iTOXcontrol 在線生物毒性檢測儀器操作規(guī)程

iTOXcontrol在線生物毒性檢測儀器操作規(guī)程1．儀器原理1.1測試原理費舍爾弧菌（這個品種正式名稱為Photobacteriumphosphoreum）發(fā)光作用是其呼吸作用的附帶產(chǎn)物。其發(fā)光強度取決于外部水體中的多個因素，包括：溫度，PH，鹽度和水中毒物的濃度。水體中的毒物影響發(fā)光菌的生物學(xué)作用，影響菌體細胞中酶的作用，能量的流動等，最終導(dǎo)致的結(jié)果就是抑制菌的發(fā)光強度，而且發(fā)光強度的減弱和水中毒物的濃度是成正比的。圖1裝在小瓶中的發(fā)光菌，毒性越強，發(fā)光越弱1.2儀器結(jié)構(gòu)儀器內(nèi)部結(jié)構(gòu)圖測試部分包括：A.外殼133B.菌種模塊C.混合模塊D.控制液存放模塊E.PMT測光暗室F.測試與參比水樣供給模塊G.取樣臂H.鹽水供給裝置1.3測試流程測試過程包括以下步驟：1）準備階段；2）溫度調(diào)節(jié)&T0測定；3）混合和等待；4）T1測試；5）判定修正系數(shù)&抑制作用。以15分鐘的反應(yīng)時間計算，整個測試流程大概耗時25分鐘左右。測試流程及時間見表1。表1測試流程及時間制備菌種懸浮液、參比水樣與待測水樣適應(yīng)調(diào)節(jié)&T0測定抽取測試水樣加入到測試懸浮液中接觸反應(yīng)&T1測試自動清洗2~5分鐘5分鐘1分鐘15或30分鐘2~5分鐘（1）準備階段根據(jù)ISO11348標準，測試所用到的費歇爾弧菌（Vibriofischeri）測試液必須是含有2%的鹽溶液：所以菌種懸浮液含2%NaCl的空白液和菌種懸浮液；參比水樣懸浮液含2%NaCl的空白液（=負控）；水樣含2%NaCl的水樣。（2）溫度調(diào)節(jié)&T0測定所有懸浮液必須在15oC±0.5oC使用?！斑m應(yīng)時間”的溫度要求將細菌懸浮液從4oC提升并穩(wěn)定在15oC。默認適應(yīng)時間是5分鐘。當溫度穩(wěn)定后，細菌懸浮液初始發(fā)光度”LRT0”由光電倍增管讀取。這是適合調(diào)節(jié)階段的最后一次測量。LRT0、LST0是零時刻檢測的參比讀數(shù)。（3）混合和等待隨后，相同的測試發(fā)光菌懸浮液均等加入到參比水樣和水樣。發(fā)光菌懸浮液+參比水樣=參比測試樣=LRT134發(fā)光菌懸浮液+待測水樣=原水測試樣=LST水樣中可能存在污染物，與發(fā)光菌懸浮液接觸后，混合期間會影響發(fā)光菌。接觸的時間叫混合時間，混合時間默認是15分鐘。（4）T1測試混合時間到后，兩個最終的發(fā)光量將被測定。“LRT1”=Reference/blank參比水樣“LST1”=Sample實際水樣（5）判定修正系數(shù)和抑制作用LRT0的測量和LRT1確定發(fā)光強度的自然變化。發(fā)光強度的自然變化對于參比水樣和水樣（相當于空白和水樣）是同等的。修正系數(shù)是用來修正發(fā)光強度的自然漂移。因此參比水樣發(fā)光強度發(fā)生變化時，修正系數(shù)（CF）是自動計算的。修正系數(shù)：CFRT1=LRT1/LRT0發(fā)光強度修正：LCT1=LST0*CFRT1光強的抑制率算法如下：抑制率：LT1=（（LCT1-LST1）/LCT1）*100LT1=毒性百分數(shù)2．iTOXcontrol儀器操作2.1硬件啟動在儀器的正面板的紅色按鈕是系統(tǒng)的總開關(guān)，打開后：菌種模塊的攪拌器會啟動；儀器會執(zhí)行一次初始化程序。2.2軟件TOXengine啟動iTOXcontrolengine軟件控制儀器的所有硬件操作任務(wù)，如閥門或泵開啟和關(guān)閉和存儲TOXview軟件中的測試結(jié)果的導(dǎo)入。TOXengine軟件在PC啟動后會自動啟動并開135始測量。（TOXview數(shù)據(jù)處理軟件在后臺運行）（1）打開TOXengine后必須先啟動engine.（2）Procedure程序.

