輸血科常見試驗問題的探討

輸血科常見試驗問題的探討第1頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

一.輸血科常用的實驗1．直接凝集試驗：

原理：顆粒抗原（紅細胞）+抗體（試劑為IgM，血清為

IgM或IgG）。方法：玻片法，試管法，微柱凝膠法（單個紅細胞可通過玻璃微珠之間空隙到達底部，而凝集紅細胞則不能通過而滯留于玻璃微珠表面）。特點：紅細胞表面抗原數(shù)量多：數(shù)萬-數(shù)十萬甚至一百多萬個。應用：血型鑒定，鹽水交叉配血。關鍵：抗原抗體的比例需適當，否則結(jié)果錯誤。紅細胞濃度1%,5%-10%。

第2頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二2.間接抗球蛋白試驗原理：抗體首先與紅細胞結(jié)合，洗滌，然后再與抗球蛋白抗體反應。方法：試管法，微柱凝膠法（配血卡，抗篩卡）。特點：可檢出IgG抗體或可致敏的補體成分。應用：交叉配血，抗體篩選，抗體鑒定。關鍵：紅細胞濃度（0.8%，2-5%），37℃孵育時

間。試管法：充分洗滌紅細胞。微柱法：離

心速度和時間（1000rpm×10min），血清與

紅細胞需混合后孵育。第3頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二3．直接抗球蛋白試驗原理：抗體或補體致敏的紅細胞洗滌后直接與抗球蛋白抗體反應。方法：試管法，微柱法。應用：可檢出IgG抗體或補體致敏的紅細胞（自身免疫?。ｊP鍵：紅細胞濃度（0.8%，2-5%），試管法：充分洗滌紅細胞。第4頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二4．抗體篩選原理：間接抗球蛋白試驗。血清與試劑紅細胞混合，37℃孵育，離心。方法：微柱凝膠法。應用：可檢出血清中抗紅細胞IgG抗體或可致敏紅細胞的補體成分。關鍵：應用前微柱卡離心，紅細胞濃度

0.8%），血清與紅細胞需混合后37℃

孵育，離心速度和時間

1000rpm×10min）。第5頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二5．聚凝胺交叉配血試驗原理：聚凝胺中和紅細胞表面的負電荷縮小紅細胞之間的距離，LISS增強可以抗體之間的結(jié)合力，離心產(chǎn)生凝集現(xiàn)象，加入解聚液消除聚凝胺正電荷，有IgM或IgG抗體產(chǎn)生的凝集不散開，非特異性凝集則散開。應用：可檢出血清中IgM或尤其是IgG類抗紅細胞抗體第6頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二關鍵：按標準操作程序非常重要，是快速、敏感的交叉配血方法。紅細胞濃度為

5%，血清加入量，LISS加入量，離心速度和時間（3400rpm×15sec），30

秒內(nèi)觀察結(jié)果等等。肝素抗凝血多加幾滴聚凝胺，注意新鮮血標本產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。第7頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二6．吸收試驗原理：紅細胞表面抗原與相應抗體孵育產(chǎn)生結(jié)合反應。已知抗體可檢測紅細胞表面未知抗原，已知紅細胞表面抗原可檢測未知血清中的抗體。應用：血型亞型的鑒定，抗體特異性鑒定，血清自身抗體吸收后用于血型鑒定和交叉配血試驗。第8頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二7．放散試驗原理：與紅細胞表面抗原結(jié)合的抗體通過熱放散或乙醚放散等方法解離下來。應用：血型的鑒定，抗體特異性鑒定，得到自身抗體或無自身抗體的紅細胞。第9頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二8．凝集抑制試驗（中和試驗）原理：血清、唾液、胃液、精液、腹水以及卵巢液等體液中的血型抗原與已知相應抗體特異性結(jié)合，抑制抗體與紅細胞的結(jié)合反應。應用：體液或組織中ABHLewis血型物質(zhì)的鑒定，司法鑒定。第10頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二9．新生兒溶血病的血清學試驗嬰兒和父母ABO血型鑒定新生兒標本檢查：DAT,IAT，游離抗體（放散試驗）。3.母親標本檢查：IgG抗A(B)效價，ABO以外抗體（試劑紅細胞）。第11頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

二.血型及血型鑒定第12頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（一）ABO，Rh（D）血型抗原的分子生物學

