循環(huán)腫瘤細胞檢測在肺癌中的應(yīng)用

循環(huán)腫瘤細胞檢測在肺癌中的應(yīng)用第1頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四腫瘤疾病近期療效的判斷方法第2頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四臨床因子作為預(yù)后與預(yù)測因子預(yù)后：T,N,Mstaging,PSscore預(yù)測：吸煙狀況：指導(dǎo)靶向治療性別：指導(dǎo)靶向治療種族：指導(dǎo)靶向治療組織學(xué)：指導(dǎo)化療和靶向治療第3頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四影像學(xué)方法非侵入地、直觀地對患者的腫瘤大小變化情況進行評估。缺點：存在一定的健康危害或健康隱患腫瘤大小常與腫瘤的惡性程度或浸潤能力不完全一致費用昂貴滯后性靈敏性低第4頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四病理學(xué)方法手術(shù)或活檢獲得病灶組織/周圍淋巴結(jié)組織，進行病理學(xué)染色和分析，是目前唯一明確腫瘤有否轉(zhuǎn)移的金標準缺點：精確度不夠高是侵入性檢查手段易造成擴散人工誤差大難以標準化第5頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四血清腫瘤標記物測定血清腫瘤標志物的濃度往往可以在一定程度上提示腫瘤的發(fā)展程度缺點：特異性不高易受非特異蛋白的干擾其他的病理生理狀態(tài)影響導(dǎo)致假陽/陰性結(jié)果

第6頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四1869年AustMedJ，Ashworth最早在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到。2005年NEnglJMed，Cristofanilli證實治療前CTC數(shù)目是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者無進展生存期和總生存期的獨立預(yù)測因子。循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞。循環(huán)腫瘤細胞原發(fā)腫瘤血管生成侵潤侵入血管內(nèi)侵入血管外

(CTC)血管內(nèi)增殖

(CTM)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移播散腫瘤細胞（DTC）微轉(zhuǎn)移休眠灶循環(huán)腫瘤細胞（CTC）循環(huán)腫瘤

微栓（CTM）凋亡的CTC侵潤腫瘤細胞

擴增血管生成上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間質(zhì)－上皮轉(zhuǎn)化（MET）轉(zhuǎn)移到骨髓和其他器官第7頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CTC檢測預(yù)測PFS及OS指示預(yù)后效果復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)測與分期有助于腫瘤個體化治療的藥物篩選和治療方案的確定是傳統(tǒng)的影像學(xué)及其他生物標志物的補充檢測手段有助于尋找新的腫瘤標識物以及開發(fā)新的抗腫瘤藥物第8頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四腫瘤細胞作為生物標志物外周血和肺靜脈血中的循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）臨床意義:轉(zhuǎn)移的輔助標志物？可以預(yù)測治療？預(yù)后因子？最小損傷的突變檢測?第9頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四獲取CTC需要解決的技術(shù)問題從紅細胞和白細胞中富集惡性腫瘤細胞

將惡性腫瘤細胞與紅細胞、白細胞、正常上皮細胞、造血干細胞等區(qū)分開來每10mL血液中可能僅含有幾個到幾十個循環(huán)腫瘤細胞，而10mL血液中含有的白細胞約有1億個，紅細胞有500億個。第10頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四三種技術(shù)過濾法ISET:

IsolationbySizeofEpithelialTumorcells8μm孔徑過濾膜，漏檢體積較小的腫瘤細胞敏感性低梯度密度法腫瘤細胞和單核細胞密度小于1.077g/mlCTC純度低，混入較多白細胞腫瘤細胞會遷移至血漿層，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)對細胞有毒性免疫磁珠法腫瘤細胞表面抗原CTC純度低，混入較多白細胞不能有效排除細胞碎片假陽性和假陰性高CellSearch免疫磁珠+流式細胞分析+化學(xué)發(fā)光第11頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CellSearch是全球第一也是唯一經(jīng)FDA批準可用于臨床的循環(huán)腫瘤細胞（CTC）產(chǎn)品1983磁流體第12頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四JClinOncol.2011Apr20;29(12):1556-63.Epub2011Mar21.

