微生物標(biāo)本采集講義專家講座

01微生物標(biāo)本采集基本標(biāo)準(zhǔn)020304目錄微生物標(biāo)本運(yùn)輸基本標(biāo)準(zhǔn)微生物試驗(yàn)室對標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)微生物標(biāo)本采集及注意事項(xiàng)微生物標(biāo)本采集講義專家講座第1頁一、微生物標(biāo)本采集基本標(biāo)準(zhǔn)在抗菌藥品使用前采集標(biāo)本。2.無菌部位標(biāo)本更含有臨床價(jià)值，有菌部位采集標(biāo)本需要去除正常菌群和定植細(xì)菌才有意義。尤其是血培養(yǎng)。有菌部位標(biāo)本應(yīng)防止“正常菌群造成標(biāo)本污染”。3.標(biāo)本標(biāo)簽和申請單信息要完整。對于每一份標(biāo)本，試驗(yàn)室都需要了解該患者和標(biāo)本詳細(xì)信息以及醫(yī)生送檢目標(biāo)。4.嚴(yán)格無菌操作。應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，防止標(biāo)本被污染。盛放標(biāo)本容器須經(jīng)滅菌處理。采集無菌標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意對局部及周圍皮膚消毒。如使用消毒液消毒皮膚，須作用一定時(shí)間，待其干燥后采樣。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第2頁二、生物標(biāo)本運(yùn)輸基本標(biāo)準(zhǔn)1.全部標(biāo)本采集后都應(yīng)盡快送往試驗(yàn)室，多數(shù)標(biāo)本應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)送達(dá)。有些樣本量小標(biāo)本應(yīng)在采樣后15-30分鐘內(nèi)送達(dá)。2.確保必要運(yùn)輸條件：不一樣種類標(biāo)本因檢測目標(biāo)致病微生物不一樣，對標(biāo)本保留和運(yùn)輸環(huán)境條件有不一樣要求（詳見附表）。對溫度敏感細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并馬上送檢。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第3頁二、生物標(biāo)本運(yùn)輸基本標(biāo)準(zhǔn)微生物標(biāo)本采集講義專家講座第4頁三、微生物試驗(yàn)室對標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)本采集至試驗(yàn)室接收過程間隔過長，或無標(biāo)本采集時(shí)間，或保留溫度不妥。標(biāo)本運(yùn)輸條件不正確：如厭氧培養(yǎng)標(biāo)本卻在有氧條件下送檢。容器不規(guī)范：如容器有裂縫或被打破造成標(biāo)本泄露、容器非無菌等。未貼標(biāo)簽或貼錯(cuò)標(biāo)簽：標(biāo)本與檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)不符合，如痰培養(yǎng)送檢尿標(biāo)本；患者信息與標(biāo)本不符，如女性患者送檢前列腺標(biāo)本。標(biāo)本顯著被污染，如痰標(biāo)本中混有食物殘?jiān)取Ｎ⑸飿?biāo)本采集講義專家講座第5頁三、微生物試驗(yàn)室對標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)拭子上標(biāo)本已經(jīng)干涸。標(biāo)本不符合檢驗(yàn)要求，如痰標(biāo)本以唾液為主。標(biāo)本使用了固定劑或防腐劑。標(biāo)本量太少。一支拭子要求檢驗(yàn)項(xiàng)目太多。