α和β地貧、苯丙酮尿癥、遺傳性耳聾課件

1.α和β地中海貧血病

Mediterraneananemia1.1概述遺傳性溶血性貧血血紅蛋白的珠蛋白鏈（α、β、γ、δ鏈）的一種或幾種受到部分或完全抑制地貧分為α、β、δ、δβ等4種類型以α和β地中海貧血較為常見*血紅蛋白分子是由四分子的珠蛋白和四分子亞鐵血紅素組成，珠蛋白約占96%?，F(xiàn)狀：廣泛分布于世界許多地區(qū)，東南亞即為高發(fā)區(qū)之一。我國廣東、廣西、四川多見，長江以南各省區(qū)有散發(fā)病例，北方則少見。預防：開展人群普查和遺傳咨詢、做好婚前指導以避免地貧基因攜帶者之間聯(lián)姻；采用基因分析法進行產(chǎn)前診斷，避免重型地貧患者出生。治療：輕型地貧無需特殊治療。中間型和重型地貧：一般治療、輸血和鐵治療、鐵螯合劑、脾切除、造血干細胞移植、基因活化治療。α地中海貧血人類α珠蛋白基因簇位于16pter-p13.3（16號染色體短臂末端到短臂13區(qū)3帶

）。α地貧大多是由于α珠蛋白基因的缺失所致，少數(shù)由基因點突變造成。缺失型α-地貧：占α-地貧的95%以上，由α–基因缺失引起；非缺失型α-地貧：占α-地貧的約5%，由α–基因點突變引起。缺失型α地中海貧血標準型-1或稱東南亞型（--SEA）標準型-2靜止型HbH病HbBart’s胎兒水腫綜合征點突變型α地中海貧血一般只發(fā)生于1個α基因上，占α地貧的5%，目前至少發(fā)現(xiàn)68種。在中國南方地區(qū)主要見兩種：HbConstantSpring(CS),HbQuongSze(QS)，點突變型地貧表型較缺失型地貧嚴重點突變大多位于功能較強的α2基因α2基因發(fā)生突變比缺失時α鏈產(chǎn)量明顯減少點突變產(chǎn)生的某些異常血紅蛋白可形成不溶物直接損傷紅細胞有些非缺失型α-地貧純合子（αQSα/αQSα、αCSα/αCSα、αQSα/αCSα）可以表現(xiàn)為HbH病；有些非缺失型HbH?。?-SEA/αQSα、--SEA/αCSα）的臨床表現(xiàn)比缺失型HbH?。?-SEA/α3.7α、--SEA/α4.2α）更為嚴重。β地中海貧血人類β珠蛋白基因簇位于11p15.5。β地中海貧血（簡稱β地貧）的發(fā)生主要是由于基因的點突變，少數(shù)因基因缺失。β地貧的發(fā)生的分子病理相當復雜，目前在全世界已發(fā)現(xiàn)了近200多種突變類型。中國人群中共發(fā)現(xiàn)約48余種，其中常見的6種占90%以上。輕型β-地貧：2個基因中有1個基因突變基因型：βN/βT重型β-地貧：2個基因中有2個基因突變基因型：βT/βTα地貧產(chǎn)前診斷方法1、非侵入性產(chǎn)前診斷：為無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷方法，最早于孕12周進行。先用超聲檢查胎兒是否貧血。心胸比例（孕12-17周≥0.5；孕18-21周≥0.52）、大腦中動脈血流（MCV-PSV＞1.5MOM提示胎兒重度貧血）、胸腔腹腔積液、胎盤厚度、羊水過多等若提示胎兒貧血,再進行侵入性檢查；若無提示胎兒貧血，不需要侵入性檢查。2、侵入性產(chǎn)前診斷：同β地貧產(chǎn)前診斷方法β地貧產(chǎn)前診斷方法侵入性產(chǎn)前診斷：絨毛穿刺術(shù)：10-14周，5-7天出診斷報告羊膜腔穿刺術(shù)：16-23周，5-7天出診斷報告臍靜脈穿刺術(shù)：23周后，5-7天出診斷報告1.4基因分析α-地中海貧血基因檢測試劑盒在中國地區(qū)普遍發(fā)生的α-地貧分別由--SEA、-α3.7和-α4.2位點缺失引起的。PCR方法結(jié)合DNA芯片雜交技術(shù)根據(jù)這三種缺失型的缺失斷裂點，設(shè)計了三對引物分別檢測-α3.7、-α4.2和--SEA，只有當樣品發(fā)生缺失時，相應的上下游引物距離靠近，擴增出相應條帶。將正常內(nèi)對照（用αα表示）設(shè)計在三種共同缺失的位置，以使當發(fā)生任一種缺失時正常對照都不擴增。四對引物要在同一管擴增并通過電泳來判斷結(jié)果，設(shè)計引物位置時各PCR產(chǎn)物的條帶大小要有區(qū)別，最終-α3.7、αα、-α4.2和--SEA的擴增條帶分別約為：2.0kbp、1.8kbp、1.6kbp和1.3kbp。α-地中海貧血點突變基因檢測試劑盒在中國人群中還存在的α-珠蛋白基因點突變（αT）類型，這是導致臨床α地貧漏診的主要原因之一。作為α地貧3種缺失型檢測的補充，對懷疑α地貧有漏診的患者進行αCS、αQS和αWS突變的診斷，確定具體的基因突變類型。缺失檢測結(jié)果αT檢測結(jié)果膜條圖片樣品基因型αα/αα三個位點N顯色，M不顯色αα/αααα/-ααα/-ααα/--SEAαα/--SEAαα/αα三個位點N顯色，CSM顯色αCSα/αααα/αα一個CSM顯色,QSN,WSN顯色αCSα/αCSααα/--SEAαCSα/--SEAαα/-ααCSα/-α

