免疫分析中的干擾與消除

內(nèi)容概要1.概述2.主要內(nèi)容3.結語1.溶血等常見內(nèi)源性干擾2.類風濕因子3.補體4.異嗜性抗體5.HAMA6.自身抗體7.結合蛋白8.其他干擾因素目前一頁\總數(shù)二十八頁\編于二點概述基礎、前沿的話題普遍、常見的現(xiàn)象復雜、多樣的本質(zhì)深刻、直接的影響長遠、艱巨的任務目前二頁\總數(shù)二十八頁\編于二點定義IFCC：樣本中被分析物質(zhì)外存在的因素，產(chǎn)生的檢測信號，表現(xiàn)在檢測結果上的系統(tǒng)性錯誤。分析物不相關的因素溶血、脂血、抗凝樣本、樣本保存等分析物相關的因素

類風濕因子，異嗜性抗體，自身抗體等目前三頁\總數(shù)二十八頁\編于二點免疫分析中干擾的分析不同次檢驗結果的對比的不一致性檢驗結果與臨床癥狀不符系列檢驗結果的矛盾極度偏離，難以置信的檢驗結果稀釋回收高度偏離預期與其他檢驗試劑或方法相背離的結果目前四頁\總數(shù)二十八頁\編于二點常見“干擾”因素溶血高膽紅素脂血（對脂溶性物質(zhì)的干擾，NEFA）抗凝樣本（添加劑，分離膠）樣本的穩(wěn)定性與保存條件目前五頁\總數(shù)二十八頁\編于二點內(nèi)源性激素結合蛋白白蛋白TBG，SHBG，CBGFDH（家族性異常白蛋白高甲狀腺素血癥）游離激素的測定（標記抗原，標記抗原類似物，標記抗體）目前六頁\總數(shù)二十八頁\編于二點內(nèi)源性抗體等干擾因素類風濕因子、補體、溶菌酶、異嗜性抗體，HAAA等10%以上（30-40%）的病人體內(nèi)存在內(nèi)源性異嗜性抗體（CAP）10%-40%的人群存在HAMA干擾，取決于檢測試劑（LarryKricka,President,AACC）我國臨床醫(yī)療總誤診率為27.8%，比國際平均臨床醫(yī)療總誤診率25%高2.8個百分點，其中惡性腫瘤誤診率為40%（2008），抗體干擾是其中原因之一。目前七頁\總數(shù)二十八頁\編于二點異嗜性抗體產(chǎn)生的途徑類風濕性關節(jié)炎流行性感冒過敏輸血自身免疫疾病免疫抑制藥物心肌病變注射疫苗動物接觸（飼養(yǎng)寵物）特定食物（奶酪）動物輔助治療（胸腺細胞，胚胎細胞，羊細胞）血液透析母嬰傳遞腸胃炎（E.coli）目前八頁\總數(shù)二十八頁\編于二點類風濕因子（Rheumatoidfactors，RF）自身抗體，體內(nèi)產(chǎn)生的以變性IgG（一種抗體）為抗原的一種抗體，通常為IgM，結合IgG的FC片段。約90%類風濕性關節(jié)炎（RA）患者的RF呈陽性，在其他自身免疫疾病中也有一定的陽性率。正常人有5%左右的陽性率目前九頁\總數(shù)二十八頁\編于二點類風濕因子（Rheumatoidfactors，RF）去除Fc片段，用F（ab）2替代完整的IgG熱變性IgG處理檢驗抗原時，加入2-巰基乙醇使RF降解。目前十頁\總數(shù)二十八頁\編于二點類風濕因子（Rheumatoidfactors，RF）IgM測定方法：捕獲包被和中和IgG目前十一頁\總數(shù)二十八頁\編于二點補體（Complement）存在于正常人和動物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。約占血清球蛋白總量的10％。極不穩(wěn)定，大部分對熱敏感，56℃30分鐘即失去活性。結合IgG的Fc片段，封閉結合位點。新鮮血清中的補體對試劑反應干擾較大除熱滅活外，可用EDTA稀釋標本緩解補體的影響。亦有推薦在試劑中加入雞IgG的，以抑制補體激活目前十二頁\總數(shù)二十八頁\編于二點溶菌酶（Lysozyme）一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶，廣泛存在于人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中強烈結合低等電點蛋白，可橋接固相和標記抗體導致假陽性?？杉尤脬~離子，形成絡合物可在試劑中加入卵清蛋白（pI=4.9）鳥蛋白（beckman）目前十三頁\總數(shù)二十八頁\編于二點異嗜性抗體（Heterophilicantibodies，HA）HA是存在于人類血清中，由已知或未知的抗原物質(zhì)刺激人體產(chǎn)生的，與嚙齒類動物（如鼠等）Ig（s）結合的一類抗體。通常是由于直接接觸動物，污染的食品，接種動物血清或疫苗而產(chǎn)生?？煞譃樘烊豢贵w和自身免疫抗體，親和力低，結合力弱，具有廣泛的特異性，普遍存在于人體中，多為IgG。HA可與試劑中抗體的Fc或者F(ab)區(qū)域的決定簇結合，從而干擾免疫反應。目前十四頁\總數(shù)二十八頁\編于二點人抗動物抗體（HAAA）與HA具有一定的同源性，均能發(fā)生交叉反應，造成干擾免疫途徑較為明確，動物免疫球蛋白治療或接觸史具有高親和力，可定向結合到動物的抗原表位上HAAA有IgA，IgG，IgM等多種類型，又可分為抗同種型，抗獨特型，抗抗獨特型等三類物種廣泛，目前已報道抗鼠，牛，山羊，綿羊，馬等多種抗體不同種動物Ig分子間蛋白質(zhì)序列有大量同源性，因此抗動物抗體可與多種動物免疫球蛋白發(fā)生交叉反應接觸動物蛋白兩周后可產(chǎn)生抗體，存在時間可長達30個月目前十五頁\總數(shù)二十八頁\編于二點人抗鼠抗體（HAMA）由于鼠抗在單克隆抗體影像，抗體治療以及診斷試劑中的廣泛應用，使得HAMA尤其受關注抗同種型，抗獨特型，抗抗獨特型目前十六頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HAMA干擾機制目前十七頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HAMA干擾機制目前十八頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HAMA的鑒別稀釋樣本測定的值不成比例用參考試劑盒測定進行對比其他試劑盒驗證加入清潔抗體進行對比HAMA測定試劑盒（6HAMA試劑盒）包被鼠抗，標記鼠抗的夾心法包被鼠抗，標記抗人IgG/IgM的間接法目前十九頁\總數(shù)二十八頁\編于二點內(nèi)源性抗體干擾的消除試劑盒的設計原材料的選擇去除Fc片段嵌合抗體（RocheTSH/CEA）雞抗體樣本的預先處理固相血清吸附蛋白A之類的固相吸附劑

