生物化學(xué)白皮書

本文格式為Word版，下載可任意編輯——生物化學(xué)白皮書一.名詞解釋

1.模體：在大量蛋白質(zhì)分子中，可發(fā)現(xiàn)二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)特別的空間構(gòu)象，稱為模體。

2.結(jié)構(gòu)域：在蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)中，多肽鏈上相鄰的超二級(jí)結(jié)構(gòu)緊湊聯(lián)系，形成一個(gè)或多個(gè)有各自獨(dú)特功能的區(qū)域。

3.蛋白質(zhì)的變性：在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)的改變和生物活性的喪失，稱為蛋白質(zhì)的變性。

4.分子伴侶：是提供一個(gè)保護(hù)環(huán)境，加速蛋白質(zhì)折疊成自然構(gòu)象或形成四級(jí)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。

二.問答題

1.蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn)是什么？怎樣根據(jù)蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn)計(jì)算生物樣品中蛋白質(zhì)的含量？答：Pr元素組成主要有C、O、H、N和S，各種蛋白質(zhì)含氮量平均為16%每克樣品含氮克數(shù)×6.25×100=100克樣品中蛋白質(zhì)含量（g%）

2.組成蛋白質(zhì)的氨基酸結(jié)構(gòu)上有何特點(diǎn)？酸性、堿性氨基酸有哪些？酸性氨基酸組成的蛋白質(zhì)，堿性氨基酸組成的蛋白質(zhì)在pH7.0時(shí)各帶何種電荷？向電場(chǎng)中移動(dòng)什么方向？

答：①組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸有20種，均屬L-α-氨基酸（除甘氨酸外）②酸性氨基酸：天冬氨酸和谷氨酸

堿性氨基酸：賴氨酸、精氨酸和組氨酸③酸性氨基酸——帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)堿性氨基酸——帶正電荷，向負(fù)極移動(dòng)

3.找出哪些是編碼氨基酸，修飾氨基酸和游離非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸？哪些參與蛋白質(zhì)合成？色氨酸、蛋氨酸、羥脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸、羥賴氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、同型半胱氨酸、酪氨酸、精氨酸，這些氨基酸有哪些在280nm有紫外吸收作用？

答：編碼氨基酸：色氨酸、蛋氨酸、組氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、精氨酸修飾氨基酸：羥脯氨酸、羥賴氨酸、胱氨酸

游離非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸：鳥氨酸、同型半胱氨酸

參與蛋白質(zhì)合成的氨基酸：色氨酸、蛋氨酸、羥脯氨酸、組氨酸、羥賴氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸、精氨酸。

OD280nm處有紫外吸收作用的氨基酸：色氨酸和酪氨酸

4.蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有哪些？維持蛋白質(zhì)各級(jí)結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵有哪些？其中主要鍵是什么？

答：蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。一級(jí)結(jié)構(gòu)是指多肽鏈中氨基酸的排列順序。

二級(jí)結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)。即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對(duì)空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象。

三級(jí)結(jié)構(gòu)是指是指多肽鏈中所有原子在空間的整體排布，稱為三級(jí)結(jié)構(gòu)。

四級(jí)結(jié)構(gòu)是指兩條或兩條以上獨(dú)立具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈之間通過非共價(jià)鍵相互締合而形成的聚合體。一級(jí)結(jié)構(gòu)的維持化學(xué)鍵是肽鍵和二硫鍵，其中肽鍵是主要化學(xué)鍵。二級(jí)結(jié)構(gòu)的維持化學(xué)鍵是氫鍵。

三級(jí)結(jié)構(gòu)的維持化學(xué)鍵是疏水鍵、離子鍵、氫鍵和范德華力。主要是疏水鍵。四級(jí)結(jié)構(gòu)的維持化學(xué)鍵是氫鍵和離子鍵、疏水鍵、范德華力。主要是疏水鍵。5.二級(jí)結(jié)構(gòu)有哪些類型？α-螺旋、?-折疊結(jié)構(gòu)有什么特點(diǎn)？

答：蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)形式有四種類型：α-螺旋、?-折疊、?-轉(zhuǎn)角、不規(guī)則卷曲。

α-螺旋的特點(diǎn)：①右手螺旋②氨基酸側(cè)鏈伸向螺旋外側(cè)③每3.6個(gè)氨基酸殘基螺旋上升一圈，螺距為0.54nm④α-螺旋的每個(gè)肽鏈的N-H和第四個(gè)肽鏈的羰基氧形成氫鍵，氫鍵的方向與螺旋長(zhǎng)軸基本平行。?-折疊的特點(diǎn)：①呈鋸齒狀②R側(cè)鏈伸出在主鏈的上或下方③鏈間氫鍵/兩條鏈，一條肽，兩段肽鏈④兩條肽鏈方向：平行或反平行6.變性蛋白質(zhì)的特點(diǎn)有哪些？

答：空間結(jié)構(gòu)破壞（即次級(jí)鍵斷裂）；一級(jí)結(jié)構(gòu)存在（肽鏈存在）；蛋白質(zhì)變性后理化性質(zhì)改變：如溶解度降低，黏度增加，結(jié)晶能力消失，生物活性喪失等；易被蛋白酶水解。7.蛋白質(zhì)在溶液中穩(wěn)定存在的條件是什么？

答：蛋白質(zhì)表面的同性電荷和水化膜是蛋白質(zhì)在溶液中穩(wěn)定存在的條件。

8.蛋白質(zhì)的沉淀方法和原理是什么？沉淀與蛋白質(zhì)變性有何關(guān)系？

答：蛋白質(zhì)沉淀的方法：鹽析法、有機(jī)溶液沉淀法、生物堿試劑沉淀法、重金屬鹽沉淀法。蛋白質(zhì)沉淀的基本原理是：中和電荷和脫水。

蛋白質(zhì)的沉淀與變性的關(guān)系：變性的蛋白質(zhì)易于沉淀，取決于變性的蛋白質(zhì)存在的狀態(tài)，但沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性，取決于沉淀的方法。

9.常見的蛋白質(zhì)顏色反應(yīng)方法有哪些？其原理是什么？

答：常見的蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)有：

茚三酮反應(yīng)：蛋白質(zhì)分子中如存在游離的α-NH2，可以與茚三酮溶液反應(yīng)生成藍(lán)紫色化合物。Pr-Cα-NH(Pro)→呈黃色。

雙縮脲反應(yīng)：在堿性溶液中含兩個(gè)以上肽鍵的化合物都能與稀硫酸銅溶液反應(yīng)呈紫紅色。酚試劑反應(yīng)：Pr-(Tyr、Trp)與酚試劑反應(yīng)呈鉬藍(lán)色。

10.蛋白質(zhì)的分開提純有哪些方法？

答：①透析及超濾法②丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀③電泳④層析⑤超速離心等。

一.名詞解釋

1.Tm：DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈?zhǔn)窃谝粋€(gè)相當(dāng)窄的溫度完成的。在這一范圍內(nèi)，紫外線吸收值達(dá)到最大值的50％時(shí)的溫度稱為DNA的解鏈溫度。

2.增色效應(yīng)：在DNA解鏈過程中,由于更多的共軛雙鍵暴露，DNA在紫外區(qū)260nm處的吸光值增加，并與解鏈程度有一定的比例關(guān)系，這種關(guān)系稱為DNA的增色效應(yīng)。

3.核酸分子雜交：在DNA變性后的復(fù)性過程中，若將不同種類的DNA單鏈分子或RNA分子放在同一溶液中，只要兩種單鏈分子中存在一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系，在適合條件下（溫度及離子強(qiáng)度），就可以在不同分子間形成雜化雙鏈的現(xiàn)象。二.問答題

1.試比較DNA和RNA在化學(xué)組成上的區(qū)別:答：DNA：脫氧核糖、T；RNA：核糖、U

2.核苷酸中NMP,dNMP,NTP,dNTP分別有哪些？每一類有何作用？答：NMP:AMP,UMP,CMP,GMP.RNA組成單位；dNMP:dAMP,dTMP,dCMP,dGMPDNA組成單位；NTP:ATP,UTP,CTP,GTPRNA合成原料；dNTP:dATP,dTTP,dCTP,dGTPDNA合成原料。

3.核酸分子中核苷酸是怎樣連接的？

答：由前一位核苷酸的3’-OH與下一位核苷酸的5’位磷酸基之間形成3’,5’磷酸二酯鍵，從而構(gòu)成一個(gè)沒有分支的線性核酸分子一級(jí)結(jié)構(gòu)。

4.B-DNA雙螺旋的特點(diǎn)；真核生物DNA超螺旋結(jié)構(gòu)分別有哪些特點(diǎn)？答：B-DNA雙螺旋的特點(diǎn)：

（1）互為反向平行，右手雙螺旋，螺旋直徑為2.0納米，相鄰堿基對(duì)平面距離0.34nm，螺距3.4nm；（2）大溝，小溝相間，溝是DNA與功能蛋白質(zhì)結(jié)合部位；

（3）脫氧核糖-磷酸在螺旋外側(cè)，堿基對(duì)在螺旋內(nèi)側(cè)，堿基互補(bǔ)：A-T,G-C;（4）氫鍵維持橫向穩(wěn)定性，堿基堆積力維持縱向穩(wěn)定性。

真核生物DNA超螺旋結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：其三級(jí)結(jié)構(gòu)為核小體，由核心顆粒+連接區(qū)組成。5.DNA功能有哪些？

答：基本功能是以基因的形式荷載遺傳信息，并作為基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的模板。6.試指出真核生物的三種RNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與功能。

答：（1）mRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：真核生物的mRNA有特別的5′-末端的帽和3′末端的多聚A尾結(jié)構(gòu)，編碼區(qū)存在遺傳密碼。

