DB50T 1365-2023 水質(zhì) 大環(huán)內(nèi)酯類和林克酰胺類抗生素的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS13.060.01CCSZ10

DB50重重慶市市場監(jiān)督管理局 發(fā)布2023050120230301重 慶 市 地 方 標 準DB50/T1365—2023水質(zhì)大環(huán)內(nèi)酯類和林可酰胺類抗生素的測定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法DB50/T1365DB50/T1365—2023DB50/T1365DB50/T1365—2023II質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 7廢棄物的處理 8附錄A （規(guī)范性） 方法的檢出限和測定下限 9附錄B （資料性） 方法的精密度和正確度 10目??次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1方法原理 1干擾與消除 1試劑和材料 1儀器和設備 2樣品 2分析步驟 3結(jié)果計算與表示 6精密度和正確度 7IIII前 言本文件按照GB/T1.1－2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心提出。本文件由重慶市生態(tài)環(huán)境局歸口并組織實施。本文件起草單位：重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。警告——本標準所使用的有機溶劑對人體健康有害，試劑配制和樣品前處理過程應在通風櫥內(nèi)進警告——本標準所使用的有機溶劑對人體健康有害，試劑配制和樣品前處理過程應在通風櫥內(nèi)進行，操作時應按規(guī)定要求佩帶防護器具，避免接觸皮膚和衣服。16 試劑和材料金屬離子與目標化合物能形成絡合物，使固相萃取效率降低，可向水樣中加入乙二胺四乙酸二鈉抑制絡合物的形成。5 干擾與消除峰定性，內(nèi)標法定量。4 方法原理本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。用于本文件。HJ91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ164 地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3 術(shù)語和定義水質(zhì)大環(huán)內(nèi)酯類和林可酰胺類抗生素的測定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對水中7種大環(huán)內(nèi)酯類和2種林可酰胺類抗生素進行測定的方法。本文件適用于地表水、地下水和廢水中林可霉素、螺旋霉素、克林霉素、竹桃三乙酸、琥乙紅霉9規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件，不注目期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為新制備的超純水。氫氧化鈉（NaOH）：分析純。鹽酸（HCl）：1mol/L，分析純。甲醇CHOH甲酸（HCOOH）：色譜純。甲酸溶液（0.05%）50μl（6.5）100ml甲酸/90ml（6.5）10ml（6.4）混合，搖勻。NaEDT標準貯備液：ρ=1.00g/L99.0溶解，貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產(chǎn)品說明?；旌蠘藴手虚g液：ρ=100μg/ml-10混合標準使用液：ρ=1.00μg/ml（參考濃度）將混合標準中間液（6.10）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不超過7天。內(nèi)標貯備液：ρ=1.00g/L3 CD(Eryhroyci－CD3 （6.4）。貯備液在-10℃以下冷凍、避光保存不超過6個月或參照制造商的產(chǎn)品說明。內(nèi)標中間液：ρ=100μg/ml將內(nèi)標貯備液（6.12）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍、避光保存不超過3個月。內(nèi)標使用液：ρ=10.0μg/ml（參考濃度）將內(nèi)標中間液（6.13）按需要用甲醇（6.4）稀釋，-10℃以下冷凍，避光保存不超過7天。固相萃取柱填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為6ml/150mg。