24小時(shí)內(nèi)重復(fù)送檢標(biāo)本（血培養(yǎng)除外）。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第6頁四、標(biāo)本采集—血培養(yǎng)一、臨床采樣指征：菌血癥：T:≥38℃或≤36℃，或寒戰(zhàn)；WBC計(jì)數(shù)>10.0×109/L，中性粒增多，或者<3.0×109/L；有皮膚黏膜出血、昏迷、多器官衰竭、休克等全身感染癥狀體征，具備其中之一且不能排除細(xì)菌、真菌血流感染者。感染性心內(nèi)膜炎：凡原因未明發(fā)燒，連續(xù)在1周以上，伴有心臟雜音或心臟超聲發(fā)覺贅生物，或原有心臟基礎(chǔ)疾病、人工心臟瓣膜植入患者，均應(yīng)屢次進(jìn)行血培養(yǎng)檢測。導(dǎo)管相關(guān)血流感染：帶有導(dǎo)管>1天或者拔除導(dǎo)管<48小時(shí)，出現(xiàn)T:>38℃、寒顫或低血壓等全身感染表現(xiàn)，不能除外由血管內(nèi)導(dǎo)管引發(fā)感染可能，應(yīng)屢次進(jìn)行血培養(yǎng)檢測。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第7頁四、標(biāo)本采集—血培養(yǎng)二、標(biāo)本采集：1.菌血癥：采血時(shí)機(jī)：寒戰(zhàn)開始時(shí)，發(fā)燒高峰前30-60min內(nèi)；使用抗菌藥品治療前采集，如已用藥，則在下一次用藥之前采集最正確。采血部位：通常為肘靜脈，切忌在靜滴抗菌藥品靜脈處采血。除非懷疑有導(dǎo)管相關(guān)血流感染，應(yīng)防止從留置靜脈或動(dòng)脈導(dǎo)管取血，因?yàn)閷?dǎo)管常伴有定植菌存在。采血工具：真空血培養(yǎng)瓶，如培養(yǎng)瓶儲(chǔ)存溫度為2-8℃，應(yīng)先復(fù)溫30min左右，平衡至室溫再采血。同一部位雙瓶采集時(shí)不提議更換針頭。采血次數(shù)、血培養(yǎng)瓶選擇：對于成人患者，應(yīng)同時(shí)分別在兩個(gè)部位采集血標(biāo)本；每個(gè)部位應(yīng)需氧和厭氧培養(yǎng)各一瓶。采血量：影響陽性率主要原因，過少顯著降低陽性率，5-10ml/瓶。皮膚、血培養(yǎng)瓶消毒：穿刺前皮膚和培養(yǎng)瓶口進(jìn)行消毒并充分干燥。防止采血管內(nèi)空氣注入?yún)捬跹囵B(yǎng)瓶。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第8頁四、標(biāo)本采集—血培養(yǎng)二、標(biāo)本采集：2.感染性心內(nèi)膜炎提議在經(jīng)驗(yàn)用藥前30分鐘內(nèi)在不一樣部位采集2-3套外周靜脈血培養(yǎng)標(biāo)本。假如24小時(shí)內(nèi)3套血培養(yǎng)標(biāo)本均為陰性，提議再采集3套血培養(yǎng)標(biāo)本送檢。懷疑左心心內(nèi)膜炎時(shí)，采集動(dòng)脈血提升血培養(yǎng)陽性率。3.導(dǎo)管相關(guān)血流感染：分為保留導(dǎo)管和不保留導(dǎo)管兩種情況。保留導(dǎo)管：分別從外周靜脈和導(dǎo)管內(nèi)各采取1套血培養(yǎng)標(biāo)本，在培養(yǎng)瓶上標(biāo)注采集部位，送往微生物試驗(yàn)室，同時(shí)進(jìn)行上機(jī)培養(yǎng)。2套血培養(yǎng)檢出同種細(xì)菌，且來自導(dǎo)管血培養(yǎng)標(biāo)本報(bào)陽時(shí)間比來自外周血培養(yǎng)標(biāo)本報(bào)陽時(shí)間早2小時(shí)以上，可診療導(dǎo)管相關(guān)血流感染。不保留導(dǎo)管：在外周靜脈采集2套血培養(yǎng)標(biāo)本。同時(shí)，經(jīng)過無菌操作剪取已拔出導(dǎo)管尖端5cm，在血平板上交叉滾動(dòng)4次進(jìn)行送檢?