臨床微生物檢查課件 第7章G-球菌

第五節(jié)奈瑟菌屬腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌奈瑟菌屬共性1、G–雙球菌；2、有菌毛，無鞭毛和芽胞；3、氧化酶（+），觸酶（+）；4、除淋病奈瑟菌寄居于泌尿生殖道粘膜外，其它均位于鼻咽腔粘膜臨床意義—腦膜炎奈瑟菌致病物質(zhì)莢膜—抗吞噬作用菌毛—粘附易感細(xì)胞表面內(nèi)毒素—主要致病物質(zhì)IgA1蛋白酶—破壞粘膜表面特異性IgA1細(xì)菌的釋放裂解腎上腺小血管毛細(xì)血管皮膚瘀斑腎上腺出血DIC中毒性休克內(nèi)毒素大量所致疾病腦膜炎奈瑟菌飛沫鼻咽部多數(shù)少數(shù)普通型爆發(fā)型慢性敗血癥鼻咽炎或帶菌狀態(tài)敗血癥穿過血腦屏障傳染源——帶菌者和病人從潛伏期末至發(fā)病10天內(nèi)具有傳染性傳播途徑——飛沫傳播易感者——6個(gè)月至2歲發(fā)病率最高流行季節(jié)——從前一年11月份開始，次年3、4月份達(dá)高峰，5月份開始下降臨床表現(xiàn)：突起高熱、頭痛、嘔吐、皮膚粘膜瘀點(diǎn)、瘀斑（在病程中增多并迅速擴(kuò)大），腦膜刺激征致病物質(zhì)內(nèi)毒素—炎癥反應(yīng)菌毛—粘附人類尿道粘膜外膜蛋白PⅠ破壞中性粒細(xì)胞膜PⅡ細(xì)胞間的粘附作用PⅢ抑制殺菌抗體活性IgA1蛋白酶—破壞粘膜表面特異性IgA1臨床意義—淋病奈瑟菌所致疾病自然宿主傳播途徑臨床表現(xiàn)人類是唯一宿主

性接觸（最主要）間接接觸垂直傳播尿道炎、宮頸炎等尿道炎前列腺炎精囊炎輸精管炎附睪炎尿道炎前列腺炎、精囊炎、輸精管炎、附睪炎男性不育臨床表現(xiàn)男性臨床表現(xiàn)子宮頸炎子宮內(nèi)膜炎輸卵管炎輸卵管閉鎖子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、輸卵管閉鎖女性不孕尿道、宮頸炎女性人類無天然抵抗力細(xì)胞免疫和體液免疫（免疫力不持久）再感染、慢性患者普遍微生物學(xué)檢驗(yàn)

基本特性形態(tài)結(jié)構(gòu)G-雙球菌，雙腎形或咖啡豆樣，兩菌接觸面平坦或略向內(nèi)陷腦脊液—多位于中性粒細(xì)胞內(nèi)，形態(tài)典型急性淋病膿標(biāo)本—多位于中性粒細(xì)胞內(nèi)慢性淋病病人標(biāo)本—多分布在細(xì)胞外

無鞭毛，無芽胞，新分離菌株大多有菌毛和莢膜腦膜炎奈瑟菌（油鏡）腦膜炎奈瑟菌電鏡圖淋病奈瑟菌營養(yǎng)要求高：巧克力色平板、BAP專性需氧，初次分離需要5%-7%的CO2和高濕度刺激生長最適生長溫度為35~37℃，低于30℃不生長，淋球菌高于38.5℃生長也停止培養(yǎng)超過24小時(shí)后產(chǎn)生自溶酶★細(xì)菌抵抗力弱，對(duì)冷、熱、干燥等均敏感，培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)及時(shí)接種（床邊接種）

培養(yǎng)特性巧克力色平板上菌落灰色、透明或半透明、光滑、濕潤、有光澤，邊緣整齊不溶血,露滴狀血平板上菌落卵黃瓊脂平板:無色、光滑、濕潤、有光澤，邊緣整齊、易乳化，質(zhì)地呈奶油狀液體培養(yǎng)基:輕度或中度混濁，無菌膜氧化酶（+）觸酶（+）-延長奈瑟菌除外

對(duì)糖分解能力、硝酸鹽還原能力和DNA合成酶不同，常作為菌種間的鑒別依據(jù)腦膜炎奈瑟菌氧化分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣

淋球菌只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解其他糖類

生化反應(yīng)