1）H抗原和H基因：

H基因位于19號染色體上，編碼巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶，催化巖藻糖與前體物質(zhì)支鏈末端的半乳糖相連接形成H抗原。群體中99.99％有H基因（Hh或HH），而hh即為孟買型，很少見，雖然有A、B基因，但紅細胞上缺乏ABO系統(tǒng)的全部抗原。H基因的遺傳與ABO基因無關，但A，B及H抗原全部都是從相同的前身物質(zhì)形成的。第13頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二2）A、B抗原和A、B基因：

A、B基因位于第九號染色體上(9q34.1-q34.2,跨越染色體18kb長度)。A基因編碼N－乙酰胺半乳糖轉(zhuǎn)移酶，使N－乙酰半乳糖胺與H抗原相連，形成A血型物質(zhì)，在A型成人每個紅細胞上可多達81－117萬個血型A分子。B基因編碼D－半乳糖轉(zhuǎn)移酶，使D－半乳糖與H抗原相連，形成B血型物質(zhì)，在B型成人每個紅細胞上可多達61－83萬個血型B分子。

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A和B基因都被遺傳時（AB型），A分子大約有6萬個（正定型A端可能會弱一些），B分子大約有72萬個（正定型B端可能會強一些）。O型紅細胞上只有高濃度的H抗原。ABH抗原在37周齡開始發(fā)育，但新生兒紅細胞ABH的反應性沒有成人強，位點數(shù)只有成人的25－50％，血型鑒定時應注意。第15頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二3）ABO血型基因及編碼氨基酸示意圖A、B、O基因高度同源，A基因和B基因表達產(chǎn)物僅有4個氨基酸差異234567（外顯子編號）9a

23a17a16a12a45a225a（編碼氨基酸數(shù)目）第16頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二4）RH(D)抗原和基因基因位于1p34-36區(qū)域，由10個外顯子組成，編碼417aa的多肽，跨細胞膜存在表達其抗原性。

RH血型基因：RHDd,Cc,Ee等位基因。單倍型：8種(2×2×2)；基因型：8×（8＋1）/2＝36種。表型：用五種抗血清鑒定的表型有

2（D,d）×3（C,c,Cc）×3(E,e,Ee)＝18種。第17頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

5）D抗原表型的分類：正常D抗原：每個紅細胞9萬－33萬個，200萬個（D－－/D－－基因型）弱D：有正常的D抗原但數(shù)量減少

，數(shù)百個。單抗檢測，直接凝集或抗球蛋白實驗

Del型：只能用吸收放散試驗檢測出來，部分外顯子缺乏導致抗原不完整。不完全D抗原：D抗原不完全，血清中有針對缺失D抗原表位的抗體。第18頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（二）ABO血型系統(tǒng)的亞型及變異型

1）A1和A2亞型

兩種A抗原：A1和A2亞型構(gòu)成了全部A型血液的99.99％。兩種紅細胞均與抗A試劑發(fā)生強凝集反應。B型血血清含兩種抗體（抗-A，抗-A1）。1－2％A2型人和22－26％A2B型人血清含抗A1。系A基因第三外顯子單一堿基突變造成酶活性改變。

區(qū)別：

抗A1試劑與A1紅細胞凝集，不與A2紅細胞凝集，大約80％A型或AB型紅細胞與抗A1（雙花扁豆植物血凝素）凝集，分類為A1或A1B型；其余20％紅細胞為抗A凝集，但不為抗A1凝集，稱為A2或A2B型。第19頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二意義：

在常規(guī)輸血實驗中，除非A2或A2B型人的血清含有抗A1抗體，患者與獻血員間的A1或A2不需加以區(qū)別。抗A1抗體在A2型人為1－2％，A2B型人為22－26％。在37℃有反應的抗A1才有臨床意義，可造成正反定型不符，交叉配合不相合。第20頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

2）弱A亞型弱A亞型的血清學和轉(zhuǎn)移酶特點：名稱細胞反應血清中抗體分泌型唾液中的抗原血清中的A轉(zhuǎn)移酶抗－A抗－AB抗－A抗－A1A3mfmf無有時AH有時Aendmfmf無有時H無Ax-/w＋+/—通常有H很少Am-/w+/—無無AH有Ay——無無AH痕量Ael——一些有H無

注：紅細胞均與抗H反應；抗A1可被上述紅細胞吸收放散下來；mf：混合外觀；w：非常弱的凝集。主要原因是A轉(zhuǎn)移酶分子某個氨基酸的變異使其功能受到不同程度的影響所致。第21頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