；虿扇〕曊鹗幏羧【航臃N。從導(dǎo)管尖端和外周血培養(yǎng)培養(yǎng)出同種同源細(xì)菌，且導(dǎo)管尖端血平皿菌落計(jì)數(shù)超出15CFU有意義。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第9頁四、標(biāo)本采集—血培養(yǎng)三、標(biāo)簽和申請單：每套血培養(yǎng)瓶上標(biāo)簽應(yīng)有唯一標(biāo)識(shí)號(hào)或條碼，并注明標(biāo)本采集時(shí)間和部位。如疑似感染性心內(nèi)膜炎或疑似導(dǎo)管相關(guān)血流感染患者標(biāo)本，申請單除應(yīng)包含患者基本信息外，一定要注明疑似診療。四、標(biāo)本運(yùn)輸：采集后馬上送檢，2h內(nèi)送達(dá)試驗(yàn)室。不能及時(shí)送檢應(yīng)置室溫暫存。禁止冰箱存放。運(yùn)輸裝置要足夠安全，防止血培養(yǎng)瓶運(yùn)輸過程中因碰撞發(fā)和破裂。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第10頁四、標(biāo)本采集—咽拭子(上呼吸道感染)一、臨床采樣指征：突發(fā)咽痛、扁桃體腫大、頸部或頜下淋巴結(jié)腫痛，常伴有發(fā)燒，通常沒有咳嗽和顯著鼻溢。二、標(biāo)本采集囑病人張口發(fā)“啊”音，以暴露咽喉部，必要時(shí)用壓舌板；取出咽拭子中無菌長棉簽，快速擦拭兩側(cè)腭弓和咽、扁桃體分泌物，扁桃體有膿點(diǎn)時(shí)最好擠破膿點(diǎn)并采集膿性物；將棉簽插入運(yùn)輸管，蓋緊送檢。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第11頁四、標(biāo)本采集—咽拭子(上呼吸道感染)三、標(biāo)簽和申請單申請單除應(yīng)包含患者基本信息外，注明患者臨床診療、癥狀、是否使用了抗菌藥品、檢測目標(biāo)，一定要注明標(biāo)本采集時(shí)間。標(biāo)本盒上標(biāo)簽要求有唯一標(biāo)識(shí)號(hào)或條碼，注明標(biāo)本采集時(shí)間、檢測目標(biāo)。四、標(biāo)本運(yùn)輸咽拭子標(biāo)本運(yùn)輸宜采取帶保濕功效運(yùn)輸培養(yǎng)基，防止因?yàn)樗蜋z時(shí)間過長而干燥。如未采取運(yùn)輸培養(yǎng)基，應(yīng)于半小時(shí)內(nèi)送檢。即使采取運(yùn)輸培養(yǎng)基，室溫保留也不應(yīng)超出24小時(shí)。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第12頁四、標(biāo)本采集—痰標(biāo)本(下呼吸道感染)一、臨床采樣指征咳嗽、膿性痰，伴有發(fā)燒，影像學(xué)檢驗(yàn)出現(xiàn)新或擴(kuò)大浸潤影；氣道開放患者，出現(xiàn)膿痰或血性痰；考慮下呼吸道感染患者采集痰液標(biāo)本，同時(shí)送血培養(yǎng)標(biāo)本。二、采集要求細(xì)菌（肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌等）在室溫環(huán)境下很輕易自溶死亡，如不能在采集標(biāo)本后2小時(shí)內(nèi)接種將顯著影響檢出率。所以痰標(biāo)本采集時(shí)機(jī)十分關(guān)鍵，應(yīng)嚴(yán)格遵照以下標(biāo)準(zhǔn)采集標(biāo)本：爭取首劑抗菌藥品治療使用前及更換抗菌藥品前采集；標(biāo)本采集后確保2小時(shí)內(nèi)送達(dá)試驗(yàn)室并得到接種；只要有可能得到合格痰標(biāo)本，應(yīng)馬上采集、送檢；宜在醫(yī)護(hù)人員直視下留取合格痰標(biāo)本；送檢痰標(biāo)本后三天內(nèi)不主張?jiān)俅嗡蜋z，同一項(xiàng)目同一天不重復(fù)送檢。