濾膜：0.22μ0.45μm6.17 氮氣：純度≥99.99%。6.18 氬氣：純度≥99.99%。儀器和設備液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子化源(ESI)。色譜柱：C18100mm×2.1mm1.9μm。濃縮裝置：K-D固相萃取裝置：自動或手動，流速可調(diào)節(jié)。一般實驗室常用儀器。樣品采集與保存參照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相關(guān)規(guī)定采集樣品于4000ml磨口棕色玻璃瓶中，水樣應充滿采樣瓶，不留液上空間。樣品采集后應盡快進行分析。如暫不能分析，應在0℃～4℃避光保存，14天內(nèi)完成萃取。2339.1.2 質(zhì)譜分析條件正離子模式:ESI噴霧電壓(Sprayvoltage):3000V毛細管溫度350℃鞘氣(N2)流速:45L/min輔助氣(N2)流速:15L/min碰撞氣(Ar)壓力:200mPa選擇反應監(jiān)測(SRM)，具體參數(shù)見表2。表1 液相色譜流動相梯度洗脫程序樣品制備將固相萃取柱（6.15）固定在固相萃取裝置(7.4)上，分別用10ml甲醇（6.4）和10ml實驗用水活化固相萃取柱（6.15），保證小柱柱頭浸潤。水樣經(jīng)0.45μm濾膜（6.16）過濾，取1000ml水樣，加入1g調(diào)節(jié)pH值為至10約3滴/秒～4滴/秒）的流速通過小柱，用10ml實驗用水洗滌小柱，用氮氣（6.17）吹干小柱，再用10ml（6.14）5.00μl，用甲酸/甲醇溶液（6.7）定容至1ml，經(jīng)0.22μm濾膜（6.16）過濾，置于樣品瓶中，待測。當樣品體積為1000ml，濃縮后定容體積為1.0ml，進樣體積為10μl，檢出限為2ng/L，測定下限為8ng/L，詳見附錄A。空白樣品的制備以實驗用水代替樣品，應按照樣品制備（8.2）相同操作步驟，制備空白樣品。分析步驟儀器參考條件液相色譜分析條件流動相A：甲酸溶液(6.5)，流動相B：甲醇（6.4），梯度洗脫程序見表1，流速：200.0μl/min；柱溫：35℃；進樣量：10μl；具體參數(shù)見表1。時間min流動相A%流動相B%0.0090103.5090104.0010908.9010909.00901010.509010表2 目標化合物的選擇反應監(jiān)測條件序號目標物母離子m/z子離子m/z碰撞能量eV錐孔電壓V1林可霉素407.2359.2a1884126.227842螺旋霉素438.3174.1a2173145.115733克林霉素425.2377.2a1880126.128804竹桃三乙酸772.4156.0a2782586.318825琥乙紅霉素734.5576.2a1792158.029926紅霉素-13CD3738.4162.1a3191580.319917麥迪菌素814.1108.9a32100173.8311008交沙霉素828.5109.0a33114174.0311149克拉霉素748.2158.0a2696590.1169610羅紅霉素837.3679.3a2097158.03097注：a為定量子離子9.1.3 儀器調(diào)諧按照儀器使用說明書在規(guī)定時間和頻次內(nèi)對液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行儀器質(zhì)量數(shù)和靈敏度校正，以確保儀器處于最佳測試狀態(tài)。在儀器使用過程中，如發(fā)現(xiàn)儀器質(zhì)量數(shù)出現(xiàn)明顯偏差或靈敏度大幅度下降時，應立即對儀器重新進行質(zhì)量數(shù)和靈敏度校正。校準標準曲線的繪制取一定量混合標準使用液（6.11）于甲酸/甲醇混合溶液（6.7）中，制備至少5個濃度點的標準系種抗生素的質(zhì)量濃度均分別為2.00μg/L5.00μg/L10.0μg/L20.0μg/L50.0μg/L100μg/L（此為參考濃度于每毫升標準系列中加入5.00μl使內(nèi)標的質(zhì)量濃度為50.0μg/L，貯存在棕色進樣小瓶中，待測。由低濃度到高濃度依次對標準系列溶液進樣，以標準系列溶液中目標組分的濃度為橫坐標，以其對應的峰面積（或峰高）與內(nèi)標物峰面積(或峰高)的比值和內(nèi)標物濃度的乘積為縱坐標，建立標準曲線。如式（1）:yaxb (1)式中：4x（/L；y——目標組分和內(nèi)標物的峰面積（或峰高）比值與內(nèi)標物濃度乘積的數(shù)值；a——標準曲線斜率的數(shù)值；b——標準曲線截距的數(shù)值。標準參考譜圖在本標準推薦的儀器參考條件下，目標化合物的提取離子流色譜圖見圖1。RT:0.00-10.0010080604020010080604020

