DB23T 2605-2020化學誘導玉米單倍體技術規(guī)程

ICS65.020.20B05黑龍DB23江省地方標準DBT0黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T2605-2020前言本標準依據GB/T1.1-2009編寫規(guī)則起草。本標準由黑龍江省農業(yè)農村廳提出。本標準由黑龍江省農業(yè)標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：黑龍江省農業(yè)科學院耕作栽培研究所、黑龍江榮玉農業(yè)科技有限公司。本標準主要起草人：宮秀杰、來永才、錢春榮、于洋、馬寶新、馬延華、李梁、郝玉波、李昕、王俊強、王秋菊、姜輝、何長安、姜宇博、呂國依、葛選良、楊忠良、馬軍韜、趙楊、王陽、童淑媛、杜振宇、孫丹、侯國強、孟凡迪。1DB23/T2605-2020化學誘導玉米單倍體技術規(guī)程1范圍本標準規(guī)定了化學誘導玉米單倍體技術的術語和定義、材料和備品、誘導處理、誘導后代種植和田間調查、誘導率統(tǒng)計及注意事項。本標準適用于化學誘導玉米單倍體技術。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。DB23/T017玉米生產技術規(guī)程DB62/T1060農作物種子生產技術規(guī)程玉米自交系3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1Pa1代化學誘導孤雌生殖獲得的籽粒及其生長植株(不包括后代籽粒)。3.2Pa2代Pa1經自交結實后的籽粒及生長植株(不包含后代籽粒)。4材料和備品4.1實驗材料和備品準備500ml燒杯、玻璃棒、100ml容量瓶、25ml量筒、封口瓶、廢液缸、試劑匙、移液管、0.001g天平、猴頭噴霧器、蒸餾水、無水乙醇(EA)。剪刀、膠皮手套、一次性口罩、眼罩、白大褂、硫酸紙、小硫酸紙袋、大硫酸紙袋大頭針、標簽、記號筆、棉花、鑷子、網袋。4.2誘導材料準備4.2.1誘導材料選擇符合育種目標的玉米優(yōu)良雜合種質或遺傳背景廣泛的群體材料。4.2.2化學試劑誘導試劑包括：二甲基亞砜(DMSO)、馬來酰肼(MH)、秋水仙堿(Col)、甲醇(MT)。2DB23/T2605-2020配制方法：取70mgMH加入燒杯，再加入70mlMT，充分攪拌。待MH完全溶解后，加入0.1mlDMSO、1.0gCol和500ml蒸餾水，攪拌，轉移入1000ml容量瓶中，定容至1000ml。放置安全處待用。4.2.3誘導材料種植及田間管理選擇地勢平坦、肥水一致、排灌方便地塊，每份被誘導材料種植不少于100株。田間管理參照DB23/T017執(zhí)行。5誘導處理5.1誘導時期和誘導方法誘導材料雌穗吐絲3cm~5cm時。5.1.2誘導方法誘導材料雌穗吐絲前，用硫酸紙袋將雌穗罩上，去除雌穗。誘導處理時間選擇在清晨4:00-7:30，操作人員須用75%乙醇將手和剪刀消毒，用剪刀將被誘導材料雌穗頂端剪平，然后用手再修出一個凹槽，用猴頭噴霧器噴施化學藥劑，每穗噴施化學藥劑2ml，噴施后迅速罩上硫酸紙袋，然后再罩上一個大硫酸紙袋，用大頭針固定，掛標簽，標記噴施藥劑日期。間隔3天后再噴施一次，噴施方法同上。記錄化學藥劑處理的果穗數量。5.2誘導材料的收獲籽粒成熟及時收獲，單穗分裝編號，待干燥后，脫粒。記錄每個果穗雌穗小花數和結實數。6誘導后代種植和田間調查6.1Pa1種植和田間調查選擇地勢平坦、肥水均一、病蟲害發(fā)生低、排灌方便地塊種植。收獲的Pa1種子全部播種，人工單粒播種，播深3cm~5cm，播后鎮(zhèn)壓，單株插牌標記。6.1.2Pa1田間管理采用人工除草，禁止使用化學藥劑除草。其它田間管理方法參照DB23/T017執(zhí)行。6.1.3Pa1田間調查6.1.3.1Pa1苗期調查調查未出苗、白化苗和早夭幼苗數量。6.1.3.2Pa1花期調查調查雄穗育性、雌穗育性和雌雄開花間隔時間。6.1.4Pa1自交授粉DB23/T2605-2020雌穗吐絲前用硫酸紙袋將雌穗罩上，對雌雄穗外觀正常、花期相遇的植株進行自交授粉。授粉方法參照DB62/T1060執(zhí)行。6.1.5Pa1收獲單穗收獲并編號。6.2Pa2種植及田間調查6.2.1Pa2種植按穗行種植。穗行插牌標記，種植方式同6.1.1。6.2.2Pa2田間管理田間管理方法參照DB23/T017執(zhí)行。6.2.3Pa2田間調查6.2.3.1Pa2苗期調查調查幼苗色、莖色澤及葉色，進行一致性調查。6.2.3.2Pa2花期調查調查株型、雄穗分枝、雌穗花絲顏色、株高、穗位、抽穗期、吐絲期。6.2.4Pa2自交授粉田間所有植株均進行自交授粉，授粉方法參照DB62/T1060執(zhí)行。6.2.5Pa2收獲記錄成熟期，同一穗行植株表現(xiàn)整齊一致，所有性狀無分離，即認為是純合二倍體。同一穗行性狀有分離的，則淘汰。按穗行收獲，并編號。7誘導率統(tǒng)計式中：M1為誘導材料結實率；Gi為Pa1結實粒數；Ei為處理雌穗小花數；式中：M2為誘導材料誘導率；Ri為Pa2純合穗行數；Ei為處理雌穗小花數；128注意事項4DB23/