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第13頁四、標(biāo)本采集—痰標(biāo)本(下呼吸道感染)三、標(biāo)本采集采集前準(zhǔn)備無菌杯（螺口、有蓋、密封）、清水。并向患者提供口頭及書面采樣指導(dǎo)，以確?；颊叱浞至私饪谇磺鍧?、深咳、防止口咽部菌群污染意義和方法。用清水漱口2-3次，有假牙者應(yīng)先取下假牙；再用力咳嗽咳出深部痰液；將痰液咳入無菌杯內(nèi)；蓋好并擰緊杯蓋，盡快送達(dá)試驗(yàn)室。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第14頁四、標(biāo)本采集—痰標(biāo)本(下呼吸道感染)四、標(biāo)簽及申請單申請單除應(yīng)包含患者基本信息外，注明患者臨床診療、癥狀、是否使用了抗菌藥品、檢測目標(biāo)，標(biāo)識(shí)是普通培養(yǎng)、抗酸桿菌還是真菌培養(yǎng)。一定要注明標(biāo)本采集時(shí)間。標(biāo)本盒上標(biāo)簽要求有唯一標(biāo)識(shí)號(hào)或條碼，注明痰標(biāo)本采集時(shí)間和檢測目標(biāo)。五、標(biāo)本運(yùn)輸標(biāo)本采集后需盡快送到試驗(yàn)室，不能超出2小時(shí)。不及時(shí)運(yùn)輸可造成肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌因?yàn)椴贿m應(yīng)外界環(huán)境和自溶現(xiàn)象而死亡；不能及時(shí)送達(dá)或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4℃冰箱保留（疑為肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌不在此列），以免雜菌生長。但不能超出24小時(shí)；微生物標(biāo)本采集講義專家講座第15頁四、標(biāo)本采集—支氣管鏡-肺泡灌洗液（BAL）采集肺泡灌洗液進(jìn)行檢測，可降低口咽部菌群污染，提升檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。須做定量或半定量接種培養(yǎng)。一、臨床采樣指征對于疑似肺炎患者，如有機(jī)會(huì)進(jìn)行氣管鏡檢驗(yàn)，則可同時(shí)采集肺泡灌洗液進(jìn)行培養(yǎng)。不能進(jìn)行深部咳痰患者，也可考慮經(jīng)過氣管鏡獲取標(biāo)本。二、標(biāo)本采集患者咽喉局部麻醉后，導(dǎo)入纖維支氣管鏡；經(jīng)過纖維支氣管鏡對病灶所在支氣管以下肺段或亞肺段水平，用37℃或室溫?zé)o菌生理鹽水屢次灌洗，每次注入20～60ml（常規(guī)進(jìn)行4～5次），直到總共灌洗100～300ml，并充分吸引回收，從回收液中取出10ml標(biāo)本；放入無菌管中，旋緊蓋子，即刻送達(dá)試驗(yàn)室。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第16頁四、標(biāo)本采集—支氣管鏡-肺泡灌洗液（BAL）三、標(biāo)簽及申請單申請單除應(yīng)包含患者基本信息外，注明患者臨床診療、癥狀、是否使用了抗菌藥品、檢測目標(biāo)，標(biāo)識(shí)是普通培養(yǎng)、抗酸桿菌還是真菌培養(yǎng)。一定要注明標(biāo)本種類為肺泡灌洗液，以及采集時(shí)間。無菌管上標(biāo)簽要求有唯一標(biāo)識(shí)號(hào)或條碼，注明標(biāo)本采集時(shí)間、檢測目標(biāo)。四、標(biāo)本運(yùn)輸標(biāo)本采集后需盡快送到試驗(yàn)室；不要冷藏標(biāo)本。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第17頁四、標(biāo)本采集—?dú)獾牢諛?biāo)本一、臨床采樣指征有氣管插管或氣管切開等人工氣道患者，無法自行咳痰，可經(jīng)過吸痰管從氣道吸收標(biāo)本。