3）弱B亞型弱B亞型的血清學和轉(zhuǎn)移酶特點：名稱細胞反應血清中抗體分泌型唾液中的抗原血清中的B轉(zhuǎn)移酶

抗－B抗－AB抗H抗－BB3mfmf＋無BH有Bxww＋有BH無Bm－/w－/w＋無BH有Bel－－＋有時H無

注：紅細胞均與抗H反應；抗B可被上述紅細胞吸收放散下來；mf：混合外觀；w：非常弱的凝集。主要原因是B轉(zhuǎn)移酶分子某個氨基酸的變異使其功能受到不同程度的影響所致。第22頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二4）Cis-AB型：父親（母親）AB型＋母親（父親）O型，孩子為AB型及O型原理：染色體基因交換或基因變異

5）嵌合體：雙卵雙生兒和雙精子嵌合體中，存在兩個血型的雜合型，也可以有其它如HLA等的雜合體。第23頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

6）孟買型和類孟買型：

紅細胞是O型，但是H抗原陰性，血清中都有抗－H。缺乏形成H抗原的糖基轉(zhuǎn)移酶，雖然有A或B基因以及A、B的糖基轉(zhuǎn)移酶，但不能形成A或B抗原。紅細胞不能被抗－A、抗－B、抗－AB或抗－H所凝集。由于血清中有抗－H，給臨床輸血帶來了極大困難。一般多輸注同型血或采用自身輸血。

第24頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

7）獲得性B抗原：

細菌的脫乙?；甘筃－乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘牵笳吲c血型B抗原的決定簇很相似。

8）血清中的AB和H物質(zhì)：

含量增高見于胃癌、假性粘液性卵巢囊腫患者。可中和輸入血液中的少量抗－A和抗－B（O型血液）。第25頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二9）HAB分泌型和非分泌型：唾液中有AB物質(zhì)為分泌型，反之為非分泌型。我國占73－85％。受Se和se等位基因控制。唾液中檢測ABO血型物質(zhì)對血型鑒定有重要意義。

10)白血病引起A、B和H抗原減弱：弱A最多見。血型一經(jīng)正確鑒定應輸注同型血。

11)新生兒血型：用正定鑒定血型。出生時血清中一般無IgM抗體，反定型陰性。其血清中有來自母親的IgG抗體。

12)B(A)型和A(B)型

B型紅細胞上存在A抗原，A型紅細胞上存在B抗原?；蛑?－2個堿基突變，稱為A型和B型糖基轉(zhuǎn)移酶的疊蓋功能。

第26頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（三）抗ABH和抗D抗體1）抗－A和抗－B：

抗體可以是IgM、IgG或IgA。大約1/12000成人缺少抗－A或抗－B。新生兒抗體通常是IgG，且大多缺乏。血清中主要是IgM、IgG。唾液、乳汁、淚液、宮頸分泌液和膀胱內(nèi)容物主要是IgA。IgG抗-A，B，M，N在鹽水中直接凝集紅細胞。2）抗－A1抗體：

在臨床上意義不大，多數(shù)在25℃以上沒有活性。也有抗－A1引起溶血性輸血反應的報道。3）ABO自身抗體：

較少，材料統(tǒng)計6/4668人具有ABO自身抗體可導致自身溶血性貧血或致命的溶血和腎衰。第27頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二4）抗H：

孟買血清中的抗－H抗體，可造成嚴重的HDN；O型紅細胞輸入Oh病人體內(nèi)，僅2％的紅細胞生存24小時；A1紅細胞輸入Ah病人體內(nèi)，67％于1小時內(nèi)破壞。5）母親血清的ABO抗體：

可引起新生兒溶血病（HDN）。通常發(fā)生在O型母親的A1、B或A1B型的孩子。15％的孕婦是A或B型的孩子，少量紅細胞輕微破壞的癥狀可能較為常見，但臨床上涉及HDN的非常少：紅細胞上A和B抗原的密度相對較低；血漿中有可溶性的A或B物質(zhì)可以中和部分母體來源的抗體；胎兒血漿中缺乏補體；因為IgG溶解紅細胞需要補體的參與等。