功能：轉(zhuǎn)錄核內(nèi)DNA遺傳信息的堿基排列順序，并攜帶至細(xì)胞質(zhì)，指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成中的氨基酸排列順序。（2）tRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：tRNA分子含稀有堿基；形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，二級(jí)結(jié)構(gòu)成三葉草型；3′末端末端有-CCA氨基酸接納莖；Ⅱ環(huán)有反密碼子，以堿基配對(duì)的方式識(shí)別mRNA編碼區(qū)的遺傳密碼。功能：氨基酸載體，將其搬運(yùn)到mRNA上翻譯遺傳密碼。

（3）rRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：原核生物：16s,5s,23s;真核生物：18s,28s,5.85s,5s。rRNA與核蛋白體蛋白質(zhì)共同構(gòu)成核糖體，均由易解聚的大小亞基組成。功能：作為蛋白質(zhì)合成場(chǎng)所。

7.試指出核酸的變性，復(fù)性的特點(diǎn)。

答：變性：OD260nm增高，粘度下降，比旋度下降，浮力密度升高，酸堿滴定曲線改變，生物活性喪失。復(fù)性：OD260nm降低。一.名詞解釋

1.Km:是指酶反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度，可以用mol/L表示。

2.同工酶:是指催化的化學(xué)反應(yīng)一致，酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。3.酶的活性中心:酶分子中與酶的催化功能密切相關(guān)的基團(tuán)稱作酶的必需基團(tuán)。這些必需基團(tuán)在一級(jí)結(jié)構(gòu)上可能相距很遠(yuǎn)，但在空間結(jié)構(gòu)上彼此靠近，組成具有特定空間結(jié)構(gòu)的區(qū)域，能與底物特異的結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。這一區(qū)域被稱為酶的活性中心。

4.競(jìng)爭(zhēng)性抑制:有些抑制劑與酶的底物結(jié)構(gòu)相像，可與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，從而阻礙酶和底物結(jié)形成中間產(chǎn)物。

二.問答題

1.結(jié)合酶各部分有何作用與關(guān)系？

答:酶分子除含有氨基酸殘基形成的多肽鏈外，還含有非蛋白部分。這類結(jié)合蛋白質(zhì)的酶稱為結(jié)合酶。其蛋白部分稱為酶蛋白，決定酶催化的專一性；非蛋白部分稱為輔助因子，決定反應(yīng)的種類與性質(zhì)，有的輔助因子是小分子有機(jī)化合物，有的是金屬離子。酶蛋白與輔助因子結(jié)合形成的復(fù)合物稱為全酶，只由全酶才有催化作用。2.酶促反應(yīng)的特點(diǎn)？

答:（1）酶的催化效率高;（2）對(duì)底物有高度特異性;

（3）酶在體內(nèi)處于不斷的更新之中;（4）酶的催化作用受多種因素的調(diào)理;

（5）酶是蛋白質(zhì),對(duì)熱不穩(wěn)定,對(duì)反應(yīng)的條件要求嚴(yán)格。3.酶的專一性有哪些類型？各類專一性有何特點(diǎn)？

答:（1）絕對(duì)特異性:有的酶只能作用于特定結(jié)構(gòu)的底物,進(jìn)行一種專一的反應(yīng),生成一種特定結(jié)構(gòu)的產(chǎn)物.這種特異性稱為絕對(duì)特異性。例如:脲酶只水解尿素。

（2）相對(duì)特異性:有一些酶的特異性相對(duì)較差,這種酶作用于一類化合物或一種化學(xué)鍵,這種不太嚴(yán)格的選擇性稱為相對(duì)特異性。例如:脂肪酶水解脂肪和簡(jiǎn)單的酯,蛋白酶水解各種蛋白質(zhì)的肽鍵等。

（3）立體異構(gòu)特異性：一種酶僅作用于立體異構(gòu)體中的一種，而對(duì)另一種則無作用，這種選擇性稱為立體異構(gòu)特異性。例如乳酸脫氫酶只能催化L-乳酸脫氫生成丙酮酸,對(duì)D-乳酸則無作用。4.酶原的激活的本質(zhì)是什么？

答:實(shí)質(zhì)是酶的活性中心的形成或暴露的過程（酶原主要通過切除部分肽段形成或暴露酶的活性中心）。5.Km值的意義有哪些？

答:（1）酶的特征常數(shù)之一。（2）Km值可以表示酶對(duì)底物的親和力。（3）同一酶對(duì)不同底物的Km不同，表示酶作用的專一性。（4）計(jì)算底物濃度和反應(yīng)速度。6.唾液淀粉酶的沖動(dòng)劑是什么？透析后對(duì)該酶的活性有何影響？答:其沖動(dòng)劑是氯離子，透析后使該酶的活性降低。

7.不可逆性抑制與酶結(jié)合的特點(diǎn)是什么？怎樣解除羥基酶與巰基酶的活性？

答:不可逆性抑制劑尋常與酶上的必需基團(tuán)以共價(jià)鍵結(jié)合，使酶失活；抑制劑不可用透析、超濾等方法除去。

答:有機(jī)磷化合物使羥基酶失活，需用解磷定解毒；重金屬離子及砷化合物使巰基酶失活，需用二巰基丙醇解毒。

8.三種可逆性抑制Km、Vmax有何表觀變化？

答:競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：Vmax不變，表觀Km增大。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：Vmax下降，表觀Km不變。

反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：Vmax下降，表觀Km下降。

9.琥珀酸脫氫酶、二氫葉酸合成酶的底物，競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑分別是什么？競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的特點(diǎn)是什么？答:琥珀酸脫氫酶的底物是琥珀酸,競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑是丙二酸。二氫葉酸合成酶的底物是氨基苯甲酸，競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑是磺胺類藥物。

競(jìng)爭(zhēng)性抑制的特點(diǎn)：1、Vmax不變，表觀Km增大。2、抑制程度取決于[I]/[S]二者的比例。10.試述變構(gòu)酶的組成與各部分起何作用？酶的變構(gòu)效應(yīng)動(dòng)力學(xué)曲線？

答:變構(gòu)酶有催化亞基和調(diào)理亞基組成。催化亞基即酶的活性中心，與底物結(jié)合，催化生成產(chǎn)物。調(diào)理亞基與體內(nèi)某些代謝物結(jié)合，使酶發(fā)生變構(gòu)，從而改變酶的活性。答:酶的變構(gòu)動(dòng)力學(xué)曲線是：S型。

11.酶的共價(jià)修飾特點(diǎn)和主要形式？

答:酶蛋白肽鏈上的一些基團(tuán)與某種化學(xué)基團(tuán)的可逆的共價(jià)修飾結(jié)合，在共價(jià)修飾過程中使酶發(fā)生有活性和無活性兩種形式互變。最主要方式是磷酸化和脫磷酸化。具有受激素控制的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)。

12.試述LDH、CK同工酶有哪些？它們的組織學(xué)分布特點(diǎn)及與臨床意義的關(guān)系？

答:LDH同工酶有LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5五種，LDH1和LDH2在心肌中含量較為豐富，LDH4和LDH5分布在肝和骨骼肌中。LDH3在腦、子宮、肺、脾和胰腺中含量較多。這都與它們的功能相關(guān)，LDH1和LDH2對(duì)乳酸的親和力高，易使乳酸脫氫氧化成丙酮酸，后者進(jìn)一步氧化釋放能量供心肌活動(dòng)需要；LDH4和LDH5對(duì)丙酮酸的親和力高，使它還原為乳酸，這對(duì)保證肌肉在短暫缺氧時(shí)仍可獲得能量有關(guān)。

答:CK同工酶：CK1存在腦中、CK2僅見于心肌、CK3存在于骨骼肌中。答:臨床意義：（1）在代謝中起重要調(diào)理作用。（2）用于解釋發(fā)育過程中階段特有的代謝過程。（3）同工酶可以作為遺傳標(biāo)記，進(jìn)行遺傳研究。（4）同工酶的改變有利于疾病的診斷。

一.名詞解釋

1.糖酵解：在缺氧狀況下，葡萄糖或糖原分解生成乳酸，并釋放少量能量的過程。

2.三碳途徑：又稱間接途徑，指攝入的相當(dāng)一部分葡萄糖先分解成丙酮酸、乳酸等三碳化合物，后者再異生成糖原的途徑。

3.糖異生作用：由非糖物質(zhì)（乳酸、甘油、生糖氨基酸等）轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟腔蛱窃倪^程。

4.乳酸循環(huán)：葡萄糖酵解生成乳酸后，乳酸通過細(xì)胞膜彌散進(jìn)入血液，再入肝臟經(jīng)異生為葡萄糖，葡萄糖釋放入血液后又可被肌攝取，這即乳酸循環(huán)，也叫Cori循環(huán)。二.問答題

1.糖酵解途徑中有哪些關(guān)鍵酶？F-1，6-BP、F-2，6-BP的作用。

答：關(guān)鍵酶：己糖激酶（葡萄糖激酶）、6-磷酸果糖激酶-1、丙酮酸激酶。

答：F-1，6-BP的作用：F-1，6-BP是6-磷酸果糖激酶-1的變構(gòu)激活劑（正反饋），有利于糖的分解。F-2，6-BP的作用：2，6-雙磷酸果糖（F-2，6-BP）是6-磷酸果糖激酶-1最強(qiáng)的變構(gòu)激活劑，其作用是與AMP一起取消ATP、檸檬酸對(duì)6-磷酸果糖激酶-1的變構(gòu)抑制作用。2.糖的有氧氧化包括哪幾個(gè)階段？

答：三個(gè)階段即一是葡萄糖酵解途徑分解成丙酮酸。二是丙酮酸進(jìn)入線粒體內(nèi)，氧化脫羧生成乙酰CoA。三是三羧酸循環(huán)及氧化磷酸化相聯(lián)系。