2.38

2.913.07

5.103.433.594.034.424.584.90 5.425.706.056.206.525.735.12

7.167.36

7.74

8.248.398.568.93

9.319.609.88

NL:2.82E6TICF:+cESISRMms2407.201[126.170-126.172,359.182-359.184]MS100PPB-005FA-methanolNL:1.20E6TICF:+cESISRMms2425.170[126.125-126.127,377.228-377.230]MS100PPB-005FA-methanol010080604020

2.222.432.682.923.243.593.714.02

4.424.70

5.265.37

5.936.16

6.59

6.937.18

7.647.858.21

8.548.798.979.29

9.80

NL:4.00E5TICF:+cESISRMms2438.299[145.091-145.093,174.085-174.087]MS100PPB-005FA-methanol010080604020

2.112.292.682.98

3.463.633.99

4.38

4.845.18

5.525.806.056.416.685.91

7.267.477.65

8.118.32

8.648.989.17

9.599.88

NL:1.59E6TICF:+cESISRMms2734.490[157.985-157.987,576.225-576.227]MS100PPB-005FA-methanol2.202.46

2.84

3.283.70

4.15

4.47

4.845.075.375.69

6.226.516.83

7.187.587.75

8.208.428.758.99

9.48

9.8855圖1 9種目標抗生素和內(nèi)標物的提取離子流色譜圖10.09.59.08.58.07.57.06.56.05.55.0Time(min)0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5NL:4.73E4TICF:+cESISRMms2738.377[162.054-162.056,580.284-580.286]MS100PPB-005FA-methanol5.9301008060402002.072.392.742.983.233.583.914.114.554.845.005.2.072.392.742.983.233.583.914.114.554.845.005.475.616.176.476.767.067.297.637.798.078.438.749.039.409.84校準樣品測定按照與繪制校準曲線相同的儀器分析條件進行測定?？瞻讓嶒灠磁c樣品測定相同的儀器分析條件進行空白樣品的測定。結(jié)果計算與表示定性分析122.5%；且待測樣品譜圖（Ksam,與濃度接近的標準溶液譜圖中對應的定性離子相對豐度（Kstd,3）3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在對應的待測物。Ksam

100 (2)A110.2 結(jié)果計算10.2 結(jié)果計算樣品中的目標物的質(zhì)量濃度按公式（4）6單位為百分比式中：t,（；td（或峰高；Astd1——標準樣品中某組分二級質(zhì)譜定量子離子的峰面積(或峰高)。表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差std1AstdK Astd2100 (3)式中：K（；（或峰高；A1——樣品中某組分二級質(zhì)譜定量子離子的峰面積(或峰高)下列縮略語適用于本文件。KstdKsam最大允許偏差Kstd＞502020＜Kstd≤502510＜Kstd≤2030Kstd≤1050式中：