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各血型系中，以A、B抗原性最強，Rh（D）抗原次之，當受者接受了所缺少的A、B抗原后，幾乎每個人都會產(chǎn)生特異性同種抗體。大約有2/3的Rh(D)陰性的人，接受Rh(D)陽性血液后可產(chǎn)生抗D抗體。經(jīng)一次妊娠Rh（+）的胎兒后，大約7%的Rh（-）婦女在6個月內(nèi)血清學試驗可測到抗D。這些抗體是造成溶血性輸血反應的主要原因。如對血型定型結(jié)果有疑問，必須在輸血前妥善解決，否則在輸血時很難選到相合的血液。第29頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（三）血型鑒定

1）.患者的病史和標本病史資料和信息

檢查前應盡可能了解，核對病人的有關資料，包括病人的姓名，年齡，性別，種族，臨床診斷，輸血史，藥物史，妊娠史。標本的要求標本必須有正確的標簽，符合患者血液的體內(nèi)狀態(tài)，能代表患者當前的免疫學情況，并且要防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生，溶血的標本一般不能使用。第30頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

因為血清中的游離血紅蛋白可以掩蓋在輸血前試驗中抗體反應引起的溶血。如果標本標簽上的內(nèi)容與血液申請單上的內(nèi)容不一致或?qū)Σ∪松矸荽_認有疑問的話，必須重抽一份新的血液標本，任何人不得對錯誤的標簽進行修改。血清或血漿均可用作檢查，但使用血漿標本時，應注意排除纖維蛋白原的干擾。因為血漿中有時有少許纖維蛋白凝塊，容易導致凝集結(jié)果的判讀困難。第31頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

前三個月內(nèi)病人輸過血或已經(jīng)妊娠，則配血試驗使用的標本不得在這次輸血的48小時前抽取，避免因回憶反應而產(chǎn)生的抗體漏檢。新近的輸血或妊娠可以引起意外抗體的迅速出現(xiàn)，如果對病人的輸血史或妊娠史不明，使用的樣本必須是輸血前48小時內(nèi)抽取的。病人在使用右旋糖酐等藥物治療前抽取病人血液標本備，以防止紅細胞緡錢狀凝集對試驗結(jié)果的干擾。輸血后所有的標本均應妥善保存于2~8℃冰箱中，至少一周。第32頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二2）血型鑒定的方法

直接凝集試驗高效價IgM抗－A，抗－B。抗-D。方法：玻片法，試管法，卡式法，室溫避免冷抗體一般可得較準確的結(jié)果。第33頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二3）血型鑒定錯誤的原因

技術和管理方面的原因：（1）標本或試劑搞錯，造成假陽性或假陰性結(jié)果。（2）器材不潔產(chǎn)生假陽性結(jié)果。（3）試劑污染或失效產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。（4）離心過度或不足，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。（5）陽性反應產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識別，導致假陰性結(jié)果。（6）漏加試劑，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。（7）結(jié)果記錄或判斷錯誤，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。（8）細胞與血清比例不適當，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。第34頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二血清異常華通氏膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定型結(jié)果。紅細胞致敏在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。異常基因型

ABO亞型的弱抗原難以檢出，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。近期輸血曾異型輸血，使病人血液標本成為不同型別的紅細胞混合物，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。第35頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

嵌合體血型體內(nèi)有兩群紅細胞，定型時顯示“混合外觀

凝集”現(xiàn)象。疾病因素導致抗原減弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到

抑制，檢出困難。紅細胞多凝集現(xiàn)象紅細胞因遺傳或獲得性的表面抗原異常，

發(fā)生多凝集現(xiàn)象。獲得性類B

由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細胞可獲得“類B”的活性。近期內(nèi)進行大量的血漿置換治療影響抗體效價，造成反定

型困難。第36頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

不規(guī)則抗體的存在受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外

的不規(guī)則抗體，與試劑A、B細胞上的相應抗原起反應。低丙種球蛋白血癥低丙種球蛋白血癥病例，可能會因免疫

球蛋白水平全面下降使血清定型時不見凝集或僅見弱凝

集反應。藥物等因素藥物、右旋糖酐及靜脈注射某些造影劑可引起

紅細胞聚集而類似凝集。年齡因素在未產(chǎn)生自己抗體的嬰兒、由母親被動獲得抗體

的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗時可出現(xiàn)異常結(jié)果。第37頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

