動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第1頁溫故而知新——植物體細(xì)胞雜交（馬鈴薯番茄）融合原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁植物細(xì)胞融合雜種細(xì)胞AB雜種植株脫分化愈傷組織再分化植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A去壁去壁人工誘導(dǎo)植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第2頁傳說中天馬能否利用細(xì)胞工程技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)呢？動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第3頁一、動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）1、概念：指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞過程。2、結(jié)果：形成雜交細(xì)胞，其特點(diǎn)是含有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息單核細(xì)胞。4、原理：細(xì)胞膜流動(dòng)性5、誘導(dǎo)細(xì)胞融合方法物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒3、實(shí)質(zhì)：核融合動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第4頁滅活病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜含有一定流動(dòng)性）生物法：滅活病毒（失去感染能力、保留抗原結(jié)構(gòu)）動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第5頁6.過程：動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合（膜融合、質(zhì)融合）多核體有絲分裂（核融合）2個(gè)完整雜交細(xì)胞AB注意：動(dòng)物細(xì)胞融合也需要把多個(gè)兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第6頁7、意義：突破了有性雜交方法局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。注意：不能取得新物種8、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等主要伎倆尤其是利用雜交瘤技術(shù)為制造單克隆抗體開辟了新路徑最主要用途：制備單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第7頁9、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前處理誘導(dǎo)方法結(jié)果用途克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙取得雜種植株細(xì)胞膜流動(dòng)性細(xì)胞膜流動(dòng)性細(xì)胞全能性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）生物（滅活病毒）制備單克隆抗體等物理、化學(xué)方法（同左）誘導(dǎo)成雜種植株形成雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第8頁②缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。二、單克隆抗體1.常規(guī)抗體制備①人對(duì)應(yīng)抗體目標(biāo)基因2.基因工程制備細(xì)菌細(xì)胞導(dǎo)入抗體培養(yǎng)液中提取①向動(dòng)物體內(nèi)重復(fù)注射抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從血清中分離所需抗體。②缺點(diǎn)：操作復(fù)雜。動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第9頁二、單克隆抗體3.細(xì)胞工程制備單克隆抗體一個(gè)B淋巴細(xì)胞：只分泌一個(gè)特異性抗體（雜交瘤細(xì)胞）小鼠骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）：能無限增殖融合單克隆抗體培養(yǎng)

由單個(gè)細(xì)胞經(jīng)過屢次無性繁殖（克隆），形成基因型相同細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)抗體稱為單克隆抗體。

①單克隆抗體（概念）②設(shè)計(jì)方案（原理）創(chuàng)始人：米爾斯坦雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第10頁注入小鼠體內(nèi)從脾臟細(xì)胞中分離B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞篩選出雜交瘤細(xì)胞（B瘤）

篩選出能產(chǎn)生特定抗體雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)從培養(yǎng)液中提取從小鼠腹水中提取單克隆抗體人工誘導(dǎo)融合克隆化培養(yǎng)(特定選擇培養(yǎng)基)③單克隆抗體制備過程特定抗原（羊紅細(xì)胞）方法：融合含有同種核細(xì)胞融合雜種細(xì)胞未融合親本細(xì)胞（BB、瘤瘤）（B瘤）（B、瘤）抗體檢測(cè)特點(diǎn)：動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第11頁⑤單克隆抗體特點(diǎn)和應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強(qiáng)，靈敏度高，產(chǎn)量高，優(yōu)越性十分顯著。應(yīng)用：特點(diǎn)：④所用技術(shù)：動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)１作為診療試劑：能準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合

優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速２可用于“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋放射性同位素，化學(xué)藥品或細(xì)胞毒素運(yùn)載藥品：制成“生物導(dǎo)彈”治療疾病：主要用于癌癥治療動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第12頁動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第13頁動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第14頁課堂小結(jié)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合新方法——滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高優(yōu)勢(shì)動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第15頁感謝大家！動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體新版第16頁克隆化培養(yǎng)——有限稀釋法將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)。使每孔細(xì)胞不超出一個(gè)，經(jīng)過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌物中抗體，那些上清液可與特定抗原