3.三羧酸循環(huán)的特點(diǎn)，有氧氧化與三羧酸循環(huán)的生理意義，怎么樣被調(diào)理？

答：三羧酸循環(huán)（TAC）特點(diǎn)：氧化：1乙酰CoA/TAC，一周包括2次脫羧反應(yīng)：2CO2；4次脫氫：3NADHH+、1FADH2分別與NADH、琥珀酸氧化呼吸鏈聯(lián)系產(chǎn)生11ATP，1ATP/底物水平磷酸化，一共12個(gè)ATP。關(guān)鍵酶：檸檬酸合成酶、異檸檬酸脫氫酶、α-酮戊二酸脫氫酶亞細(xì)胞部位：線粒體生理意義：（1）TAC是三大營(yíng)養(yǎng)素氧化分解的共同通路；（2）TAC是三大營(yíng)養(yǎng)素相互轉(zhuǎn)化的樞紐；（3）TAC為其它物質(zhì)代謝提供小分子前體；（4）TAC為呼吸鏈提供氫原子。答：調(diào)理：

（1）ATP/ADP或ATP/AMP比值：NADHH+/NAD+比值全程調(diào)理。該比值升高，所有關(guān)鍵酶均被抑制。（2）循環(huán)中后續(xù)反應(yīng)中間產(chǎn)物變構(gòu)反饋抑制前面反應(yīng)中的酶。（3）氧化磷酸化速度影響三羧酸循環(huán)，前者速率減慢而減慢。（4）三羧酸循環(huán)與糖酵解相互影響。4.試述糖酵解與有氧氧化的區(qū)別？答：糖酵解有氧氧化亞細(xì)胞部位胞漿

胞漿和線粒體反應(yīng)條件無氧有氧

關(guān)鍵酶

1.己糖激酶（葡萄糖激酶）2.6-磷酸果糖激酶-13.丙酮酸激酶1～3.同左

4.丙酮酸脫氫酶復(fù)合體5.檸檬酸合成酶6.異檸檬酸脫氫酶7.α-酮戊二酸脫氫酶終產(chǎn)物乳酸

CO2、H2O產(chǎn)生ATP方式底物水平磷酸化

底物水平磷酸化、氧化磷酸化凈得ATP生成數(shù)目

G→2ATP胞漿：6~8ATP；線粒體：30ATP：36~38ATPGn-1：G→3ATP生理意義

1.機(jī)體在缺氧條件下的供能供能

2.特別組織細(xì)胞的供能

5.試述乳酸如何完全氧化分解?（思路）

答：乳酸（胞漿，脫氫，NADHH+)→丙酮酸（氧化脫羧）→乙酰CoA→→→三羧酸循環(huán)，氧化磷酸化→得17或18個(gè)ATP。6.草酰乙酸可由哪些化合物轉(zhuǎn)變生成？

答：草酰乙酸的來源：（1）蘋果酸的脫氫；（2）丙酮酸的羧化；（3）天門冬氨酸的脫羧；（4）檸檬酸的裂解。

7.核糖，NADPHH+是什么代謝產(chǎn)生的？其生理作用是什么？答：核糖，NADPHH+是磷酸戊糖途徑產(chǎn)生的答：生理作用：

（1）NADPHH+作用：作為供氫體參與多種代謝反應(yīng)：（1）NADPH+H+是體內(nèi)大量合成代謝的供氫體；（2）NADPH+參與體內(nèi)羥化反應(yīng)；（3）NADPH+用于維持谷胱甘肽的還原態(tài)；（4）NADPH+參與體內(nèi)加單氧酶反應(yīng)。

（2）核糖作用：參與核苷酸的合成。

8.葡萄糖的活性形式是什么？糖原合成的途徑有哪些？

答：葡萄糖的活性形式是：尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）答：（1）糖原合成途徑：葡萄糖→6-磷酸葡萄糖-1→1-磷酸葡萄糖→UDPG→→糖原（2）三碳途徑（間接途徑，餐后）：同前。

9.試述琥珀酸怎樣異生為葡萄糖的反應(yīng)過程與關(guān)鍵酶、肌糖原為什么不直接分解成葡萄糖

答：琥珀酸（FDA）→延胡索酸（+水）→蘋果酸（蘋果酸脫氫酶）→草酰乙酸（磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶）→磷酸烯醇式丙酮酸→2-磷酸甘油酸→3-磷酸甘油酸+ATP→1，3-二磷酸甘油酸→3-磷酸甘油醛→1，6-雙磷酸果糖（果糖雙磷酸酶-1）→6-磷酸果糖（磷酸已糖異構(gòu)酶）→6-磷酸葡萄糖（葡萄糖-6-磷酸酶）→葡萄糖。

答：關(guān)鍵酶：肌肉中無葡萄糖-6-磷酸酶，故不能直接分解肌糖原生成葡萄糖10.正常人空腹血糖濃度是多少？

答：正常人空腹血糖濃度是3.89-6.11mmol/l11.血糖有哪些來源與去路？來源去路

外源性

食物糖消化吸收

進(jìn)入組織細(xì)胞氧化分解CO2、水內(nèi)源性

肝糖原分解

合成糖原肝、肌糖原

非糖物質(zhì)糖異生

合成非糖物質(zhì)如脂類，氨基酸代謝合成其他糖類物質(zhì)如核糖

12．總結(jié)G-6-P的代謝方向、終產(chǎn)物，促使其轉(zhuǎn)變的主要酶是什么G-6-P的代謝方向使其轉(zhuǎn)變的酶代謝方向終產(chǎn)物

磷酸已糖異構(gòu)酶糖酵解乳酸

有氧氧化CO2、水

6-磷酸葡萄糖脫氫酶磷酸戊糖途徑磷酸戊糖、NADPH葡萄糖磷酸變位酶糖原合成糖原糖原分解葡萄糖葡萄糖-6-磷酸酶糖異生葡萄糖

一.名詞解釋

1.脂肪動(dòng)員：儲(chǔ)存在脂肪細(xì)胞中的脂肪，被脂肪酶逐步水解為游離脂肪酸（FFA）及甘油釋放入血以供其他組織氧化利用的過程。

2.酮體：乙酰乙酸、β－羥丁酸及a-丙酮三者稱為酮體。

二.問答題

1.試述血漿脂蛋白分類和其生理功能？載脂蛋白的主要作用是什么？分類

乳糜微粒(CM)

極低密度脂蛋白(VLDL)低密度脂蛋白(LDL)高密度脂蛋白(HDL)生理功能

轉(zhuǎn)運(yùn)外源性甘油三脂及膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性甘油三脂及膽固醇把肝內(nèi)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝外把肝外膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至肝內(nèi)

答:載脂蛋白的主要作用:①運(yùn)載脂類；②作為脂蛋白酶的激活劑和抑制劑；③受體的配基。2.試述甘油的來源，完全氧化和糖異生的過程？

答:甘油的來源:磷酸二羥丙糖的還原或脂肪的水解。答:完全氧化過程:甘油→3-磷酸甘油（-ATP，活化）→3-磷酸甘油醛（胞漿，NADH）→1，3-二磷酸甘油酸（胞漿，NADH）→3-磷酸甘油酸（得到ATP）→2-磷酸甘油酸→磷酸烯醇式丙酮酸→丙酮酸（得到ATP）→乙酰輔酶A→TAC（12）→凈得ATP:20~22個(gè)。-1+6+1+1+3+12

答:糖異生過程:甘油→3-磷酸甘油（-ATP，活化）→磷酸二羥丙酮（胞漿，-NADH）→3―磷酸甘油醛→1,6-雙磷酸果糖→6-磷酸果糖→6-磷酸葡萄糖→葡萄糖

3.試述脂肪酸怎樣完全氧化？β-氧化反應(yīng)包括四步反應(yīng)，每次β-氧化的產(chǎn)物是什么？答:完全氧化過程：①脂肪酸的活化,生成脂酰CoA，-2ATP；②肉毒堿運(yùn)脂?；M(jìn)入線粒體；③脂酰CoA.的β氧化生成：（乙酰CoA）n,（FADH2）n,（NADH）n；④后者，經(jīng)三羧酸進(jìn)一步氧化和氧化磷酸化關(guān)聯(lián)完全氧化。

答:β-氧化四步:（1）脫氫、（2）加水、（3）再脫氫、（4）硫解

每次β-氧化生成一分子乙酰CoA和少兩個(gè)碳原子的脂酰CoA以及各一分子FADH2,NADH,得到17ATP。

4.10碳的脂肪酸完全氧化凈得多少ATP？

答:78個(gè)ATP。

5.試述酮體合成與分解的部位、關(guān)鍵酶是什么?