A亞型B亞型的鑒定：除試劑抗血清外，可用多份人源血清鑒定被檢紅細胞,吸收放散試驗,分子生物學，唾液A或B或H物質(zhì)檢測(凝集抑制試驗)。

弱凝集：用凝聚胺法增加敏感性

過量血型特異性物質(zhì)：血球洗滌2－3次。

自身免疫性疾?。赫ㄓ肊DTA抗凝血，反定用洗滌EDTA抗凝血球吸收的自身血清。

低丙種球蛋白：用增強敏感性的方法如凝聚胺法，酶

法。

年齡：新生兒，＜1歲，＞60歲第38頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

正反定型不一致應考慮如下因素：生理鹽水洗滌紅血球了嗎？紅細胞新鮮否？是用較敏感的試管法，卡式法嗎？年齡：＜1歲，＞60歲低丙球？高蛋白血癥？其他疾?。孔陨砻庖卟?？孕婦（孕期血清有抗A或抗B反應）？輸過血（混合外觀）？第39頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

Rh定型和定型試驗中應注意的問題

Rh定型主要鑒定D抗原，定型時應按抗D血清試劑的使用說明進行，并注意設立對照試驗系統(tǒng)。對獻血者需檢查和確定弱反應性的D抗原。受血者無需鑒定弱D。只有病人有抗D以外的抗體時才有必要確定獻血者Rh（D）以外的抗原，選擇抗體對應的陰性抗原血液和病人配血，可避免溶血性輸血反應的發(fā)生。第40頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二導致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽性的原因：（1）受檢細胞已被免疫球蛋白致敏，或標本血清中含有引起紅細胞凝集的因子。（2）受檢細胞與抗血清孵育時間過長，含高蛋白的定型試劑會引起細胞串錢狀形成。（3）定型血清中含有事先未被檢測的其它特異性抗體，造成假陽性定型結(jié)果。（多見于人源抗D）（4）多凝集細胞造成定型的假陽性。（多見于人源抗D）（5）檢定用器材或抗血清被污染，造成假陽性

洗滌紅細胞，自身對照第41頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二導致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陰性的原因：（1）受檢細胞懸液濃度太高，與抗血清比例失調(diào)。（2）漏加或錯加定型血清。（3）離心后重懸細胞扣時，搖動用力時度，搖散微弱的凝（4）抗血清保存不當，導致失效。第42頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

4）

不規(guī)則抗體篩選所謂不規(guī)則抗體是指抗A、抗B以外的血型抗體。大約有0.3%~2%的群體血清中含有同種抗體。對外來紅細胞抗原的免疫可能由妊娠、輸血或故意注射免疫物質(zhì)而引起?？贵w篩選試驗的原則是用受檢的血清與特殊的試劑紅細在不同的介質(zhì)中起反應，以發(fā)現(xiàn)在37℃中有反應活性的抗體。目的是發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體。第43頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

方法常使的試驗方法有鹽水介質(zhì)試驗法、低離子強度介質(zhì)法（LISS）、酶技術、抗球蛋白試驗、Polybrene及其改良法、微柱凝膠技術等等，可按抗體的血清學行為和試驗的具體條件選擇，但必須做抗球蛋白試驗確證。第44頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

篩選細胞的組成

通常是以2~3個單人份的O型紅細胞組成一套篩選細胞試劑，包括以下常見的抗原：

D,C,E,c,e,M,N,S,s,P,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb

抗體鑒定

抗體篩選試驗陽性，應作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。篩選細胞濃度（4％？0.8％？）和質(zhì)量第45頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二三、交叉配血交叉配血試驗也稱配合性試驗，實際上是檢查不配合性，使病人和獻血者血液之間沒有可測到的不相配合的抗原、抗體成份。

第46頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二1.交叉配血的主要作用

（1）大多數(shù)情況下能證實獻血者的紅細胞與病人的ABO血型是配合的。（2）能檢查出存在于病人血清中的針對獻血者紅細胞的大多數(shù)抗體。（3）有無工作上的差錯事故（如認錯病人，拿錯血袋等）。第47頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

2.交叉配血不能解決的問題：（1）保證輸入的紅細胞有正常存活率。（2）防止病人的免疫作用。（3）從病人的血清中檢出所有紅細胞抗體。（4）防止由于針對獻血者抗原而發(fā)生的記憶性抗體應答引起的遲延性溶血性反應。病人以前就有此種抗體但未能查出這種免疫作用。(5）檢查出獻血者或病人中所有的ABO血型錯誤。(6）檢查出獻血者或病人中所有的Rh血型錯誤。(7)檢出對紅細胞以外的抗體（如血小板、白細胞、血清蛋白抗體等）。第48頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二3.配血試驗的內(nèi)容包括（1）病人血清對供者紅細胞檢測對供者紅細胞起反應的抗體，一般稱為“主側(cè)”配血。（2）病人紅細胞對供者血清檢測對受者紅細胞起反應的抗體，一般稱為“次側(cè)”配血。

