乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第1頁

HBV感染過程乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第2頁乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第3頁第一個別

乙型肝炎病毒血清型乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第4頁1決定原因

乙型肝炎病毒血清型，由膜主蛋白序列來決定。

2親水結(jié)構(gòu)區(qū)

HBsAg有兩個親水區(qū)：32-76aa和110-156aa。HBsAg親水賴氨酸改變，抗原活性消失。

3共同決定簇

139-147aa是共同簇抗原a必需最小序列。

乙型肝炎病毒血清學(xué)分型

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第5頁1排斥決定簇

主蛋白還攜帶兩對相互排斥亞型決定簇d/y（122-134aa指令d/y決定簇）和w/r（159-160aa指令w/r決定簇）。

2四個主要亞型

組成4個主要亞型：adw、adr、ayw和ayr。四個主要亞型乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第6頁

除了4個主要亞型外，還有adyr、adwr、adyw/aywr和adywr等復(fù)合亞型。不一樣亞型在外膜蛋白前-S區(qū)序列和全基因組序列亦有對應(yīng)差異。復(fù)合亞型乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第7頁第二個別

乙型肝炎病毒基因型乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第8頁HBV基因型定義分型方法是依據(jù)HBsAg主蛋白基因或全基因組核苷酸序列差異性進行基因型分型，差異大于8%即被確定為另一基因型，按照這種分型方法，將HBV分為6種基因型，分別命名為A-F型，另有學(xué)者新定義了G、H型，尚待確定。乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第9頁我國流行病學(xué)資料我國主要基因型為B、C兩型，臺灣省研究資料提醒除E型外，其它基因型均可在華人HBV感染者中檢出，B和C型占患者人群85%。乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第10頁HBV異質(zhì)性基因型

基因型*

地理分布

A 北歐、西歐、美國、非洲 B 中國、印度尼西亞、越南 C 中國、越南、朝鮮、日本 D 地中海區(qū)、中東、印度 E 西非 F 美國（印地安拿人）、波利尼西亞 G 歐洲、美國

*依據(jù)HBV全序列中核苷酸差異≥8%

ChuCJetal.Hepatology;35(5):1274乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第11頁第三個別

乙型肝炎病毒基因準種特點乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第12頁

問題

不一樣慢性乙型肝炎患者之間血清中乙型肝炎病毒基因序列是不一樣，所以能夠依據(jù)序列差異分成不一樣血清型（adr、ayw、adw

等），也能夠分成不一樣基因型（A、B、C、D、E、F、G、H）。

問：同一個患者血液中不一樣乙型肝炎病毒之間其基因序列是否相同？

答：相同！或不一樣！乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第13頁型與準種基因型（不一樣個體之間）

血清型（不一樣個體之間）

準種（單一個體）

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第14頁

乙型肝炎病毒準種定義

乙型肝炎病毒在長久復(fù)制過程中，因為逆轉(zhuǎn)錄過程其多聚酶缺乏嚴格校正機制，從而產(chǎn)生自發(fā)點突變，造成子代病毒基因序列之間微小差異，因而血清中乙型肝炎病毒基因序列是不一樣。這種差異普通小于全長基因組5%。

有微小基因序列差異、但序列十分相近乙型肝炎病毒組成病毒群，這一病毒群時刻處于動態(tài)改變之中，乙型肝炎病毒這種存在狀態(tài)稱為“準種”。

英文：quasispecies乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第15頁為何以前沒有注意？

方法比較既往方案：搜集血清↓提取血清中HBVDNA↓設(shè)計重合PCR引物↓PCR擴增↓產(chǎn)物直接測序（單一克隆序列）本研究方案搜集血清↓提取血清中HBVDNA↓設(shè)計PCR引物↓PCR擴增↓

TA克隆入質(zhì)粒載體中↓隨機選擇單克隆測序（多個克隆序列）乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第16頁

S基因準種特點

（前-S1、前-S2、S）乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第17頁ProtocolofHumanSomaticGeneTherapy

S基因全長PCR,1400bp1234M5671400bp乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第18頁HBV全S基因RFLP結(jié)果乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第19頁乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第20頁遺傳樹分析E853-A3E845-A12E845-B4E845-A16E845-A8RenbaoGanN19E5N19A3N19A8N19E19EJ1B13

EJ1A4E67B5E67A1E67A8E67B1E67B8N19E5EJ1B6EJ1A12EJ1B16乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第21頁HBV準種特點分析

—————————————————————HBVDNASRegionHBVDNAXRegionHBVDNAPRegionHBVDNACRegionHBVDNAPre-C區(qū)

HBVDNA全長HBVDNA——————————————————————乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第22頁