二、標(biāo)本采集經(jīng)過氣管內(nèi)插管將一次性無菌吸痰管推進(jìn)呼吸道直至碰到阻力后開始抽吸，留取標(biāo)本在吸痰杯內(nèi)。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第18頁四、標(biāo)本采集—?dú)獾牢諛?biāo)本三、標(biāo)簽及申請單每個(gè)標(biāo)本都應(yīng)在申請單上詳細(xì)填寫患者姓名、病歷號(hào)、采集日期時(shí)間、診療、檢驗(yàn)項(xiàng)目等。在標(biāo)本上粘貼條碼，條碼中應(yīng)包含患者姓名、病歷號(hào)、采集時(shí)間等。標(biāo)本標(biāo)識(shí)要求有唯一標(biāo)識(shí)號(hào)或條碼。四、標(biāo)本運(yùn)輸標(biāo)本采集后需盡快送到試驗(yàn)室，不能超出2小時(shí)。不及時(shí)運(yùn)輸可造成肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌因?yàn)椴贿m應(yīng)外界環(huán)境和自溶現(xiàn)象而死亡；不能及時(shí)送達(dá)或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4℃冰箱保留（疑為肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌不在此列），以免雜菌生長。但不能超出24小時(shí)；對可疑烈性呼吸道傳染?。⊿ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者標(biāo)本，在采集、運(yùn)輸或保留過程中必須注意生物安全保護(hù)。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第19頁四、標(biāo)本采集—胸水一、臨床采樣指征：患者聽診、影像學(xué)檢驗(yàn)發(fā)覺胸腔積液，胸腔穿刺后發(fā)覺胸腔積液渾濁、乳糜性、血性或膿性，考慮感染性胸腔積液(肺結(jié)核、肺炎、胸膜炎)患者應(yīng)送檢，進(jìn)行涂片染色、細(xì)菌培養(yǎng)等細(xì)菌學(xué)檢測。二、標(biāo)本采集：盡可能在抗菌藥品使用前采集。由臨床醫(yī)師經(jīng)皮穿刺或外科方式取得；標(biāo)本采集后可注入可直接注入血培養(yǎng)瓶送檢，或?qū)?biāo)本搜集到帶螺旋帽內(nèi)無菌管送檢，方便微生物室進(jìn)行涂片檢驗(yàn)。標(biāo)本量分別為細(xì)菌培養(yǎng)≥1ml，真菌培養(yǎng)≥10ml，分枝桿菌培養(yǎng)≥10ml。不要拭子蘸取標(biāo)本。如送檢T-SPOT.TB，還需注意添加肝素抗凝。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第20頁四、標(biāo)本采集—胸水三、標(biāo)簽及申請單：申請單除應(yīng)包含患者基本信息外，注明患者臨床診療、癥狀、是否使用了抗菌藥品、標(biāo)本起源、檢測目標(biāo)，注明胸水類型、性狀，以及特殊檢驗(yàn)需求。血培養(yǎng)瓶及無菌管要求有唯一標(biāo)識(shí)號(hào)或條碼。需標(biāo)注患者基本信息、標(biāo)本起源、標(biāo)本采集時(shí)間、送檢目標(biāo)等。四、標(biāo)本運(yùn)輸：標(biāo)本采集后應(yīng)馬上送檢，通常室溫15分鐘內(nèi)應(yīng)送至試驗(yàn)室，若不能及時(shí)送檢，不可冷藏。室溫保留不得超出24小時(shí)。