答:酮體合成場(chǎng)所:肝細(xì)胞(線粒體)；關(guān)鍵酶:HMGCoA合成酶

酮體分解:肝外組織(心.腎.腦.骨骼肌等)線粒體；關(guān)鍵酶：:琥珀酰CoA轉(zhuǎn)硫酶，乙酰乙酸硫激酶。6.脂肪酸合成的原料有哪些及來源途徑？其關(guān)鍵酶是什么？其活性怎樣被變構(gòu)調(diào)理？答:脂肪酸的合成：（1）原料：

①碳源：乙酰CoA；來源途徑：葡萄糖的有氧氧化，經(jīng)蘋果酸-檸檬酸循環(huán)從線粒體進(jìn)入胞漿。②氫源：NADPH；來源途徑：磷酸戊糖途徑或胞液中蘋果酸酶催化的反應(yīng)。（2）關(guān)鍵酶：乙酰CoA羧化酶。

（3）脂肪酸合成的調(diào)理：

①代謝物對(duì)關(guān)鍵酶的調(diào)理作用：抑制劑：脂酰CoA；激活劑：檸檬酸、異檸檬酸；

②激素對(duì)關(guān)鍵酶的調(diào)理：a.胰島素通過加強(qiáng)脂肪組織活性,促使脂肪酸進(jìn)入脂肪組織，還加速合成脂肪；b.胰高血糖素通過加強(qiáng)PKA活性使抑制乙酰CoA羧化酶磷酸化而降低活性；抑制TG的合成；減少肝臟脂肪向血液釋放。

7.磷脂合成中小分子含氮堿基的活化形式是什么？答:CDP-膽堿、CD-乙醇胺（膽胺）

8.膽固醇合成的原料有哪些來源途徑？膽固醇合成的關(guān)鍵酶是什么？膽固醇能轉(zhuǎn)化成哪些重要化合物？答:原料:碳源、氫源同脂肪酸的合成外，需要消耗ATP：其大部分來自線粒體內(nèi)糖的有氧氧化。關(guān)鍵酶：HMGCoA還原酶

答:膽固醇轉(zhuǎn)化:①膽汁酸；②類固醇激素；③7-脫氫膽固醇→VD39.試述乙酰CoA的來源與去路。答:來源

去路

①G的氧化分解中丙酮酸氧化分解①進(jìn)入TAC氧化分解②FFA的β氧化②合成FFA

③肝外酮體氧化③合成膽固醇

④氨基酸脫氨后產(chǎn)生的α-酮酸氧化分解④肝內(nèi)合成酮體

⑤HMGCoA、檸檬酸的裂解⑤參與生物氧化(結(jié)合劑)

一.名詞解釋

1.生物氧化：有機(jī)物在體內(nèi)經(jīng)過一系列氧化分解，最終生成CO2和H2O，并逐步釋放能量的過程，稱為生物氧化。

2.呼吸鏈：從代謝物上把脫下的成對(duì)氫原子通過有序排列的多種酶和輔酶所催化的連鎖反應(yīng)逐步傳遞最終與氧結(jié)合生成水,并逐步釋放能量的電子傳遞鏈。

3.底物水平磷酸化：一種直接將代謝物分子中因脫氫、脫水分子內(nèi)部重新分布形成高能化合物，再將其高能鍵轉(zhuǎn)移至ADP（或GDP），生成ATP（或GTP）的過程。4.氧化磷酸化：在呼吸鏈電子傳遞過程中釋放的能量偶聯(lián)ADP磷酸化，生成ATP的過程。二.問答題

1.生物氧化有哪些特點(diǎn)？

答:（1）CO2的生成：有機(jī)酸脫羧

（2）H2O的生成：AH2→2H→呼吸鏈+1/2O2→H2O

（3）能量釋放方式：逐步釋放；能量轉(zhuǎn)化形式：化學(xué)能（高能鍵）（4）反應(yīng)條件：近中性體液；酶催化。2.呼吸鏈中遞氫體，遞電子體有哪些？

答:遞氫體：NAD+、NADP+；FMN、FAD；輔酶Q遞電子體：Fe-S、鐵卟啉

3.NADH氧化呼吸鏈，琥珀酸氧化呼吸鏈如何組成，有何區(qū)別？

答:（1）NADH氧化呼吸鏈特點(diǎn)：①I、III、IV復(fù)合物；②第一受氫體NAD+；③3ATP/2H（2）琥珀酸氧化呼吸鏈特點(diǎn)：①II、III、IV復(fù)合物；②第一受氫體FAD；③2ATP/2H4.胞漿中一個(gè)NADHH+怎樣氧化磷酸化，經(jīng)P/0比值測(cè)定可產(chǎn)生多少ATP？

答:胞漿中一個(gè)NADHH+不能自由透過線粒體內(nèi)膜，故線粒體外NADH所攜帶的氫必需某種轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制才能進(jìn)入線粒體，這種機(jī)制有：（1）α-磷酸甘油穿梭：

磷酸二羥丙酮經(jīng)NADHH+胞漿中α-磷酸甘油脫氫酶還原→α-磷酸甘油穿梭經(jīng)線粒體內(nèi)膜進(jìn)入線粒體→受到線粒體中α-磷酸甘油脫氫酶脫氫生成磷酸二羥丙酮+FADH2；

FADH2進(jìn)入琥珀酸氧化呼吸鏈，生成2ATP。磷酸二羥丙酮再穿出線粒體內(nèi)膜，重新接受胞漿中NADHH+生成α-磷酸甘油。

（2）蘋果酸-天門冬氨酸穿梭：胞漿中天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨生成草酰乙酸，后者與經(jīng)NADHH+蘋果酸脫氫酶還原→蘋果酸→穿梭經(jīng)線粒體內(nèi)膜進(jìn)入線粒體→受到線粒體中蘋果酸脫氫酶脫氫生成草酰乙酸和NADHH+。NADH進(jìn)入NADH氧化呼吸鏈，產(chǎn)生3ATP。草酰乙酸再經(jīng)轉(zhuǎn)氨生成天門冬氨酸穿出線粒體內(nèi)膜→胞漿中天門冬氨酸再經(jīng)重新轉(zhuǎn)氨生成草酰乙酸→重新接受胞漿中NADHH+生成蘋果酸。5.直接供能和貯能的化合物是什么？

答:（1）直接供能：ATP；（2）貯能的化合物：ATP、磷酸肌酸。肌肉中最主要的貯能的化合物是磷酸肌酸。

6.體內(nèi)ATP的生成方式有哪些？答：體內(nèi)ATP的生成方式：底物水平磷酸化氧化磷酸化。7.氧化磷酸化ATP的產(chǎn)生部位，機(jī)理？氧化磷酸化抑制劑和呼吸鏈的抑制劑的阻斷部位？答：ATP產(chǎn)生部位：NADH與Q之間；Cytb與Cytc之間；Cytaa3與O2之間（通過測(cè)各部位P/O比值或自由能變化來確定偶聯(lián)部位）。機(jī)理：化學(xué)滲透學(xué)說。答：類型種類抑制部位呼吸鏈抑制劑

①魚藤酮、粉蝶霉素A及異戊巴比妥等復(fù)合體I即NADH→FMN②抗霉素A、BAL等復(fù)合體III即Cytb與Cytc1③CO、CN-、N3-及H2S復(fù)合體Ⅳ即細(xì)胞色素C氧化酶氧化磷酸化抑制劑

寡霉素

對(duì)電子傳遞及ADP磷酸化均有抑制。

一.名詞解釋

1.一碳單位：某些氨基酸在分解代謝中可以產(chǎn)生含有一個(gè)碳原子的有機(jī)基因稱一碳單位。

2.轉(zhuǎn)氨基作用：在氨基轉(zhuǎn)移酶作用下，某一氨基酸的α-氨基轉(zhuǎn)移到另一種α-酮酸的酮基上，生成新的氨基酸，原來的氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)α-酮酸的過程。

3.必需氨基酸：體內(nèi)需要而又不能自身合成，必需由食物供應(yīng)的氨基酸。Lys、Trp、Phe、Met；Thr、Val、Leu、Ile八種，缺乏其中任何一種均可引起氮負(fù)平衡。

二.問答題

1.氮平衡有哪三種狀況，分別見于哪些人？

答：總平衡，即攝入氮等于排出氮，反映正常人的蛋白質(zhì)分解與合成代謝平衡。

正平衡，即攝入氮大于排出氮，部分?jǐn)z入的氮用于合成體內(nèi)蛋白質(zhì)。兒童、孕婦及恢復(fù)期病人屬此種狀況。

負(fù)平衡，即攝入氮小于排出氮。見于蛋白質(zhì)需要量不足，例如饑餓或消耗性疾病患者。

2.體內(nèi)氨基酸一般分解代謝方式有哪些？最終代謝產(chǎn)物是什么？答：（1）脫氨基作用：NH3→在肝臟轉(zhuǎn)化為尿素排泄；α-酮酸→生糖，酮體；氨基化生成非必需氨基酸；氧化供能→CO2、H2O、ATP。

（2）脫羧基作用：CO2；胺：大多為生物活性物質(zhì)→肝內(nèi)胺氧化酶分解生成NH3+醛，NH3→留在肝臟合成尿素；醛經(jīng)非線粒體氧化體系→CO2、H2O。

答：尿素、CO2、H2O

3.體內(nèi)氨基酸脫氨基常見的方式有哪些？肌肉內(nèi)氨基酸分解的方式是什么？

答：有氧化脫氨基、轉(zhuǎn)氨基、聯(lián)合脫氨基、非氧化脫氨基，最重要的是聯(lián)合脫氨基作用。肌肉內(nèi)主要是嘌呤核苷酸循環(huán)即聯(lián)合脫氨基作用。

4.氨的去路有哪些？腦（肝）中氨的主要代謝方向是什么？

答：氨的去路：（1）肝臟合成無毒尿素后，經(jīng)腎臟排出體外。占80%~90%；（2）腦和肌肉中合成谷氨酰胺；（3）合成某些含氮化合物，如嘌呤、嘧啶、非必需氨基酸；（4）經(jīng)腎臟中和酸后，以NH4+排出體外。腦中氨的主要代謝方向：合成谷氨酰胺。肝中氨的主要代謝方向：合成尿素。

5.氨的運(yùn)輸方式有哪些？答：（1）丙氨酸-葡萄糖循環(huán)；（2）谷氨酰胺。

6.尿素合成的原料有哪些，合成的途徑是什么？該過程中出現(xiàn)了哪些重要的氨基酸？答：原料：CO2、2NH3（Asp）、3ATP途徑：鳥氨酸循環(huán)。

該途徑中出現(xiàn)的重要氨基酸：瓜氨酸、鳥氨酸、精氨酸。7.α-酮酸有哪些代謝去路？答：（1）經(jīng)氨基化生成非必需氨基酸；（2）轉(zhuǎn)變?yōu)樘羌爸?；?）氧化供能8.氨基酸脫羧有哪些重要的脫羧產(chǎn)物產(chǎn)生？它們有何作用？

答：（1）γ-氨基丁酸：谷氨酸脫羧而來，抑制神經(jīng)遞質(zhì)，對(duì)中樞神經(jīng)有抑制作用。（2）?；撬幔喊腚装彼崦擊榷鴣?，是結(jié)合膽汁酸組成部分。

