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文檔簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)四氨基酸紙層析

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

本實(shí)驗(yàn)采用紙色譜對(duì)幾種氨基酸進(jìn)行分離和鑒定,以了解紙色譜的原理，練習(xí)其操作方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理色譜分析法（簡(jiǎn)稱色譜法或?qū)游龇ǎ┥V分析法簡(jiǎn)稱色譜法或?qū)游龇ā?906年，俄國(guó)植物學(xué)家Tsweet將CaCO3放在豎立的玻璃柱中，從頂端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚沖洗。在柱的不同部位形成色帶，因而命名為色譜。管內(nèi)填充物稱為固定相，沖洗劑稱為流動(dòng)相。色譜法就是利用混合物中各組分在固定相和移動(dòng)相中進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配作用，達(dá)到各組分分開(kāi)的目的。

紙色譜為分配色譜，色譜過(guò)程在固定相構(gòu)成的平面狀層下進(jìn)行。濾紙為載體，固定相為濾紙上的水，流動(dòng)相（展開(kāi)劑）為用水飽和過(guò)的有機(jī)溶劑。根據(jù)相似相溶的原則，在展開(kāi)過(guò)程中，樣品在水和有機(jī)溶劑中不斷分配，從而達(dá)到分離的結(jié)果。衡量物質(zhì)向上移動(dòng)的物理量是比移值（Rf）例:大黃中游離蒽醌的紙色譜圖溶劑前沿大黃素甲醚蘆薈大黃素大黃素大黃酸點(diǎn)樣點(diǎn)

三、實(shí)驗(yàn)步驟紙層析1．在濾紙條上端邊緣約1厘米的中央剪一小孔。2．將濾紙條平放于潔凈的紙上，在距離濾紙下端1cm處用鉛筆輕畫一橫線，并在橫線的中央畫一直徑為2mm的小圓圈。3．用毛細(xì)管吸取氨基酸混合液，在濾紙條下端的小圓圈內(nèi)點(diǎn)樣。

7.將濾紙條兩端，用大頭針釘在小木框上，吹干后用噴霧器均勻地噴一層0.2%茚三酮乙醇溶液，然后再將濾紙條吹干，即可看到紙上顯出三色點(diǎn)，每個(gè)色點(diǎn)代表一種氨基酸。8.分別測(cè)量并計(jì)算三種氨基酸的Rf，再根據(jù)教師供給的值確定此三個(gè)色點(diǎn)各為何種氨基酸。9.留在試管內(nèi)的酚溶劑切勿棄去，塞緊塞子。氨基酸

Rf值蛋氨酸0.84谷氨酸0.32丙氨酸0.62

1．層析缸要預(yù)先飽和，展開(kāi)劑勿附著于大試管內(nèi)壁。2．點(diǎn)樣量要適當(dāng)，太少效果不明顯，太多分離不好。要求點(diǎn)的樣直徑不超過(guò)０.５ｃｍ。３．無(wú)論在準(zhǔn)備工作中還是以后的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，都不要用手觸摸紙條中部，因?yàn)槭稚喜桓蓛粑锘蚱ば悸湓诩?/p>

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