（3）病人血清對病人紅細胞稱為“自身對照”試驗。目的是顯示或排除自身抗體，直接抗球蛋白試驗陽性及紅細胞串錢狀假陽性的存在第49頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

4.常用的配血方法酶技術配血方法凝聚胺（Polybrene）交叉配血法抗球蛋白配血法微柱凝膠法第50頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二5.配血試驗中可能出現(xiàn)的一些特殊問題

1）緡錢狀（串錢狀）的形成常見于多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血，以及其它表現(xiàn)為血沉加速的一些病例中。緡錢狀凝集現(xiàn)象，也稱串錢狀凝集。這是在鹽水介質(zhì)的凝集試驗中，常見到的一種假凝集，特點是：①在顯微鏡下紅細胞膜完整，細胞間界限清晰地成緡錢串聚集。②緡錢狀假凝集反應不受溫度影響，室溫與37℃結(jié)果一樣。③抗人球蛋白試驗陰性第51頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

多種原因可以引起紅細胞緡錢狀凝集，常見原因：

?某些疾病致血漿球蛋白異常時，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥時會出現(xiàn)緡錢狀凝集；?病人在使用大分子右旋糖酐和羥乙基淀粉溶液作血容量擴張劑時，也可以產(chǎn)生緡錢狀凝集；?用玻片法試驗時，如溫度過高、時間過長，也容易發(fā)生這種假凝集，因為玻片接觸面大，液體的蒸發(fā)面也大，致使血清容易濃縮。第52頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二緡錢狀凝集的處理

?實驗中遇到緡錢狀凝集時，可將血清適當稀釋后進行實驗。

?在顯微鏡下觀察到緡錢狀凝集時，加1滴生理鹽水到反應物并混勻，通常可以消除這種假凝集。

?做試管法實驗時如發(fā)現(xiàn)緡錢狀凝集，可將試管離心，傾去上清液，瀝干，再加2滴生理鹽水重懸，假凝集會消失，真凝集不會消失，嚴重的可重復一次。緡錢狀形成不影響間接抗球蛋白試驗。第53頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

2）交叉配血試驗結(jié)果不相容，顯示有未檢明的同種抗體存在。

2）在抗球蛋白試驗中顯示有自身抗體存在。

3）存在抗體篩選試驗陰性但交叉配血結(jié)果陽性現(xiàn)象，提示可能有未檢明的稀有抗體存在。4）配血試驗中,離心力不當，選成了假陰性或假陽性。

5）水浴箱溫度不正確，造成錯誤結(jié)果。

6）紅細胞不正確洗滌和懸浮，使抗球蛋白試驗出現(xiàn)假陰性。

7）血清中如含有溶血性抗體，則相應紅細胞被溶解而不是凝集，交叉配血結(jié)果應視為陽性反應（先滅火補體）。

第54頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

紅細胞：

EDTA或枸櫞酸抗凝，NS洗滌三次，配制成2－5％NS懸液；紅細胞濃度太高產(chǎn)生假陰性；凝集胺配血主管無凝集，但病人出現(xiàn)高熱，發(fā)生溶血。血清：干燥管凝血，離心分離血清(或血漿)第55頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二如凝集不散，則作如下處理：

?

37℃溫育排除冷凝聚

?凝聚紅細胞用NS洗滌一次排除蛋白質(zhì)等促凝因素?

?病人血清＋試劑紅細胞排除血型不規(guī)則抗體（抗體篩選）?病人、獻血者血型重新正反定型?獻血者紅細胞有無自身凝聚?排除獻血者紅細胞直抗陽性第56頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二交叉配血主側(cè)不合主側(cè)不合+抗篩陰性+自身對照陰性：

ABO血型不正確（復查血型），患者血清可能含有一種ABO抗體（亞型鑒定），篩選細胞上無相應抗原（尋找相合血液），供者DAT陽性（更換供者）。

主側(cè)不合+抗篩陽性+自身對照陰性：抗原抗體反應（抗體鑒定，尋找相合血液）主側(cè)不合+抗篩陽性+自身對照陽性：患者存在自身抗體（自身吸收做平行試驗），或者異體抗體（抗體鑒定，尋