無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

目錄1.無菌試驗(yàn)2.無菌操作3.滅活前樣品無菌試驗(yàn)不合格分析無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第1頁（一）無菌試驗(yàn)無菌試驗(yàn)：是無菌制劑、原料、輔料及其它品種是否無菌一個(gè)檢驗(yàn)方法，同時(shí)指出“若供試品符合無菌檢驗(yàn)法要求，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)覺微生物污染”。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第2頁（一）無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基制備及培養(yǎng)條件培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)符合要求脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采取驗(yàn)證合格滅菌程序滅菌。制備好培養(yǎng)基應(yīng)保留在2℃～25℃、避光環(huán)境，若保留于非密閉容器中，普通在三周內(nèi)使用；若保留于密閉容器中，普通可在一年內(nèi)使用。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第3頁硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基慣用培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（一）無菌試驗(yàn)改良馬丁培養(yǎng)基無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第4頁硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基酪胨(胰酶水解)15.0g酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g氯化鈉2.5gL-胱氨酸0.5g新配制0.1%刃天青溶液1.0ml硫乙醇酸鈉0.5g瓊脂0.75g(或硫乙醇酸)（0.3ml)水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成份混合，微溫溶解，調(diào)整pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)整pH值使滅菌后為7.1±0.2。分裝至適宜容器中，其裝量與容器高度百分比應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超出培養(yǎng)基深度1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層高度不得超出培養(yǎng)基深度1/5，不然，須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失（不超出20分鐘），快速冷卻，只限加熱一次，并預(yù)防被污染。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置30℃～35℃培養(yǎng)。返回?zé)o菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第5頁改良馬丁培養(yǎng)基2.改良馬丁培養(yǎng)基胨5.0g磷酸氫二鉀1.0g酵母浸出粉2.0g硫酸鎂0.5g葡萄糖20.0g水1000ml除葡萄糖外，取上述成份混合，微溫溶解，調(diào)整pH值約為6.8，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)整pH值使滅菌后為6.4±0.2，分裝，滅菌。改良馬丁培養(yǎng)基置23℃～28℃培養(yǎng)。返回?zé)o菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第6頁營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基胨10.0g氯化鈉5.0g牛肉浸出粉3.0g水1000ml取上述成份混合，微溫溶解，調(diào)整pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入14.0g瓊脂，調(diào)整pH值使滅菌后為7.2±0.2，分裝，滅菌。返回?zé)o菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第7頁

（二）無菌操作概念人員操作物品無菌操作標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第8頁概念明確基本概念進(jìn)行無菌操作時(shí)，應(yīng)首先明確無菌區(qū)、非無菌區(qū)、無菌物品概念。無菌區(qū)：指經(jīng)滅菌處理且未被污染區(qū)域。非無菌區(qū)：指未經(jīng)滅菌處理，或雖滅菌處理但又被污染區(qū)域。無菌物品：指經(jīng)過物理或化學(xué)方法滅菌后保持無菌狀態(tài)物品。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第9頁環(huán)境操作環(huán)境清潔、寬大①操作環(huán)境應(yīng)清潔、寬大、定時(shí)消毒；②操作臺(tái)清潔、干燥、平坦、物品布局合理；③無菌操作前半小時(shí)應(yīng)降低走動(dòng)、防止塵埃飛揚(yáng)。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第10頁人員工作人員儀表符合規(guī)范無菌操作前，工作人員應(yīng)戴好帽子和口罩，修剪指甲并洗手，穿好無菌衣、戴無菌手套。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第11頁人員無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第12頁物品物品放置有序，標(biāo)志顯著①無菌物品必須與非無菌物品分開放置，而且有顯著標(biāo)志。②無菌物品不可暴露于空氣中，應(yīng)存放于無菌包或無菌容器內(nèi)。③無菌包外需標(biāo)明物品名稱、滅菌日期，并按失效期先后次序擺放。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第13頁操作無菌操作①進(jìn)行無菌操作時(shí)，操作者身體應(yīng)于無菌區(qū)保持一定距離。②取放無菌物品時(shí)，應(yīng)面向無菌區(qū)。③取用無菌物品時(shí)應(yīng)使用無菌持物鉗。④手臂應(yīng)保持在腰部以上，手不可直接接觸無菌物品。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第14頁操作⑤非無菌物品應(yīng)遠(yuǎn)離無菌區(qū)；無菌物品一經(jīng)取出，即使未用，也不可放回?zé)o菌容器內(nèi)。⑥防止面對(duì)無菌區(qū)談笑、咳嗽、打噴嚏。⑦如無菌物品疑有污染或已被污染，應(yīng)予更換并重新滅菌。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第15頁（三）滅活前樣品無菌試驗(yàn)不合格分析取樣物品前準(zhǔn)備取樣步驟除菌過程操作無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第16頁前準(zhǔn)備a）在對(duì)滅活罐進(jìn)行整體CIP前，零部件是否拆卸并進(jìn)行沖洗。（如溫度探頭、取樣閥）b）滅活罐SIP過程是否按照SOP執(zhí)行，滅菌時(shí)間是否滿足SOP要求。C）除菌管道是否按照SOP進(jìn)行滅菌，滅菌結(jié)束應(yīng)馬上與外界隔斷，并確保管道內(nèi)正壓。d）除菌濾材是否按照SOP進(jìn)行檢測(cè)、沖洗、滅菌，滅菌結(jié)束后是否放置于無菌區(qū)域，并關(guān)閉全部手動(dòng)隔膜閥和氣嘴，包口不是否完整無破損。

e）除菌濾器連接過程是否按照SOP進(jìn)行操作，連接過程中，人員、環(huán)境是否到達(dá)無菌操作要求。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第17頁取樣物品a）取樣瓶是否按照SOP要求進(jìn)行清潔滅菌，瓶口有沒有破損現(xiàn)象，錫箔紙封口是否完好。b）塞子鋁帽是否按照SOP要求進(jìn)行清潔滅菌。c）持物鉗是否完好可用并進(jìn)行消毒。d）取樣物品滅菌后是否擺放在無菌區(qū)域。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第18頁除菌過程操作a）除菌過程開始前房間環(huán)境清潔消毒辦法是否到位，能否滿足潔凈室等級(jí)要求。b）除菌過程人員是否按照SOP進(jìn)行操作，人員進(jìn)行無菌操作時(shí)是否滿足無菌操作要求。c）在層流罩下進(jìn)行操作人員是否按照SOP進(jìn)行局部消毒。d）操作過程所使用設(shè)備設(shè)施是否異常。e）操作人員是否定時(shí)進(jìn)行局部消毒。無菌室無菌操作及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估第19頁取樣步驟a）取樣物品是否按照SOP進(jìn)行清洗滅菌，滅菌后物品是否按照要求存放于無菌區(qū)域。b）取樣操作前，取