（3）組胺：組氨酸脫羧而來，是猛烈的血管擴(kuò)張劑，可增加血管通透性；刺激胃蛋白酶及胃酸的分泌；使平滑肌收縮如引起哮喘。

（4）5-羥色胺：色氨酸脫羧而來，對(duì)中樞有抑制性作用，外周有縮血管作用。（5）多胺：鳥氨酸脫羧形成的腐胺，調(diào)理細(xì)胞生長(zhǎng)的重要物質(zhì)。9.活性甲基是什么？它有何作用？

答：是S-腺苷甲硫氨酸中的甲基。作用：可在甲基轉(zhuǎn)移酶作用下，將甲基轉(zhuǎn)移至另一種物質(zhì)使其甲基化，它是甲基的直接供體。

10.試述一碳單位有哪些？其來源、作用是什么？其載體是什么？答：一碳單位：甲基（-CH3），來源于甲硫氨酸的代謝；甲烯基（-CH2-），亞氨甲基（-CH=NH），來源于絲氨酸的代謝；甲酰基（-CHO），來源于甘（色）氨酸的代謝。作用：作為合成嘌呤及嘧啶的原料；間接參與物質(zhì)甲基化。

載體：四氫葉酸。

11.半胱氨酸、酪氨酸可產(chǎn)生哪些生理活性物質(zhì)？

答：半胱氨酸可轉(zhuǎn)變?yōu)榕；撬幔?-磷酸腺苷-5-磷酸硫酸（PAPS）。答：酪氨酸生成兒茶酚胺、黑色素、甲狀腺素。

12.試述天冬氨酸怎樣完全分解為終產(chǎn)物的過程？答：（1）天冬氨酸通過聯(lián)合脫氨基作用生成NH3和草酰乙酸；（2）NH3經(jīng)血液運(yùn)輸后通過丙氨酸-葡萄糖循環(huán)及谷氨酰胺的運(yùn)氨作用在肝臟中，經(jīng)鳥氨酸循環(huán)生成尿素。（3）草酰乙酸β單純脫羧生成丙酮酸，丙酮酸再經(jīng)α氧化脫羧生成乙酰CoA后，進(jìn)入三羧酸循環(huán)，最終生成水，二氧化碳和能量。13.Glu與哪些生化反應(yīng)有關(guān)？

答：分解代謝：（1）脫氨基生成α-酮戊二酸，進(jìn)入三羧酸循環(huán)，最終生成水，二氧化碳和能量；（2）脫羧生成γ-氨基丁酸；（3）脫氫生成α-亞氨基戊二酸，再自發(fā)性水解生成α-酮戊二酸和氨合成代謝：（1）參與蛋白質(zhì)合成；（2）氨基化生成谷氨酰胺；（3）乙?；梢阴９劝彼?；（4）脫氨基生成α-酮戊二酸，再經(jīng)糖異生生成葡萄糖；（5）參與合成谷胱甘肽。一.問答題

1.呤堿、嘧啶堿分解的終產(chǎn)物與疾病有何關(guān)系？

答：嘌呤堿分解終產(chǎn)物是尿酸，當(dāng)血中尿酸濃度過高時(shí)，成人可表現(xiàn)為痛風(fēng)癥，兒童表現(xiàn)為自毀容貌綜合癥。

嘧啶堿分解的終產(chǎn)物是CO2、NH3和β-氨基酸。2.核苷酸的合成有何途徑？戊糖的活性形式？

答：有從頭合成和補(bǔ)救合成兩條途徑。從頭合成途徑是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及CO2等簡(jiǎn)單物質(zhì)為原料，經(jīng)過一系列酶促反應(yīng)，合成核苷酸。補(bǔ)救合成是指利用體內(nèi)游離的堿基或核苷，經(jīng)過簡(jiǎn)單的反應(yīng)過程合成核苷酸。

戊糖的活性形式是磷酸核糖焦磷酸(PRPP)。

3.哪些小分子物質(zhì)參與嘌呤、嘧啶核苷酸的合成？

答：參與合成嘌呤核苷酸的小分子物質(zhì)有：磷酸核糖、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、CO2和一碳單位。參與合成嘧啶核苷酸的小分子物質(zhì)有：磷酸核糖、天冬氨酸、谷氨酰胺、CO2和一碳單位。4.氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ、Ⅱ的區(qū)別點(diǎn)。答：

氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ分布

線粒體（肝）胞液（所有細(xì)胞）氮源氨

谷氨酰胺變構(gòu)激活劑N-乙酰谷氨酸-反饋抑制劑-UMP（哺乳動(dòng)物）功能尿素合成嘧啶合成意義

反映細(xì)胞分化程度

與細(xì)胞增殖有關(guān)

5.脫氧核糖核苷酸生成時(shí)的核糖核苷酸還原水平？答：在二磷酸核苷（NDP）水平上還原6.核苷酸的生理功能有哪些？

答：①作為核酸合成原料；②體內(nèi)能量的利用形式（ATP是細(xì)胞的主要能量形式）；③參與代謝和生理調(diào)理（cAMP，cGMP作為其次信使）；④組成輔酶；

⑤活化中間代謝產(chǎn)物。一.名詞解釋

1.關(guān)鍵酶：調(diào)理代謝的酶，其活性決定了代謝的速度和方向的酶，催化單向反應(yīng)或非平衡反應(yīng)，受底物，多種代謝產(chǎn)物或效應(yīng)劑調(diào)理，大多為變構(gòu)酶。

2.變構(gòu)調(diào)理：小分子化合物與酶蛋白分子活性中心以外的某一部位特異結(jié)合，引起酶蛋白分子構(gòu)象改變，從而改變酶的活性。這種調(diào)理稱為酶的變構(gòu)調(diào)理。二.問答題

1.代謝調(diào)理的水平有哪些？

答：細(xì)胞水平，激素水平，整體水平

2.關(guān)鍵酶作用特點(diǎn)？答：（1）有的催化反應(yīng)速度慢，其活性決定整個(gè)代謝途徑的速度,起限速作用；（2）這類酶催化單向反應(yīng)或非平衡反應(yīng)，決定整個(gè)方向；（3）位置往往處于代謝途徑起點(diǎn)或分支處；（4）這類酶大多為變構(gòu)酶；

（5）這類酶受多種代謝物或底物的調(diào)理。3.變構(gòu)調(diào)理機(jī)理有哪些？

答：（1）變構(gòu)酶組成（多亞基）調(diào)理/催化亞基；

(2)變構(gòu)效應(yīng)劑:底物,終產(chǎn)物,其他小分子代謝物；(3)變構(gòu)酶動(dòng)力學(xué)曲線:S型；

(4)調(diào)理機(jī)制：疏松、緊湊、亞基聚合、亞基解聚、酶分子多聚化；(5)有正負(fù)協(xié)同效應(yīng)。

4.酶促化學(xué)修飾調(diào)理特點(diǎn)有哪些?

答:（1）酶蛋白共價(jià)修飾是可逆的酶促反應(yīng),在上級(jí)酶的作用下酶蛋白活性狀態(tài)可相互轉(zhuǎn)變；（2）催化互變反應(yīng)的酶在體內(nèi)可受調(diào)理因素如激素的調(diào)控；（3）有放大效應(yīng).效率較變構(gòu)調(diào)理高；

（4）磷酸化與脫磷酸化是最常見的方式；

5.腎上腺素是如何通過細(xì)胞,激素水平的調(diào)理機(jī)制來調(diào)理肝糖原分解代謝?答:（1）腎上腺素和膜受體結(jié)合形成受體復(fù)合物；（2）該復(fù)合物激活G蛋白；

（3）活化的G蛋白激活腺苷酸環(huán)化酶，使后者催化ATP轉(zhuǎn)化為環(huán)化腺苷酸；

（4）cAMP激活蛋白激酶A，蛋白激酶A催化糖原合成酶磷酸化使其被抑制；催化磷酸化酶b激酶磷酸化使其被活化,磷酸化酶b激酶再催化磷酸化酶b磷酸化轉(zhuǎn)化為磷酸化酶a,磷酸化酶a可催化糖原分解，最終轉(zhuǎn)化為葡萄糖。一.名詞解釋

1.半保存復(fù)制：DNA復(fù)制時(shí),親代DNA的兩條脫氧多核苷酸鏈之間的氫鍵斷裂,兩條鏈均可作為模板，各自合成出互補(bǔ)鏈，結(jié)果兩個(gè)子代DNA分別包含一條親代DNA和一條新合成鏈,?各自構(gòu)成新的雙螺旋分子。2.岡崎片段：指DNA復(fù)制過程中所合成的不連續(xù)DNA片段即隨從鏈。3.逆轉(zhuǎn)錄：以RNA為模板合成DNA的過程。

二.問答題

1.有哪些酶和蛋白質(zhì)因子參與DNA復(fù)制？它們有什么作用？

答：（1）DnaA蛋白：鑒別復(fù)制起始點(diǎn)。（2）DnaB蛋白（解螺旋酶、解鏈酶）：催化DNA雙鏈中氫鍵斷裂形成復(fù)制叉（模板單鏈）。

（3）單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)：大量的SSB結(jié)合到單鏈DNA上,阻止互補(bǔ)單鏈DNA的結(jié)合，并保護(hù)DNA不被核酸酶水解。

（4）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ和Ⅱ：復(fù)制時(shí),松弛雙股超螺旋,對(duì)DNA分子兼有內(nèi)切酶和連接酶的作用。（5）DnaG蛋白（引物酶）：以單鏈DNA為模板,合成出一段互補(bǔ)的RNA片段,作為合成DNA的引物，為DNA的合成提供3'-OH。

