Mic06微生物感染的實(shí)驗(yàn)室診斷課件

PekingUniversityHealthScienceCenter

微生物感染的實(shí)驗(yàn)室診斷LaboratorydiagnosisofmicroorganisminfectionMedicalMicrobiologyExcellentCurriculum精品課程醫(yī)學(xué)微生物學(xué)P157實(shí)驗(yàn)室診斷的意義明確患者的臨床診斷選擇有效的治療措施預(yù)防疾病繼續(xù)傳播與流行判斷患者預(yù)后實(shí)驗(yàn)室診斷方法分類鏡下直接觀察病原微生物分離、培養(yǎng)和鑒定病原微生物的抗原檢測(cè)特異性RNA或DNA片段檢測(cè)抗體和細(xì)胞免疫指征的檢測(cè)采集操作：無菌操作，做好標(biāo)記采集部位：組織、血、尿液、糞便、痰、腦脊液、分泌物、嘔吐物、胸腹穿刺物及解剖樣品等采集時(shí)機(jī)：根據(jù)病程發(fā)展的不同階段采集不同部位的樣品運(yùn)輸：應(yīng)遵循安全、快捷的原則前期處理：濃縮標(biāo)本采集和運(yùn)送形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的培養(yǎng)特征觀察：顏色、氣味、溶血性、菌落形態(tài)、細(xì)菌動(dòng)力及在液體、半固體、固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)顯微鏡檢查法：形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)、染色性、排列方式、數(shù)量非染色檢查法染色檢查法負(fù)染色檢查法

細(xì)菌分離培養(yǎng)法臨床標(biāo)本細(xì)菌分離：分區(qū)劃線細(xì)菌培養(yǎng)挑取單菌落，純培養(yǎng)鑒定免疫學(xué)檢查免疫沉淀反應(yīng)

凝集反應(yīng)

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

免疫標(biāo)記技術(shù)

生物化學(xué)檢查糖代謝試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)V-P試驗(yàn)蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)?zāi)蛩胤纸庠囼?yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)呼吸酶類試驗(yàn)過氧化氫酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)分子生物學(xué)檢查G+C測(cè)定技術(shù)核酸雜交技術(shù)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)質(zhì)粒指紋圖譜技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)DNA芯片技術(shù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌毒素檢測(cè)小鼠豚鼠家兔*LD50*ID50藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法液體稀釋法E測(cè)定法(Etest)自動(dòng)化藥敏測(cè)定法耐藥基因測(cè)定法病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體（inclusion）：某些病毒感染宿主細(xì)胞后,可在細(xì)胞核或漿內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)或數(shù)個(gè)、呈圓形或不規(guī)則、大小不一、嗜酸性或嗜堿性的結(jié)構(gòu)電鏡檢查

直接電鏡法免疫電鏡法輪狀病毒負(fù)染的電鏡照片病毒分離和培養(yǎng)動(dòng)物接種小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、雞、猴，采用鼻腔、腦內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹腔、靜脈等方式雞胚培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)組織培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)：2~3代用于診斷和疫苗制備

二倍體細(xì)胞培養(yǎng)：40±10代

傳代細(xì)胞培養(yǎng)：無限傳代用于分離多種病毒，但不能用于制備疫苗

病毒生長(zhǎng)繁殖的指標(biāo)與鑒定細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)紅細(xì)胞吸附

紅細(xì)胞凝集

干擾作用

細(xì)胞代謝反應(yīng)空斑形成單位（PFU）

細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)培養(yǎng)的單層細(xì)胞接種病毒后導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生圓縮、溶解、脫落等病變的現(xiàn)象。病變細(xì)胞正常細(xì)胞redbloodcell紅細(xì)胞吸附virus+susceptiblecells+viralproteinsexpressedonthecellmembranevirusA+susceptiblecellsvirusB+CPE(-)virusB+CPE(+)susceptiblecells病毒干擾作用空斑plaque由病毒感染細(xì)胞后在培養(yǎng)瓶的瓊脂層上形成的一個(gè)壞死病灶空斑形成單位PFU(plaqueformationunit)每毫升空斑形成單位病毒核酸的檢測(cè)核酸分子雜交技術(shù)

核酸分子擴(kuò)增技術(shù)

基因芯片技術(shù)

血清學(xué)診斷補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

中和試驗(yàn)

血凝抑制試驗(yàn)

膠乳凝集試驗(yàn)

間接血凝