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第21頁四、標(biāo)本采集—尿標(biāo)本一、臨床采樣指征：當(dāng)患者出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛、血尿、腎區(qū)疼痛等癥狀，同時(shí)可能伴有寒戰(zhàn)、高熱、白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高，懷疑存在泌尿系感染時(shí)；尿常規(guī)結(jié)果提醒泌尿系感染時(shí)；無癥狀患者不提議常規(guī)進(jìn)行尿培養(yǎng)檢測；留置導(dǎo)尿管患者出現(xiàn)發(fā)燒時(shí)。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第22頁四、標(biāo)本采集—尿標(biāo)本二、標(biāo)本采集：1.清潔中段尿：盡可能在未使用抗菌藥品前送檢，晨尿最正確。采集方法以下：A.女性：分開兩腿；用肥皂水清洗尿道口部位，或用碘酒、碘伏消毒尿道口；手持采樣杯外側(cè)，防止接觸杯口邊緣。先將少許尿液排入廁所，然后用采樣杯采集半杯尿液；將蓋子蓋好、旋緊；檢驗(yàn)杯蓋是否密封，防止溢灑。B.男性：縮回包皮充分暴露龜頭；用肥皂清洗尿道口；手持采樣杯外側(cè)，防止接觸杯口邊緣。先將少許尿液排入廁所，然后用采樣杯采集半杯尿液；將蓋子蓋好、旋緊；檢驗(yàn)杯蓋是否密封，防止溢灑。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第23頁四、標(biāo)本采集—尿標(biāo)本2.導(dǎo)尿管采集尿液：從導(dǎo)尿管近端側(cè)壁采集標(biāo)本，禁止從集尿袋中采集夾閉導(dǎo)尿管不超出30分鐘；用酒精棉球消毒清潔導(dǎo)管近端采樣部位周圍外壁；將注射器針頭穿刺進(jìn)入導(dǎo)管腔，抽吸出尿液；搜集尿液置于無菌尿杯或試管中；檢驗(yàn)杯蓋是否密封，防止灑溢。3.恥骨上膀胱穿刺：進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)或兒童及其它無法配合取得清潔標(biāo)本時(shí)消毒臍部至尿道之間區(qū)域皮膚；對穿刺部位進(jìn)行局麻；在恥骨聯(lián)合和臍部中線部位將針頭插入充盈膀胱；用無菌注射器從膀胱吸收尿液；無菌操作將尿液轉(zhuǎn)入無菌螺口杯，盡快送至試驗(yàn)室培養(yǎng)。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第24頁四、標(biāo)本采集—尿標(biāo)本三、標(biāo)簽及申請單申請單除應(yīng)包含患者基本信息外，一定注明患者臨床診療、癥狀、是否使用了抗菌藥品、標(biāo)本留取方式和采集時(shí)間。尿杯上標(biāo)簽要求有唯一標(biāo)識(shí)號(hào)或條碼，注明標(biāo)本種類和采集時(shí)間，此信息尤其主要。四、標(biāo)本運(yùn)輸尿標(biāo)本采集后應(yīng)馬上送檢。如不能在采集30分鐘內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)放入4℃冰箱保留，但也不能超出24小時(shí)。微生物標(biāo)本采集講義專家講座第25頁四、標(biāo)本采集—糞便標(biāo)本一、臨床采樣指征：當(dāng)患者出現(xiàn)腹痛、腹瀉（水樣便、膿血便），或伴有發(fā)燒；糞便常規(guī)鏡檢異常，提議采集糞便標(biāo)本，進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。二、標(biāo)本采集與要求標(biāo)本采集盡可能在應(yīng)用抗菌藥品治療前，標(biāo)本應(yīng)搜集在寬口便盒內(nèi)，并加蓋密封。如考慮空腸彎曲菌需要無血彎曲菌瓊脂培養(yǎng)基。艱難梭狀桿菌需在厭氧環(huán)境中生存，提議在床旁進(jìn)行標(biāo)本采集及接種。接種后標(biāo)本馬上放入?yún)捬醮鼉?nèi)，送至試驗(yàn)室。重復(fù)采集標(biāo)本