用引物檢測(cè)。甲型陽性的開展H1、H3、H7、H5亞型檢測(cè)，乙型陽性的開展BY、BV亞型檢測(cè)。H5、H7亞型陽性立即網(wǎng)絡(luò)報(bào)告，標(biāo)本上送省、國家CDC復(fù)核和進(jìn)一步檢測(cè)。季節(jié)性流感病毒核酸檢測(cè)陽性的標(biāo)本繼續(xù)進(jìn)行流感病毒分離，毒株上送省、國家CDC復(fù)核。甲型通用引物陽性而不能區(qū)分型別或亞型的毒株和陽性標(biāo)本要求在48小時(shí)內(nèi)送至國家流感中心（24小時(shí)內(nèi)送至省CDC）。第二十一頁，共26頁。H7N9排查病例實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后24小時(shí)內(nèi)完成甲、乙型流感病毒通用引物和H5、H7亞型的檢測(cè)。H5、H7亞型陽性立即網(wǎng)絡(luò)報(bào)告，標(biāo)本上送省、國家CDC復(fù)核和進(jìn)一步檢測(cè)。甲型陽性H5、H7亞型陰性的標(biāo)本繼續(xù)開展季節(jié)性流感病毒核酸檢測(cè)和流感病毒分離，毒株上送省CDC復(fù)核。甲型通用引物陽性而不能區(qū)分型別或亞型的毒株和陽性標(biāo)本要求在48小時(shí)內(nèi)送至國家流感中心（24小時(shí)內(nèi)送至省CDC）。第二十二頁，共26頁。沒有條件開展核酸檢測(cè)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)請(qǐng)盡快開展快速抗原檢測(cè)初篩試驗(yàn)。第二十三頁，共26頁。核酸檢測(cè)儀器及試劑RealtimePCR儀：ABI7300/7500抽提試劑：invitrogenViralRNA/DNAminikit檢測(cè)試劑：invitrogenone-stepqRT-PCRkit引物探針：自合成（見附表）2023/4/2724