腦膜炎奈瑟菌：莢膜多糖群特異性抗原——目前國外已分成A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135和L等10個(gè)血清群。我國建立了H、I、K3個(gè)新血清群，故總計(jì)13個(gè)血清群，95%以上是A群,其中以C群致病力最強(qiáng)

抗原結(jié)構(gòu)與分類外膜蛋白型特異性抗原——根據(jù)外膜蛋白組分不同，腦膜炎奈瑟菌各血清群又可分為若干血清型。但A群除外，其所有菌株的外膜蛋白相同脂寡糖抗原（LOS)——由外膜上糖脂組成，有抗原性，我國把A群分為L9、L10、L11三型，是腦膜炎球菌的主要致病物質(zhì)淋病奈瑟菌：外膜蛋白抗原：包括PI、PII和PIII。PI為主要的外膜蛋白，占淋病奈瑟菌外膜總重量的60%以上，是淋病奈瑟菌分型的主要基礎(chǔ)，可分成A~H、N、R~V、W和X等18個(gè)不同血清型，有助于流行病學(xué)調(diào)查

實(shí)驗(yàn)檢查1、標(biāo)本采集：CSF、血液、瘀點(diǎn)滲出液等,帶菌者檢查可取鼻咽拭子分泌物、尿液

立即送檢或床邊接種平板需預(yù)溫

2、標(biāo)本直接檢查（1）直接涂片檢查男性尿道口膿液涂片WBC內(nèi)見G-雙球菌——早期診斷

CSF沉渣瘀點(diǎn)滲出液涂片革蘭染色亞甲藍(lán)染色WBC內(nèi)、外見G-雙球菌初步報(bào)告

（2）抗原檢查：腦膜炎奈瑟菌抗原檢測(cè)——膠乳凝集試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳、SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)ELISA檢測(cè)淋球菌抗原在檢測(cè)男性尿道分泌物標(biāo)本時(shí)和涂片染色具有相同的敏感性和特異性

3、分離培養(yǎng)血液、CSF用血清肉湯增菌巧克力平板、BAP選擇性培養(yǎng)基（MTM、NYC等）

37℃，5%~7%CO2環(huán)境觀察72h后無生長方可報(bào)告（-）腦膜炎奈瑟菌直徑1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片G-雙球菌、氧化酶和觸酶（+）初步定為奈瑟菌屬葡萄糖和麥芽糖分解(+)、其他糖類分解(-)可確定為腦膜炎奈瑟菌分型血清確定血清型

鑒定淋病奈瑟菌可疑菌落直徑0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴狀凸起的菌落確認(rèn)菌落涂片，見G-雙球菌氧化酶和觸酶（+）葡萄糖分解（+），其它糖類（-）奈瑟菌屬鑒定雙歧索引：G-球菌氧化酶、觸酶（+）

DNA酶（+）（-）卡他莫拉菌奈瑟菌屬營養(yǎng)瓊脂上生長

（+）（-）其他奈瑟菌麥芽糖（+）（-）腦膜炎奈瑟菌淋球菌氧化酶試驗(yàn)陽性原理：具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化型細(xì)胞色素C使對(duì)苯二胺氧化，生成有色的醌類化合物試劑：1%鹽酸四甲基對(duì)苯二胺1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺方法：菌落法、濾紙法、試劑紙片法結(jié)果：細(xì)菌與試劑接觸10秒內(nèi)呈深紫色（+）腦膜炎奈瑟菌的檢驗(yàn)程序腦脊液離心上清液莢膜多糖抗原直接凝集沉淀涂片染色初步報(bào)告瘀點(diǎn)穿刺液、鼻咽部分泌物、拭子分離培養(yǎng)挑選可疑菌落BAP巧克力血液增菌培養(yǎng)葡萄糖肉湯鑒定試驗(yàn)涂片鏡檢氧化酶試驗(yàn)糖分解試驗(yàn)莢膜多糖抗原直接凝集試驗(yàn)淋病奈瑟菌檢驗(yàn)程序直接涂片鏡檢初報(bào)分泌物、膿液、關(guān)節(jié)液分離培養(yǎng)BAP、巧克力選擇性培養(yǎng)基挑選可疑菌落鑒定試驗(yàn)染色鏡檢氧化酶試驗(yàn)觸酶試驗(yàn)糖類分解

免疫學(xué)方法分子生物學(xué)方法抗原檢測(cè)核酸檢測(cè)藥敏卡他莫拉菌（卡他布蘭漢菌）存在——上呼吸道致病——中耳炎、鼻