（6）DNA聚合酶：以單鏈DNA為模板,沿著5'→3'方向合成出互補(bǔ)的新鏈DNA。原核生物細(xì)胞中有三種DNA聚合酶,命名為：polⅠ、polⅡ、polⅢ。其中polⅢ是參與復(fù)制的主要酶。polⅠ對(duì)復(fù)制中起修復(fù)作用。真核細(xì)胞中有五種DNA聚合酶,命名為：α（起始引發(fā)）、β（低保真度的復(fù)制）、γ（線粒體DNA的復(fù)制）、δ（延長(zhǎng)子鏈的主要酶，解螺旋酶活性）、ε（填補(bǔ)引物空隙，切除修復(fù)，重組）。

（7）DNA連接酶：連接一條單鏈DNA的3'-OH末端與另一條單鏈DNA的5'-P末端,形成磷酸二酯鍵,從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成為完整的鏈。

2.真核生物DNA復(fù)制有哪些特點(diǎn)？端粒酶作用是什么？

答：真核生物復(fù)制發(fā)生于細(xì)胞周期的S期，起始過程需要DNApolδ和α，及多種蛋白質(zhì)因子。復(fù)制有時(shí)序性。細(xì)胞周期蛋白及其相應(yīng)的激酶（CDK）參與真核生物復(fù)制的調(diào)理。復(fù)制的延長(zhǎng)和核小體組蛋白的分開和重新組裝有關(guān)。染色體復(fù)制為維持應(yīng)有的長(zhǎng)度，復(fù)制的終止需要端粒酶延伸端粒DNA。D環(huán)復(fù)制是真核生物線粒體DNA的復(fù)制方式。

端粒酶通過一種稱為爬行模型的機(jī)制維持染色體的完整。有提供RNA模板和催化逆轉(zhuǎn)錄的功能，在研究老化、基因突變、腫瘤等方面也有作用。

3.DNA兩條鏈的復(fù)制有何不同？

答：DNA雙螺旋的兩股單鏈走向相反，一條鏈為5'→3'方向，其互補(bǔ)鏈?zhǔn)?'→5'方向。

復(fù)制解鏈形成復(fù)制叉上只有一個(gè)解鏈方向，子鏈沿著母鏈模板復(fù)制，只能從5'→3'延伸，故使得子鏈合成過程為半不連續(xù)性復(fù)制。子代鏈領(lǐng)頭鏈隨從鏈

模板3'→5'5'→3'

解鏈方向與子代鏈合成方向順，一致反

子鏈合成方向5'→3'復(fù)制過程連續(xù)不連續(xù)

4.DNA損傷有哪些修復(fù)方式？答：（1）光修復(fù)：在可見光的照射下,細(xì)胞中光修復(fù)酶被激活,分解因紫外線照射而引起的嘧啶二聚體之間共價(jià)鍵,使嘧啶二聚體恢復(fù)為兩個(gè)核苷酸。

（2）切除修復(fù)：第一步,通過特異的核酸內(nèi)切酶識(shí)別DNA的損傷部位,并將該處DNA單鏈片段切除,留下一個(gè)缺口；其次步,以另一個(gè)完整的DNA單鏈為模板,在DNA聚合酶Ⅰ催化下,按5'→3'方向合成出缺口處DNA；第三步,DNA連接酶將新合成的DNA片段與原來的DNA相連接。

（3）重組修復(fù)：當(dāng)DNA分子的損傷面較大,在復(fù)制時(shí),損傷部位因無模板指導(dǎo),復(fù)制出的DNA新鏈會(huì)出現(xiàn)缺口,這時(shí),由重組蛋白R(shí)ecA進(jìn)行鏈間的交換：切健康母鏈，填補(bǔ)該子鏈缺口，然后DNA-polI、DNA連接酶將健康母鏈的缺口修復(fù)。

4）SOS修復(fù)：DNA損傷廣泛至難以繼續(xù)復(fù)制而誘發(fā)出一系列繁雜反應(yīng)。5.怎樣進(jìn)行DNA核苷酸切除修復(fù)？答：（1）UvrABC核酸酶切下含有損傷部位的一段DNA片段（約12Nt）（2）DNApolⅠ填補(bǔ)缺口（3）連接酶封閉切口

一.名詞解釋

1.核心酶：由α2ββ′亞基組成，催化NTP按模板的指引合成RNA。二.問答題

1.參與轉(zhuǎn)錄的主要物質(zhì)，其作用是什么？答：⑴原料：NTP模板；⑵模板：DNA模板鏈⑶RNA聚合酶：①原核生物存在形式全酶核心酶分子組成α2ββ′ζα2ββ′分子作用起始：全酶

延長(zhǎng)：合成RNA組分作用α

決定那些基因被轉(zhuǎn)錄β

與轉(zhuǎn)錄全過程有關(guān)（催化）β′

結(jié)合DNA模版（解鏈）ζ

鑒別轉(zhuǎn)錄的起始點(diǎn)②真核生物種類

RNApolⅠRNApolⅡRNApolⅢ轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物45s-rRNAhnRNA

5srRNA,tRNA,snRNA對(duì)鵝膏蕈堿的反應(yīng)耐受極敏感

中度敏感分布核仁核質(zhì)

核質(zhì)

⑷ρ因子（原核生物）：輔助RNA聚合酶識(shí)別終止子(不典型)。⑸轉(zhuǎn)錄因子（真核生物）：結(jié)合RNA聚合酶，調(diào)控轉(zhuǎn)錄。2.轉(zhuǎn)錄與復(fù)制同異點(diǎn)？

答：共同點(diǎn)：

⑴模板：DNA；⑵合成方向：5′→3′；⑶連接鍵：3′，5′磷酸二酯鍵；⑷遵從堿基配對(duì)規(guī)律；⑸依靠聚合酶（DNA指導(dǎo)）；⑹產(chǎn)物：多核苷酸鏈。答：不同點(diǎn)：轉(zhuǎn)錄復(fù)制⑴模板

模板鏈（單鏈局部）兩條鏈全程⑵合成方式

不對(duì)稱、選擇性半保存復(fù)制（對(duì)稱）⑶原料NTPdNTP⑷堿基配對(duì)A-UA-T⑸聚合酶RNA聚合酶DNA聚合酶

⑹引物⑺產(chǎn)物

m(t、r)RNA等（單鏈）2子代DNA（雙鏈）

3.原核生物轉(zhuǎn)錄終止方式有哪些？

答：轉(zhuǎn)錄終止方式依靠是否需要蛋白質(zhì)因子的參與可分為兩大類：a.非依靠Rho的轉(zhuǎn)錄終止；b.依靠Rho的轉(zhuǎn)錄終止。一.名詞解釋

1.遺傳密碼：mRNA分子上從5＇至3＇方向，由AUG開始，每3個(gè)核苷酸為一組，決定肽鏈上某一個(gè)氨基酸或蛋白質(zhì)合成的起始、終止信號(hào)，稱為遺傳密碼（三聯(lián)體密碼）。2.釋放因子：鑒別終止密碼，改變大亞基酶活性，釋放多肽鏈的蛋白質(zhì)因子。二.問答題

1.三種RNA在蛋白質(zhì)合成中的作用機(jī)理是什么？答：（1）mRNA：遺傳信息的攜帶者，作為蛋白質(zhì)合成的直接模板。mRNA上存在遺傳密碼。

遺傳密碼種類：43（四種核苷酸）=64遺傳密碼

遺傳密碼作用：①表達(dá)編碼氨基酸信息的密碼：61個(gè)（起始密碼，AUG），以堿基配對(duì)的方式識(shí)別tRNA中的反遺傳密碼；②不表達(dá)氨基酸信息的密碼：3個(gè)（UAA、UAG、UGA）。遺傳密碼特點(diǎn)*：①方向性、②連續(xù)性、③簡(jiǎn)并性、④通用性、⑤搖擺性。

（2）tRNA：由3′-CCA以酯鍵結(jié)合氨基酸，并通過不穩(wěn)定性配對(duì)識(shí)別遺傳密碼，使氨基酸按mRNA信息指導(dǎo)“對(duì)號(hào)入坐〞。

（3）rRNA：與多種蛋白質(zhì)構(gòu)成核糖體RNA，作為合成多肽鏈的場(chǎng)所。小亞基中16srRNA與5′mRNASD序列（AUG附近）結(jié)合；

大亞基的P位（給位）在起始階段進(jìn)入起始氨基酰tRNA；延長(zhǎng)階段由肽酰tRNA占據(jù)，A位（受位）接受新的氨基酰tRNA，大亞基在延長(zhǎng)階段有轉(zhuǎn)肽酶作用，能將P位（給位）進(jìn)入起始氨基酰tRNA或肽酰tRNA中的氨基酰基或肽?；cA位（受位）接受新的氨基酰tRNA形成肽鍵，使肽鏈延長(zhǎng)；大亞基在終止階段有水解酶作用，水解肽酰tRNA中多肽鏈。大亞基的E位（exitsite排出位）：排出空載tRNA。

2.反密碼3＇CGI5＇與密碼5＇—3＇的堿基怎樣進(jìn)行不穩(wěn)定的配對(duì)？

答：按從5＇→3＇的閱讀規(guī)則，反密碼第一位I可與密碼第三位U、C、A配對(duì)，所以3＇CGI5＇可與密碼5＇GCU3＇、5＇GCC3＇、5＇GCA3＇配對(duì)。3.簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)的生物合成的過程,蛋白因子（原核）的作用？答：（1）肽鏈合成起始：小亞基的16srRNA與5′mRNASD序列結(jié)合后，起始氨基酰-tRNA與mRNA起始AUG密碼配對(duì)再與大亞基結(jié)合，而形成翻譯起始復(fù)合物的過程。

（2）肽鏈的延長(zhǎng)：根據(jù)mRNA密碼序列的指導(dǎo)，依次添加氨基酸從N端向C端延伸肽鏈，直到合成終止的過程。每次循環(huán)分進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位三步。

