菠蘿蛋白酶分離方法

菠蘿蛋白酶分離方法第一頁，共十頁，2022年，8月28日菠蘿蛋白酶簡介菠蘿蛋白酶，簡稱菠蘿酶，亦稱為鳳梨酶或鳳梨酵素。是從菠蘿果莖、葉、皮提取出來，經精制、提純、濃縮、酶固定化、冷凍干燥而得到的一種純天然植物蛋白酶。其外觀為淺灰色粉末狀，分子量為33000，等電點為9.55。品質最佳的菠蘿蛋白酶是利用菠蘿的中莖加工，采用超濾方法進行過濾濃縮，低溫冷凍干燥而得的。產品已被廣泛應用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)。第二頁，共十頁，2022年，8月28日菠蘿蛋白酶制備方法及比較工業(yè)生產上對菠蘿蛋白酶的制備主要是從菠蘿的下腳料中提取，制備工藝有高嶺土吸附法、單寧沉淀法、鹽析法和超濾法等。比較:高嶺土吸附法獲得的菠蘿蛋白酶雖然純度較高，酶活力在410×10U／g以上，但工藝流程長，原料消耗多，酶活總回收率低，會對環(huán)境有污染；單寧沉淀法比高嶺土法簡單，原料消耗少，酶活回收率較低，產品酶活力在315×10－410×10U／g，會對環(huán)境造成污染；鹽析法獲得的菠蘿蛋白酶活性較低，純度與藥用要求相差甚遠第三頁，共十頁，2022年，8月28日超濾法能有效分離提取菠蘿蛋白酶。從超濾法提取菠蘿蛋白酶的工藝流程上看，其操作步驟簡單，并且該法具有無相變、低溫、能耗少、活力損失小、操作簡單等特點，應用于菠蘿蛋白酶的濃縮和分離，不僅能保護其活性，降低生產成本，使用的有機溶劑可回收再生產，基本上沒有廢物排放，而且超濾透過液還可用作飲料添加劑，可以達到清潔生產的要求；另外，超濾法分離得到的菠蘿蛋白酶質量好，純度高，能達到醫(yī)藥級水平。第四頁，共十頁，2022年，8月28日超濾法超濾法提取菠蘿蛋白酶的主要工藝操作包括：①壓榨。將菠蘿下腳料洗凈，用壓榨機壓出汁液，加入0.05％苯甲酸鈉防腐，迅速過濾除雜質?？刹捎脡簽V法或離心法去雜質。②超濾濃縮。將澄清液在管式超濾設備中進行濃縮，使體積濃縮至原體積的1/5。③沉淀。將濃縮液降溫至0~4℃，邊攪拌邊加入-20℃的95％乙醇，直至混合液中乙醇濃度為50％，靜置，使酶沉淀，移出上清液，即得濕酶。④干燥。將濕酶在0℃下減壓干燥或冷凍真空干燥即得菠蘿蛋白酶精品。第五頁，共十頁，2022年，8月28日工藝流程如圖所示。超濾法生產工藝和操作比較復雜，且設備一次性投資大。超濾濃縮后的濃縮液若再用高嶺土吸附法或者單寧沉淀法提取，可大大節(jié)約其他輔助原料的用量，總生產成本減少，且產品質量好，純度高，酶活力高，酶活總回收率高，經濟效益明顯比傳統(tǒng)工藝好。超濾濃縮后的濃縮液用有機溶劑沉淀法提取精酶，由于需要低溫使生產成本上升，但產品質量、純度、酶活都優(yōu)于前者，是菠蘿蛋白酶升級換代的新工藝。第六頁，共十頁，2022年，8月28日菠蘿下腳米

汁液

澄清液濃縮液濕酶酶制品超濾法提取菠蘿蛋白酶工藝流程圖壓榨去雜質超濾濃縮降溫，加有機溶劑、沉淀減壓干燥第七頁，共十頁，2022年，8月28日單寧沉淀法試劑：5％苯甲酸鈉溶液；單寧溶液；0．1％EDTA溶液；0．5％EDTA溶液；1．5％氯化鈉溶液；0．5％乙酸鋅溶液；0．06％抗壞血酸溶液；0．5％硫代硫酸鈉溶液；1％L一半胱氨酸溶液。第八頁，共十頁，2022年，8月28日實驗步驟菠蘿蛋白酶的提?。悍Q取1kg制備好的鮮果皮汁，加5％苯甲酸鈉溶液10ml攪勻，以4000r／min離心7min，取上清液倒人干凈燒杯中。上清液分裝在6個小燒杯中，每個裝100ml菠蘿汁，分別緩緩加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％單寧溶液10ml，邊加邊拌約15min，沉淀物析出，靜止40min。虹吸除去上清廢液，把酶復合沉淀物倒入離心杯中，以4000r／min。離心5min，倒掉上清廢液，得到酶糊復合物。分離、洗滌和保護把提取的蛋白酶糊倒人燒杯中，加0．1％EDTA溶液100ml攪勻，再將1．5％氯化鈉溶液200ml倒人燒杯中攪勻，以第九頁，共十頁，2022年，8月28日4000r／min離心7min，倒掉上清廢液，得到洗滌劑I酶復合沉淀物。把洗滌劑I酶復合沉淀物倒入燒杯中，加0．5％乙酸鋅溶液20min，攪拌均勻，靜止5min，加0．06％抗壞血酸溶液30ml，攪勻，靜止5rain，加1．5％氯化鈉溶液20ml攪勻，靜止5min，最后再加0．5％EDTA溶液20ml，攪勻，靜止5min，以4000r／min離心7min，把上清廢液倒掉，得到洗滌劑Ⅱ酶復合沉淀物。把洗滌劑Ⅱ酶復合沉淀物倒入燒杯中，加0．5％硫代硫酸鈉溶液20m1，攪勻，靜止5min；加1％L一半胱氨酸溶液10ml，攪勻，以4000r／min離心7min，倒掉上清廢液，最后得到蛋白酶糊。冷凍、干燥把提取的