常見基因檢測結(jié)果的判定(以CS突變?yōu)槔?定性、確定具體基因突變型（41-42M、654M、－28M、71-72M、17M、βEM、31M、IVS1-1M、27/28M、43M、－32M、－29M、－30M、14-15M、CAP、IntM、IVS1-5M）*紅色為少見突變類型2.苯丙酮尿癥

phenylketonuria,PKU2.1概述一種常見的遺傳氨基酸代謝病，常染色體隱性遺傳。發(fā)病率約為1/10000，臨床表現(xiàn)不均一，主要臨床特征為智力低下、精神神經(jīng)癥狀、濕疹、皮膚抓痕征及色素脫失和鼠氣味等，最終成為癡呆。是數(shù)千種遺傳病中，少數(shù)幾種可以通過新生兒篩查，早期診斷治療，并可完全避免智殘的疾病。因此,對新生兒早期進行篩查,檢測血清(漿)中Phe和Tyr的濃度兩個主要實驗室指標對診斷PKU具有重要意義。2.2病因苯丙氨酸（phenylalanine,Phe）代謝途徑中的酶缺陷，苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)變成為酪氨酸，導致苯丙氨酸及其酮酸蓄積，并從尿中大量排出。苯丙氨酸羥化酶(phenylalaninehydroxylase,PAH)先天性缺陷或突變四氫生物蝶呤(tetrahydrobiopterin,BH4)輔因子的合成和BH4的再循環(huán)障礙由PAH缺乏導致者占97%-99%，與四氫生物蝶呤(BH4)合成缺陷有關(guān)者占1%-3%，并被稱為非經(jīng)典型PKU。其特征是人體苯丙氨酸代謝異常，導致高苯丙氨酸血癥。GTP-CH：GTPcyclohydrolase，三磷酸鳥苷酸環(huán)化水解酶6-PTS：PTPS,6-Pyruvoyl-tetrahydropterinsynthase，6-丙酮酰四氫蝶呤合成酶DHPR：dihydropteridinereductase，二氫生物蝶呤還原酶苯丙氨酸是人體必需的氨基酸之一。正常人每日需要的攝入量約為200-500mg，其中1/3供合成蛋白，2/3則通過肝細胞中苯丙氨酸羥化酶（PAH）的轉(zhuǎn)化為酪氨酸，以合成甲狀腺素、腎上腺素和黑色素等。生物蝶呤(B)2.3診斷方法1．新生兒期的診斷：依靠新生兒疾病篩查，陽性兒進行復查，并用定量法（氨基酸分析、高效液相法、熒光法）精確測定。2．新生兒以后的診斷：根據(jù)臨床診斷和實驗室檢查。3．實驗室檢查：尿液檢查、熒光免疫法測定血中的Phe和Tyr、苯丙氨酸負荷實驗、頭顱影像檢查：核磁共振（MRI）、尿喋呤分析。新生兒篩查試劑盒：（檢測苯丙氨酸）

1.菌環(huán)直徑：提供苯丙氨酸可使在含抑制劑培養(yǎng)基上的枯草桿菌恢復生長，且生長環(huán)的直徑與苯丙氨酸的含量呈正比。與標準品比較菌環(huán)直徑，可得出樣品中苯丙氨酸的含量。

2.OD：苯丙氨酸在外加苯丙氨酸脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)化成苯丙酮酸鹽，此反應使存在于反應混合物中的輔酶NAD+再生。產(chǎn)生的NADH使加入的黃色Tetrazalium鹽發(fā)生氧化還原反應生成紫色物質(zhì)Formazane，OD570nm值與病人樣本中的苯丙氨酸濃度成正比。3.熒光：濾紙片上干燥血標本的苯丙氨酸的一種化學方法定量檢測。從濾紙片上干燥血標本中洗脫出苯丙氨酸同印三酮形成一種熒光化合物。用熒光讀數(shù)儀讀數(shù)。2.4基因分析PAH基因定位于12號染色體的長臂上，即12q22-q24.1。PAH基因除了缺失突變外，大多是點突變。迄今已發(fā)現(xiàn)430多種突變(在中國人中也已確定44種突變)，突變大多在外顯子區(qū)，60%是錯義突變。間接診斷：由于尚有30％的PKU患者的基因突變類型還不清楚，因此間接診斷成為對這部分病例進行基因診斷和產(chǎn)前診斷的主要手段。PCR-RFLP、PCR-STR、PCR-SSCP、PCR-DGGE、PCR-PASA3.遺傳性耳聾

HereditaryHearingImpairment3.1概述基因和染色體異常所致的耳聾在每1000個新生兒中就有一位患有先天性耳聾，其中60%以上是由遺傳因素引起的，遺傳性聾的群體發(fā)病率已超過27/1000，在所有耳聾病人中，遺傳性聾約占50%。遺傳性聾分為綜合征性遺傳性聾及非綜合征性遺傳性聾兩大類。前者指除了耳聾以外，同時存在眼、骨、腎、皮膚等部位的病變，這類耳聾占遺傳性聾的30%；后者只出現(xiàn)耳聾的癥狀，在遺傳性聾中占70%。3.3診斷方法想要明確耳聾是不是遺傳性耳聾，就要進行基因檢測。傳統(tǒng)的酶切，測序等方法不僅耗時長，而且一次只能檢測一個基因，也就是說除非能夠確定到底是由哪個基因?qū)е露@，否則檢測的費用是十分昂貴且費時的。但隨著基因技術(shù)的不斷發(fā)展，基因檢測的技術(shù)也出現(xiàn)了突飛猛進，基因芯片技術(shù)就是針對快速檢測而出現(xiàn)的技術(shù)。3.4基因分析針