（3）肽鏈合成的終止：當(dāng)核蛋白體A位出現(xiàn)mRNA的終止密碼后，多肽鏈合成中止，肽鏈從肽酰-tRNA中釋出，mRNA、核蛋白體大、小亞基等分開的過程。答：

原核生物蛋白因子作用起始因子生物功能

IF-1

占據(jù)A位防止結(jié)合其他tRNAIF-2

促進(jìn)起始tRNA與小亞基結(jié)合

IF-3

促進(jìn)大小亞基分開，提高P位對(duì)結(jié)合起始tRNA敏感性延長(zhǎng)因子

EF-Tu

促進(jìn)氨基酰-tRNA進(jìn)入A位，結(jié)合分開GTPEF-Ts

調(diào)理亞基

EFG

有轉(zhuǎn)位酶活性，促進(jìn)mRNA-肽酰-tRNA由A位EF-2前移到P位，促進(jìn)卸載tRNA釋放釋放因子

RF-1

特異識(shí)別A位中的UAA、UAG終止密碼，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)肽酶改變?yōu)轷ッ富钚訰F-2

特異識(shí)別A位中的UAA、UGA終止密碼，同上。RF-3

有GTP酶活性，能介導(dǎo)RF-1、RF-2與核蛋白體作用。

4.蛋白質(zhì)生物合成中大亞基有哪些酶作用？答:轉(zhuǎn)肽酶和水解酶的功能。

一.名詞解釋

1.基因表達(dá)：基因轉(zhuǎn)錄和翻譯的過程，其產(chǎn)物為RNA或蛋白質(zhì)。

2.管家基因：在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因表達(dá)量恒定，不受環(huán)境因素影響。3.啟動(dòng)子：是操縱子調(diào)控序列中RNA聚合酶結(jié)合模板DNA的部位，也是控制轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵部位。4.加強(qiáng)子：指遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)、決定基因的時(shí)間、空間特異性、加強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的DNA序列。5.操縱子：轉(zhuǎn)錄是不連續(xù)分區(qū)段進(jìn)行的，每一轉(zhuǎn)錄區(qū)段可視為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，稱為操縱子。它包括若干個(gè)結(jié)構(gòu)基因及其上游的調(diào)控序列。6.反義RNA：含有與特定mRNA翻譯起始部位互補(bǔ)的序列,通過與mRNA雜交阻斷30S小亞基對(duì)起始密碼子的識(shí)別及與SD序列的結(jié)合，抑制翻譯起始。二.問答題

1.基因表達(dá)的方式，基因轉(zhuǎn)錄激活調(diào)理基本要素分別有哪些？答：方式：基本表達(dá)；誘導(dǎo)和阻遏。

基本要素：特異DNA序列；調(diào)理蛋白；RNA聚合酶。

2.加強(qiáng)子的特點(diǎn)有哪些？答：（1）由若干功能組件是特異性轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合DNA的核心序列；

（2）其作用與啟動(dòng)子相互依靠，但對(duì)啟動(dòng)子無嚴(yán)格專一性，無加強(qiáng)子存在啟動(dòng)子尋常不表現(xiàn)活性，無啟動(dòng)子時(shí)加強(qiáng)子也無法發(fā)揮作用，同一加強(qiáng)子可影響不同的啟動(dòng)子甚至原核啟動(dòng)子；（3）作用無方向性、特異性；

（4）對(duì)啟動(dòng)子遠(yuǎn)距離發(fā)揮影響，且必需先被蛋白質(zhì)因子結(jié)合后，才發(fā)揮加強(qiáng)轉(zhuǎn)錄子作用。3.轉(zhuǎn)錄調(diào)理因子的結(jié)構(gòu)與模體種類？

答：結(jié)構(gòu)：DNA結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄激活域，有的還含有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合域（常見的是二聚化結(jié)構(gòu)域）。答：種類：α-螺旋-轉(zhuǎn)角-α-螺旋、亮氨酸拉鏈、鋅指結(jié)構(gòu)等。

4.解釋乳糖操縱子調(diào)理機(jī)制，原核生物啟動(dòng)子元件有哪些保守序列？其堿基序列組成？該類序列起何作用？

答：乳糖操縱子調(diào)理機(jī)制：阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)理、CAP的正性調(diào)理、協(xié)調(diào)調(diào)理（1）阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)理

①條件：?jiǎn)渭內(nèi)樘遣淮嬖凇?fù)性調(diào)理：結(jié)構(gòu)基因表達(dá)抑制

阻遏蛋白+O基因→抑制位于P基因上的RNA聚合酶向結(jié)構(gòu)基因方向移動(dòng)。②條件：?jiǎn)渭內(nèi)樘谴嬖凇獬?fù)性調(diào)理：結(jié)構(gòu)基因表達(dá)

阻遏蛋白+別乳糖→復(fù)合物→阻遏蛋白失活，離開O基因→位于P基因上的RNA聚合酶向結(jié)構(gòu)基因方向移動(dòng)→結(jié)構(gòu)基因表達(dá)，產(chǎn)生能利用乳糖的酶。（2）CAP的正性調(diào)理

條件：?jiǎn)渭內(nèi)樘谴嬖凇哉{(diào)理：結(jié)構(gòu)基因表達(dá)

CAP（分解代謝物基因激活蛋白）+cAMP→復(fù)合物→激活P基因上的RNA聚合酶向結(jié)構(gòu)基因方向移動(dòng)→結(jié)構(gòu)基因表達(dá)，產(chǎn)生能利用乳糖的酶。（3）協(xié)調(diào)調(diào)理

①阻遏蛋白存在，CAP對(duì)系統(tǒng)不發(fā)揮作用

②無CAP：無阻遏蛋白與操縱序列結(jié)合，操縱序列仍無轉(zhuǎn)錄活性

③單純?nèi)樘谴嬖冢o葡萄糖），細(xì)菌用乳糖作碳源：乳糖誘導(dǎo)下，通過前述過程啟動(dòng)乳糖操縱子轉(zhuǎn)錄，合成三種利用乳糖的酶。

④有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共存，細(xì)菌首先利用葡萄糖

當(dāng)lac阻遏蛋白封閉轉(zhuǎn)錄時(shí)，CAP對(duì)該系統(tǒng)不能發(fā)揮作用；但假使沒有CAP存在來加強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性，即使阻遏蛋白從操縱序列上解聚仍無轉(zhuǎn)錄活性。答：

原核生物啟動(dòng)子元件的保守序列堿基序列組成-10區(qū)——TATA盒TATAAT-35區(qū)

TTGACA

答：作用：共有序列決定啟動(dòng)序列的轉(zhuǎn)錄活性大小。一.名詞解釋

1.DNA克隆：應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來源的遺傳物質(zhì)——同源的或異源的、原核的或真核的、自然的或人工的DNA與載體DNA結(jié)合成一具有自我復(fù)制能力的DNA分子——復(fù)制子，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，再進(jìn)行擴(kuò)增、提取獲得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又稱基因克隆、重組DNA或基因工程。

2.同源重組：發(fā)生在同源序列間的重組稱為同源重組，又稱基本重組。同源重組的發(fā)生依靠?jī)煞肿又g序列的一致或類似性。假使通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)獲得的外源DNA與宿主DNA同源，那么外源DNA就可以通過同源重組方式整合進(jìn)宿主染色體。

3.目的基因：感興趣的基因或DNA序列就是目的基因，又稱目的DNA。目的DNA有兩種類型，即cDNA和基因組DNA。

4.回文結(jié)構(gòu)：大部分Ⅱ類限制性核酸內(nèi)切酶，識(shí)別位點(diǎn)的核苷酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對(duì)稱，尋常稱這種特別的結(jié)構(gòu)順序?yàn)榛匚慕Y(jié)構(gòu)。二.問答題

1.試述自然界基因重組的方式。

答：基因重組包括同源重組、特異位點(diǎn)重組和轉(zhuǎn)座重組等類型。

（1）同源重組：作為最基本的DNA重組方式，同源重組是指發(fā)生在同源序列間的重組，它通過鏈的斷裂和再連接，在兩個(gè)DNA分子同源序列間進(jìn)行單鏈或雙鏈片段的交換。又稱基本重組。

（2）特異位點(diǎn)重組：是指由整合酶催化，在兩個(gè)DNA序列的特異位點(diǎn)間發(fā)生的整合。

（3）轉(zhuǎn)座重組：大多數(shù)基因在基因組內(nèi)的位置是固定的，有些基因可以從一個(gè)位置移動(dòng)到另一位置，這種由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排，稱為轉(zhuǎn)座。

典型的插入序列是長(zhǎng)750-1500bp的DNA片段，由兩個(gè)分開的反向重復(fù)序列和一個(gè)轉(zhuǎn)座酶基因。當(dāng)轉(zhuǎn)座酶基因表達(dá)時(shí)，即可引起該序列的轉(zhuǎn)座。

轉(zhuǎn)座子是可從一個(gè)染色體位點(diǎn)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位點(diǎn)的分散的重復(fù)序列，含兩個(gè)反向重復(fù)序列、一個(gè)轉(zhuǎn)座酶基因和其他基因（如抗生素抗性基因）。

2.2.II型限制性內(nèi)切酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生哪幾種切口？

答：II型限制性內(nèi)切酶切割雙鏈DNA，能夠產(chǎn)生粘性末端和平頭末端。

3.4.基因工程載體所具備的條件和常見載體有哪些？

答：基因工程載體所具備的條件有四:①能自主復(fù)制；②具有兩個(gè)以上的遺傳標(biāo)記物，便于重組體的篩選和鑒定；③有多克隆位點(diǎn)（外源DNA插入點(diǎn)），具有多個(gè)單一酶切位點(diǎn)，稱多克隆位點(diǎn)；④分子量小，以容納較大的外源DNA。