基因準種

個體化特點

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第23頁HBsAg氨基酸序列RT702A3MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT702A14MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT702B3MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT702A10MENTT-----LFGGA-----VPFAQWFAG-RT522B7MESTT-----LFGGA-----VPFVQWFVG-RT522A5MESTT-----LFGGA-----VPFVQWFVG-RT522B11MESTT-----LFGGA-----VPFVQWFVG-RTXJA2MENTT-----LFGEA-----VPFVQWFVG-RTXJA6MENTT-----LFGEA-----VPFVQ*FVG-RTXJB5MENTT-----LFGEA-----VPFVQWFVG-RTXJC4MENTT-----LFGEA-----VPFVQWFVG-乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第24頁變異一些特點（逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)）RT702A3-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702A14-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702B3-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT702A10-SSNLSWLS-----SHPIVLGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKIK-RT522B7-SSNLTWLS-----SHPIILGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RT522A5-SSNLTWLS-----SHPIILGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RT522B11-SSNLTWLS-----SHPIILGF-----VIGSWGTLPQEHIVLKLK-RTXJA2-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RTXJA6-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RTXJB5-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-RTXJC4-SSNLSWLS-----SHPIILGF-----VIGCWGTLPQEHIVLKIK-乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第25頁

前-S2基因

缺失突變研究乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第26頁

線索：

S基因研究中發(fā)覺前-S2區(qū)多個缺失突變株存在

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第27頁HBV在慢性患者人群中準種現(xiàn)象乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第28頁乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第29頁前-S2區(qū)缺失突變分析——————————————————————

總數(shù)無缺失缺失百分比——————————————————————HBeAg陽性362313（36%）抗-HBe陽性15114（93%）累計512427（52%）——————————————————————乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第30頁前-S2區(qū)缺失突變位點分析——————————————————————

位點范圍—————————————————————

702-4 nt43-66 24bp ZH-A6 nt52-66 15bp ZH-B4 nt37-66 30bp ZH-B12 nt37-66 30bp N314-5 nt25-66

42bp N314-7 nt25-66

42bp 811-B12 nt52-66 15bp———————————————————— 乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第31頁不一樣病毒株突變位點adrMQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN702-1-------------------------------A----------------I-----H702-4--------------\\\\\\\\---------A----------------I------702-9----------------G--------------A------------T---I------702-10----------------G--------------A------------T---I------314-1----------T-Q----------------------------L------I------314-5-------L\\\\\\\\\\\\\\---------------------------------314-7-------L\\\\\\\\\\\\\\---------------------------------314-9----------T-Q------------------------------------------ZH-A6--------Q--------\\\\\---------------------------------ZH-B4------------\\\\\\\\\\---------------------------------ZH-B6-------------------------------------------------------ZH-B11-------------------------------------------------------ZH-B12------------\\\\\\\\\\---------------------------------142-A3-------------------------------------------------------142-A7-------------------------------------------------------142-A8------------------------------------------------------H811-A7-------------------------------------------------------811-A8-------------------------------------------------------811-B12-----------------\\\\\---------------------------------乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第32頁本研究一些主要發(fā)覺慢性乙肝患者體內(nèi)存在有HBV準種群。HBV準種群中存有缺點型病毒，即個別ORF編碼序列經(jīng)突變終止了正常表示。前C/C區(qū)、X區(qū)、前-S2區(qū)內(nèi)部存有缺失突變，尤其以后2個區(qū)域多見。HBV變異存在個體化現(xiàn)象。血液中發(fā)覺了截短型表面抗原中蛋白乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第33頁

關(guān)于準種研究一些問題乙型肝炎病毒高變區(qū)與高保守區(qū)界定？乙型肝炎病毒準種與感染慢性化關(guān)系？乙型肝炎病毒準種群漂變規(guī)律與肝纖維化關(guān)系？乙型肝炎病毒準種群漂變規(guī)律與肝細胞癌關(guān)系？干擾素治療與乙型肝炎病毒準種群漂變？拉米夫定治療與乙型肝炎病毒準種群漂變？耐藥株與準種漂變規(guī)律關(guān)系？需要多靶位“聯(lián)合、序貫”治療？乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第34頁

乙型肝炎病毒研究

臨床意義

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第35頁

第一

首先是改變了咱們既往對乙型肝炎病毒存在狀態(tài)看法。

概念：1

差異，2相同，

3種群，4動態(tài)。乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第36頁第二

提升了咱們科研設(shè)計水平，以及學(xué)術(shù)論文鑒賞水平。

治療前后比較

病情改變前后比較

印度寓言：盲人摸象乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第37頁

第三

提升了咱們對于乙型肝炎病毒標準株或參考株判斷水平。

早期克隆病毒株為標準序列？

Consensus序列為標準序列？

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第38頁

第四

有利于深入、正確認識拉米夫定用藥過程中YMDD變異等問題。

是藥品選擇結(jié)果，不是誘導(dǎo)結(jié)果。

乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第39頁拉米夫定對野生型HBV抑制核苷類似物拉米夫定ss(-)DNA抑制HBV聚合酶(野生型)高親和力MDYDY=酪氨酸M=蛋氨酸D=天門冬氨酸乙型肝炎病毒的異質(zhì)性及臨床意義第40頁拉米夫定和YMDD變異株HBVY=酪氨酸V=纈氨酸D=天門冬氨酸

I=異亮氨酸核苷類似物拉米夫定ss（-）DNA弱抑制HBV聚合酶（變異株）親和力下降VDYD在細胞培養(yǎng)體系中YMDD變異株復(fù)制水平顯著低于野生株（Melegarietal，

Hepatology1998;Allenetal,

Hepatology1998）YMDD變