11f1000

............................................................................(4)（nL；ρ1——從標準曲線上查得的樣品中目標物的濃度的數(shù)值，單位為微克每升(μg/L)；f——稀釋倍數(shù)。10.3 結(jié)果表示測定結(jié)果小數(shù)位數(shù)的保留應與方法檢出限一致，最多保留三位有效數(shù)字。精密度和正確度精密度65.00ng/L、10.0ng/L20.0ng/L6次重復測定：實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：5.1%～11.1%，2.5%～11.2%，1.0%～13.2%；實驗室間相對標準偏差分別為：6.2%～19.6%，3.8%～8.7%，3.8%～8.3%；重復性限范圍為：0.78ng/L～0.94ng/L，1.00ng/L～2.36ng/L，2.77ng/L～4.65ng/L；再現(xiàn)性范圍為：0.98ng/L～4.39ng/L，1.44ng/L～3.32ng/L，3.20ng/L～6.66ng/L。665.00ng/L10.0ng/L：實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：5.2%～27.1%和4.5%～28.4%；實驗室間相對標準偏差分別為：12.7%～19.1%和15.7%～19.4%；重復性限范圍為：1.63ng/L～2.84ng/L和3.79ng/L～7.48ng/L；再現(xiàn)性范圍為：2.24ng/L～3.57ng/L和3.61ng/L～7.60ng/L。6610.0ng/L20.0ng/L：實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：9.2%～27.6%和6.7%～27.8%；實驗室間相對標準偏差分別為：17.0%～23.5%和12.9%～18.4%；重復性限范圍為：4.61ng/L～7.58ng/L和8.21ng/L～11.3ng/L；再現(xiàn)性范圍為：4.58ng/L～9.09ng/L和8.12ng/L～13.5ng/L。正確度65.00ng/L、10.0ng/L，加標回收率分別為：68.5%～133%，64.2%～132%。610.0ng/L、20.0ng/L，加標回收率分別為：61.5%～131%，67.3～129%。B。質(zhì)量保證和質(zhì)量控制空白分析788每次分析至少做一個實驗室空白，實驗室空白中目標化合物的濃度應低于方法檢出限。校準每批樣品應建立標準曲線，相關(guān)系數(shù)應≥0.990。每20個樣品或每批次（≤20個樣品/批）應測定一個校準曲線中間濃度點標準溶液，其測定結(jié)果與該點濃度的相對誤差應在±20%以內(nèi)。精密度每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應分析一個平行樣品。平行樣的相對標準偏差應控制在≤25%以內(nèi)。正確度每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應做1個基體加標，加標回收率應在50%～150%。廢棄物的處理實驗中產(chǎn)生的廢物應分類收集、統(tǒng)一保管，并做好相應標識，依法委托有資質(zhì)的單位進行處理。99附 錄 A（規(guī)范性）方法的檢出限和測定下限本方法中目標化合物的檢出限、測定下限和保留時間見表A.1。表A.1 方法的檢出限、測定下限和保留時間序號化合物名稱英文名稱CAS號檢出限ng/L測定下限ng/L保留時間min1林可霉素Lincomycin154-21-2285.102螺旋霉素Spiramycin8025-81-8285.373克林霉素Clindamycin18323-44-9285.734竹桃三乙酸Oleandomycintriacetate2751-09-9285.905琥乙紅霉素Erythromycin-ethylsuccinate1264-62-6285.916麥迪菌素Midecamycin35457-80-8285.997交沙霉素Josamycin16846-24-5286.078克拉霉素Clarithromycin81103-11-9286.219羅紅霉素Roxithromycin80214-83-1286.151010附 錄 B（資料性）方法的精密度和正確度B.1重復性、再現(xiàn)性等精密度指標見表B.1～表B.3。表B.1 方法的精密度(空白加標）序號化合物名稱精密度統(tǒng)計結(jié)果加標濃度ng/L總均值ng/L實驗室內(nèi)相對標準偏差%實驗室間相對標準偏差%重復性限r(nóng)ng/L再現(xiàn)性限Rng/L1林可霉素5.003.526.9～40.9810.07.963.8～02.0320.022.25.6～56.662螺旋霉素5.003.316.2～11.111.00.881.2910.08.023.5～61.4420.021.63.2～06.263克林霉素5.003.557.7～10.416.00.941.8110.011.14.3～73.3220.020.63.9～12.064竹桃三乙酸5.003.485.1～10.611.00.801.3010.08.713.8～42.3820.020.24.6～13.27.04.505.705琥乙紅霉素5.003.597.2～61.2510.09.272.8～10.08.51.432.5820.019.63.3～95.066麥迪霉素5.003.656.2～81.1810.011.33.8～10.46.02.362.8720.018.23.0～73.207交沙霉素5.003.425.7～11.013.70.841.5210.08.133.2～42.1020.016.51.0～94.288克拉霉素5.003.427.2～10.516.80.821.7710.09.302.5～62.6820.017.91.6～44.309羅紅霉素5.003.477.8～9.919.60.874.3910.08.422.9～02.0820.018.22.8～43.791111表B.2 方法的精密度(地表水樣品加標）序號化合物名稱精密度統(tǒng)計結(jié)果加標濃度ng/L總均值ng/L實驗室內(nèi)相對標準偏差%實驗室間相對標準偏差%重復性限r(nóng)ng/L再現(xiàn)性限Rng/L1林可霉素5.004.455.2～18.412.71.633.0110.010.412.8～26.416.45.616.732螺旋霉素5.004.079.3～21.815.51.692.4210.07.815.2～21.315.23.793.613克林霉素5.004.399.5～23.1510.08.1111.2～45.134竹桃三乙酸5.004.3011.4～42.8410.07.914.5～83.985琥乙紅霉素5.005.4512.1～24.716.92.793.5710.012.110.3～27.619.77.487.606麥迪霉素5.004.996.9～19.414.82.292.9510.010.16.7～22.415.74.695.407交沙霉素5.004.309.4～24.618.52.542.8610.08.534.5～28.417.24.675.128克拉霉素5.004.047.8～22.916.72.322.5010.08.024.7～25.218.04.274.709羅紅霉素5.005.799.9～18.714.02.082.241212表B.4 方法的正確度B.2B.4。表B.3 方法的精密度(廢水樣品加標）序號化合物名稱精密度統(tǒng)計結(jié)果加標濃度ng/L總均值ng/L實驗室內(nèi)相對標準偏差%實驗室間相對標準偏差%重復性限r(nóng)ng/L再現(xiàn)性限Rng/L1林可霉素10.09.1014.0～26.4920.018.510.5～23.822螺旋霉素10.012.017.8～25.822.17.587.6420.022.712.5～23.217.411.2811.23克