Evaluationandprognosticsignificanceofcirculatingtumorcellsinpatientswithnon-small-celllungcancer.1肺癌是最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，85%的肺癌患者為非小細胞肺癌，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已是晚期，其5年生存率只有2%。2目前，仍然缺乏有效的生物標記物預(yù)測治療的有效性。CTC是一個潛在的療效預(yù)測因子。3驗證能否在NSCLC患者中檢測出CTC及CTC能否預(yù)測治療有效性。背景第13頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四實驗流程病人入組基線CTC檢測化療一個療程CTC檢測統(tǒng)計分析第14頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四患者入組標準未做過化療，且4周內(nèi)未做過放療病理學(xué)確診為非小細胞肺癌IIIA,IIIB,IV期準備進行標準的細胞毒療法5年內(nèi)未患過惡性腫瘤實驗方法CellSave專用收集管采集血液采集血后于室溫儲存并于96小時內(nèi)進行檢測Cellsearch系統(tǒng)進行檢測第15頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四患者化療前CTC數(shù)量（基線CTC）與臨床特征的關(guān)系IV期患者CTC數(shù)量明顯多于IIIB期患者，IIIB期患者的CTC數(shù)量又明顯多于IIIA期患者。第16頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四肝轉(zhuǎn)移及骨轉(zhuǎn)移患者中CTC數(shù)量明顯多于其它轉(zhuǎn)移患者。患者化療前CTC數(shù)量與腫瘤轉(zhuǎn)移地點的關(guān)系第17頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四所有非小細胞肺癌病人所有Ⅳ期非小細胞肺癌病人基線CTC數(shù)量與無進展生存期和總生存期的關(guān)系基線CTC數(shù)量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于基線CTC數(shù)量大于等于5的患者。第18頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四化療前后CTC數(shù)量與患者無進展生存期和總生存期的關(guān)系化療后CTC數(shù)量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于CTC數(shù)量大于5的患者?；熐昂驝TC數(shù)量都少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于只有一次測出CTC數(shù)量少于5的患者。第19頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四化療前后CTC的數(shù)量變化反映臨床療效化療前化療后化療后CTC數(shù)量減少患者的臨床療效好于CTC數(shù)量增加的患者第20頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四結(jié)論CTC能在IV期非小細胞肺癌患者中檢出CTC數(shù)量的變化反映了臨床療效CTC數(shù)量與OS和PFS相關(guān)，是非小細胞肺癌的一個新的預(yù)后判斷因子第21頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CTC在判斷是否存在轉(zhuǎn)移中有重要參考價值對于原發(fā)性肺癌患者，CTC計數(shù)在有遠處轉(zhuǎn)移的肺癌患者中有顯著升高，相關(guān)性優(yōu)于CEA。第22頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CTC升高對于判斷遠處轉(zhuǎn)移的敏感性達71%，特異性達83%CTC計數(shù)和血清CEA水平在不同切點的診斷價值第23頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四治療前和治療后CTC的數(shù)量變化反映療效大多數(shù)患者的CTC數(shù)量在第一個化療療程后（22天）下降，提示療效好。第24頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四TheAnnalsofThoracicSurgeryVolume87,Issue6,June2009,Pages1669-1675

CirculatingTumorCellsinPulmonaryVenousBloodofPrimaryLungCancerPatients鱗癌中periCTC和pvCTC的數(shù)量明顯高于腺癌第25頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四NEnglJMed2008;359:366-77.

DetectionofMutationsinEGFRinCirculatingLung-CancerCells1吉非替尼是較好地治療非小細胞肺癌的靶向藥物，但是EGFR的基因型決定了藥物的治療效果。2目前，檢測EGFR的基因型需要選取患者的腫瘤組織，找到一種非侵入性的方法檢測EGFR迫在眉睫。3驗證能否在CTC中檢測EGFR的基因型，且與藥物療效相關(guān)。背景第26頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CTC中EGFR突變與腫瘤組織中EGFR突變的一致性（SARMS方法）CTC中EGFR基因型有17個與腫瘤組織中的一樣，準確率為94%，第27頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CTC數(shù)量與病情進展的關(guān)系吉非替尼治療后CTC數(shù)量下降，伴隨著疾病進展CTC數(shù)量也隨之上升。腫瘤大的患者CTC數(shù)量比腫瘤小的患者多。CTC數(shù)量影像學(xué)腫瘤變化第28頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四檢測CTC中EGFR的基因型與組織中檢測結(jié)果高度符合可以通過CTC來檢測非小細胞肺癌患者腫瘤的基因型CTC數(shù)量與疾病進展密切相關(guān)結(jié)論第29頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四小細胞肺癌患者活檢組織及相對應(yīng)的CTC中的CD56活檢組織中的CD56和CTC中的CD56表達具有一致性肺癌組織肺癌肝轉(zhuǎn)移組織第30頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四BaselinebloodCAC腫瘤細胞a,monosomy6p11-q12;b,amplificationEGFR,c-MYC;EGFR(red)5.p15.3(green),6p11-q12(aqua),c-MYC(yellow).c,trisomyCEP3andmonosomyCEP17;d,polysomyCEP3,CEP7,CEP17and9p21.3.CEP3(red),CEP7(green),CEP17(aqua),9p21.3(yellow).外周循環(huán)腫瘤細胞的異常情況與手術(shù)切除的腫瘤細胞具有高度一致性。BaselinebloodCTC腫瘤細胞第31頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CTC中的染色體異常分子標記物與疾病的復(fù)發(fā)和生存密切相關(guān)第32頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四CTC計數(shù)CTC的分子特性指示預(yù)后輔助檢測抗癌藥物的反應(yīng)——作為預(yù)測和/或藥物動力學(xué)生物標志物聯(lián)合已知的分期因素，獲取更精確的預(yù)后判斷病人是否需要輔助化療檢測癌癥復(fù)發(fā)輔助診斷實時活檢——腫瘤的生物學(xué)行為闡明預(yù)后和預(yù)計的分子學(xué)特征檢測抗藥情況——基于獲得連續(xù)樣本的便利性提高對生物過程機制的了解發(fā)現(xiàn)并鑒定新治療靶點CTC的應(yīng)用：從細胞計數(shù)到分子特性第33頁，共36頁，2023年，2月20日，星期四FISH分析CT