答：常見載體有質(zhì)粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA。

4.試述目的基因的主要來源。答：（1）化學(xué)合成法：假使已知某種基因的核苷酸序列，或根據(jù)某種基因產(chǎn)物的氨基酸序列推導(dǎo)出為該多肽鏈編碼的核苷酸序列，可以利用DNA合成儀通過化學(xué)合成法合成目的基因。

（2）基因組DNA文庫：從生物組織細(xì)胞提取出全部DNA，用物理方法（超聲波、攪拌剪力等）或酶法（限制性核酸內(nèi)切酶的不完全酶解）將DNA降解成預(yù)期大小的片段，即我們感興趣的基因片段。將它們與適當(dāng)?shù)目寺≥d體拼接成重組DNA分子，繼而轉(zhuǎn)入受菌體擴(kuò)增，使每個(gè)細(xì)菌內(nèi)都攜帶一種重組DNA分子的多個(gè)拷貝。不同細(xì)菌所包含的重組DNA分子內(nèi)可能存在不同的染色體DNA片段，這樣生長(zhǎng)的全部細(xì)菌所攜帶的各種染色體片段就代表了整個(gè)基因組。存在于轉(zhuǎn)化細(xì)菌內(nèi)、由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA

的集合稱基因組DNA文庫。

（3）cDNA文庫：以mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化合成與mRNA互補(bǔ)的DNA，再?gòu)?fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受菌體，即獲得cDNA文庫。（4）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：是一種在體外利用酶促反應(yīng)獲得特異序列的基因組DNA或cDNA的專門技術(shù)。

6.轉(zhuǎn)化菌鑒定的有哪些方法？

答：轉(zhuǎn)化菌鑒定有兩種方法，即直接選擇法和非直接選擇法。

⑴直接選擇法：針對(duì)載體攜帶某種或某些標(biāo)志基因和目的基因而設(shè)計(jì)的篩選方法。

①抗藥性標(biāo)志選擇：假使克隆載體攜帶有某種抗藥性標(biāo)志基因，如ampr﹑tetr或加kanr,轉(zhuǎn)化后只有含這種抗藥基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)菌才能在含該抗生素的培養(yǎng)板上生存并形成菌落，這樣就可將轉(zhuǎn)化菌與非轉(zhuǎn)化菌區(qū)別開來。

②標(biāo)志補(bǔ)救：若克隆的基因能夠在宿主菌表達(dá)，且表達(dá)產(chǎn)物與宿主菌的營(yíng)養(yǎng)缺陷互補(bǔ)，那么就可以利用營(yíng)養(yǎng)突變菌株進(jìn)行篩選。

③分子雜交法：這是利用32p標(biāo)記的探針與轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上的轉(zhuǎn)化子DNA或克隆的DNA片段進(jìn)行分子雜交，直接選擇并鑒定目的基因。包括原位雜交和Southern印跡。

⑵免疫學(xué)方法：假使克隆基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物是已知的，可利用特異抗體與目的基因表達(dá)產(chǎn)物相互作用進(jìn)行篩選，因此屬非直接選擇法?？煞譃槊庖呋瘜W(xué)方法和酶免檢測(cè)分析。

一.名詞解釋

1.G蛋白：即鳥苷酸結(jié)合蛋白。是一類位于細(xì)胞膜胞漿面,能與GDP或GDP結(jié)合的外周蛋白，由α、β、γ三個(gè)亞基組成。

2.其次信使：激素與受體結(jié)合后，靶細(xì)胞內(nèi)由膜外激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的某些小分子化合物，如cAMP、cGMP、Ca2+、IP3等。其次信使在激素作用中起信息傳遞和放大作用。

3.鈣調(diào)蛋白（CaM）：由一條多肽鏈組成，有4個(gè)Ca2+結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)胞漿Ca2+增高，Ca2+與CaM結(jié)合，其構(gòu)象發(fā)生改變而活化，激活Ca2+-CaM激酶。

4.受體（recepter）：受體是細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能識(shí)別生物活性分子并與之結(jié)合的成分，它能把識(shí)別和接受的信號(hào)正確無誤地放大并傳遞到細(xì)胞內(nèi)部，進(jìn)而引起生物學(xué)效應(yīng)。

5.cAMP依靠性蛋白激酶：是一種由兩個(gè)催化亞基（C）和兩個(gè)調(diào)理亞基（R）組成的四聚體。每個(gè)R上有兩個(gè)cAMP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)cAMP與R結(jié)合后，R脫落，游離的C能使底物蛋白特定的Ser／Thr殘基磷酸化。因其活性受cAMP調(diào)控，故稱cAMP依靠性蛋白激酶。

二.問答題

1.受體作用特點(diǎn)有哪些？答：（1）高度專一性（2）高度親和力（3）可飽和性（4）可逆性（5）特定的作用模式2其次信使有哪些?

答：有Ca2+,cAMP,cGMP,DAG,IP3,花生四烯醇等等

3根據(jù)所學(xué)知識(shí)說明G蛋白是如何調(diào)控細(xì)胞膜上腺苷酸環(huán)化酶活性的。

答：好多激素或遞質(zhì)的受體通過調(diào)理細(xì)胞膜上腺苷酸環(huán)化酶（AC）活性產(chǎn)生效應(yīng)。有兩類G蛋白介導(dǎo)激素、受體等對(duì)AC的作用。一類是介導(dǎo)激活A(yù)C作用的Gs，另一類是介導(dǎo)抑制AC作用的Gi。當(dāng)沖動(dòng)劑（HS）與相應(yīng)的沖動(dòng)型受體（Rs）結(jié)合后，原來與Rs偶聯(lián)以三聚體形式存在，且與GDP結(jié)合的無活性的Gs蛋白釋放GDP，在Mg2+存在的狀況下，GTP與GS結(jié)合，進(jìn)而整個(gè)復(fù)合體解離成對(duì)比親和力低下的受體，βγ復(fù)合體和αs-GTP亞單位三個(gè)部分，αs-GTP即可激活A(yù)C。由于αs本身就有GTP酶活性，αs－GTP被水解成αs－GDP，后者再與β、γ形成無活性的Gs三聚體。AC抑制劑（Hi）與相應(yīng)的抑制型受體（Ri）結(jié)合，歷經(jīng)同樣的過程，由Gi介導(dǎo)對(duì)AC的抑制。此外，兩類G蛋白在調(diào)控過程中產(chǎn)生的βγ復(fù)合體可與彼此的活性亞單位結(jié)合使之滅活，可以協(xié)調(diào)兩類G蛋白對(duì)AC的作用

4機(jī)體以何種方式激活蛋白激酶A和磷酸化酶b激酶？說明兩種激酶激活方式的主要區(qū)別

答：（1）以別構(gòu)調(diào)理方式激活PKA，cAMP為別構(gòu)激活劑；以化學(xué)修飾方式激活磷酸化酶b激酶，由PKA催化其特定Ser／Thr殘基的磷酸化。（2）兩種調(diào)理方式的主要區(qū)別①影響因素：別構(gòu)調(diào)理通過胞內(nèi)別構(gòu)效

應(yīng)劑濃度變化影響酶活性；而化學(xué)修飾調(diào)理則通過另一種酶的作用引起被調(diào)理酶的共價(jià)修飾影響其活性。②酶結(jié)構(gòu)改變：別構(gòu)調(diào)理中別構(gòu)效應(yīng)劑通過非共價(jià)鍵與酶的調(diào)理亞基或調(diào)理部位可逆結(jié)合，引起酶分子構(gòu)象改變，常表現(xiàn)為別構(gòu)酶亞基的解聚或聚合；而化學(xué)修飾時(shí)酶蛋白的某些基團(tuán)在其他酶的催化下發(fā)生了共價(jià)鍵的變化。③特點(diǎn)及生理意義：別構(gòu)調(diào)理動(dòng)力學(xué)特征為S型曲線，在反饋調(diào)理中可防止產(chǎn)物堆積和能源浪費(fèi)；化學(xué)修飾調(diào)理耗能少，作用快，有放大效應(yīng)。

5膜受體介導(dǎo)的信息傳遞有哪些主要途徑？以下各組信息物質(zhì)主要通過其中哪種途徑傳遞信息？①腎上腺素、胰高血糖素、促腎上腺皮質(zhì)激素

②去甲腎上腺素、促甲狀腺激素釋放激素、抗利尿繳素③心鈉素、一氧化氮

④生長(zhǎng)素、胰島素、干擾素

答：（l）cAMP一蛋白激酶途徑：第①組信息物質(zhì)通過該途徑傳遞信息。

（2）Ca2+磷脂依靠性蛋白激酶途徑：第②組信息物質(zhì)通過該途徑傳遞信息。（3）Ca2+-CaM激酶途徑。第②組信息物質(zhì)通過該途徑傳遞信息。

（4）cGMP-蛋白激酶途徑；第③組信息物質(zhì)通過該途徑傳遞信息。（4）受體型TPK－Ras一MAPK途徑。（5）JAKs－STAT途徑；第④組信息物質(zhì)通過該途徑傳遞信息。一.問答題

1.血漿蛋白的功能有哪些?

答:（1）維持血漿膠體滲透壓；（2）維持血漿正常的pH；（3）運(yùn)輸作用；（4）免疫作用；（5）催化作用；（6）營(yíng)養(yǎng)作用；（7）凝血,抗凝血和纖溶作用。2.在成熟紅細(xì)胞內(nèi)糖酵解，2,3-二磷酸甘油酸旁路,磷酸戊糖途徑的生理意義是什么?

答:其糖酵解生理意義：提供ATP。ATP的功能：①維持紅細(xì)胞膜上鈉泵的轉(zhuǎn)運(yùn)；②維持紅細(xì)胞膜上鈣泵的轉(zhuǎn)運(yùn)；③維持紅細(xì)胞膜上脂質(zhì)與血漿蛋白中脂質(zhì)進(jìn)行交換；④少量ATP用于谷胱甘肽,NAD的生物合成；⑤ATP用于葡萄糖的活化,啟動(dòng)糖