PEG6000處理樣本樣本酸和熱聯(lián)合處理加入阻斷劑清潔抗體

目前二十頁\總數(shù)二十八頁\編于二點商品化的異嗜性抗體阻斷劑HBR：單克隆鼠抗人IgMIIR：由異嗜性抗體和人抗動物抗體為免疫原產(chǎn)生的混合的鼠單抗。目前二十一頁\總數(shù)二十八頁\編于二點簡單了解ROCHE（IEP）目前二十二頁\總數(shù)二十八頁\編于二點簡單了解ROCHE（IEP）目前二十三頁\總數(shù)二十八頁\編于二點簡單了解ROCHE（IEP）目前二十四頁\總數(shù)二十八頁\編于二點自身抗體（Autoanalyteantibodies)嗜靶抗原的自身抗體，與靶抗原結合形成復合物，可對靶抗原的測定結果造成干擾。目前已知存在的自身抗體：THAAB、Anti-Tg、IAA，Anti-PRL等干擾舉例：高泌乳素血癥（巨泌乳素）有生物和免疫活性的23kD泌乳素單體；缺乏生物活性約50-60kD的大泌乳素；無或不發(fā)揮任何生物活性但有免疫反應性150-170kD的巨泌乳素。巨泌乳素：PRL與其IgG型抗體結合形成的免疫復合物,因其分子量大而不能通過毛細血管壁,無法與受體結合而不能發(fā)揮生物活性,在體內(nèi)的半衰期較長,在循環(huán)中累積,被視作PRL檢測從而造成PRL濃度的假性增高。樣本用PEG沉淀處理目前二十五頁\總數(shù)二十八頁\編于二點其他一些干擾因素副蛋白（paraprotein）由異常增殖的腫瘤漿細胞產(chǎn)生的免疫球蛋白。粘度增加導致樣本量減小/非特異性的結合分析物或抗體纖維蛋白原干擾反應過程藥物，類似物，代謝物HOOK效應目前二十六頁\總數(shù)二十八頁\編