EngineOn選擇一個進程后，按Start啟動程序。常用進程如列表所示：Rinsingtheinstrument執(zhí)行清洗StartBacteriaculture（2x25ml）執(zhí)行菌種培養(yǎng)（iTOXcontrol的菌種直接在模塊上培養(yǎng)，TOXcontrol的菌種是獨立的菌種培養(yǎng)儀，因此沒有此項進程）136NomalToxicityMeasurement執(zhí)行正常毒性測試（會按照事先設(shè)定的頻次，自動進行正控與負控的檢測）PositiveControlMeasurement執(zhí)行正控測試NegativeControlMeasurement執(zhí)行負控測試Maintenance：Replacingsyringes執(zhí)行注射器更換維護（3）File菜單Logonasmanager：管理者權(quán)限的登陸密碼為tox。當?shù)顷憺楣芾碚邫?quán)限可進行變量與設(shè)置的修改，用戶級別權(quán)限則不能進行此操作。Language：可設(shè)置軟件的語言（有英語、法語、德語、漢語等）（4）顯示界面的切換軟件底部有5個頁面可供選擇，以顯示相應(yīng)的界面信息。ScreenselectionSTATUSSCREEN狀態(tài)界面選擇status頁進入狀態(tài)界面，此界面主要顯示設(shè)備的狀態(tài)信息，如毒性值、報警、溫度讀數(shù)、試劑體積和進程等。3．試劑配制NaCl鹽溶液（20%）：產(chǎn)品號：02TCB3180050（5L）或自配。用量：±700ml/周（每次測試2ml）。137參比水規(guī)格：山泉水如農(nóng)夫山泉。控制液規(guī)格：硫酸鋅：1.117mgZnSO4*7H2O溶入100ml去離子水中，產(chǎn)品編號：02TCB00308，用量：每次控制測試40μl。光菌；凍干狀態(tài)，產(chǎn)品編號：02TCB00305包括：10小支菌（保存溫度為-20C°）10瓶培養(yǎng)液（保存溫度為+4C°）用量：每周1支菌和1瓶培養(yǎng)液。4．維護保養(yǎng)iTOXcontrol系統(tǒng)的維護按維護周期可以分為周維護、月維護、季度維護（每三個月）。進行儀器維護前，須停止當前的測試進程周維護：4.1清洗所有模塊用75%的酒精清洗所用模塊和模塊中的內(nèi)槽并用干凈的布擦干。用純水再次沖洗，以清除殘余的酒精。4.2更換進樣器（注射器）更換進樣器必須打開測光盒蓋。但打開盒蓋之前有一點必須注意：關(guān)閉光電倍增管的電源。如果儀器一直處在測試狀態(tài)，進樣器的使用壽命一般不小于一個星期。由于存在著磨損，所以如果長時間不進行更換，則進樣器會產(chǎn)生漏液的情況。所以建議一星期更換一次。1更換進樣器步驟11、選擇進程：“維護：更換注射器”2、關(guān)閉光電倍增管的電源！?。?、把黑蓋上的6個螺絲擰下1382更換進樣器步驟21、把暗室的黑蓋取下3更換進樣器步驟31、把固定進樣器的小鐵板取下，用手指扣著往外拉4更換進樣器步驟41、取出舊的進樣器5更換進樣器步驟51、用濕布清潔暗室內(nèi)部，然后擦干凈1396更換進樣器步驟61、如圖，用75%的酒精沖洗取樣軟管與取樣頭7更換進樣器步驟71、用手擰搓軟管以清洗其內(nèi)部8更換進樣器步驟81、然后再用純水沖洗干凈91、重新裝入新的進樣器，并用手按緊接口以防止漏水140更換進樣器步驟910更換進樣器步驟101、把固定小鐵板重新卡入2、開始一個清洗進程，以觀察進樣器是否工作正常11更換進樣器步驟111、一切正常后再把暗室黑蓋蓋上，擰上6個螺絲12更換進樣器步驟121、把光電倍增管的開關(guān)打開更換進樣器及清洗軟管。4.3添加菌液每兩個星期往菌種培養(yǎng)模塊中添加一次菌種懸浮液。存放槽1第一個星期使用，槽2是第二星期使用。1411步驟1所需物品：1、編號02TCB00305培養(yǎng)液和菌種凍干粉2、編號04TCB451432滅菌移液管（10ml）2步驟21、打開蓋子，打開時注意瓶蓋是不是密封未開啟過3步驟31、用移液管取5ml培養(yǎng)液加到菌種瓶中4步驟41、輕輕混合5-10秒鐘2、將混合好的菌液全部倒入培養(yǎng)液瓶中3、重復(fù)步驟3&41425步驟5把混合好的菌種懸浮液放入菌種培養(yǎng)模塊中1、取下蓋子6步驟61、用進樣器移除殘留下的舊菌液2、用75%的酒精清洗存放槽3、用純水清洗存放槽4、用干凈的紙巾或毛巾擦干7步驟71、向槽中加入新的菌液2、檢查槽中的轉(zhuǎn)子是否處在槽的中心位置并保持轉(zhuǎn)動3、再把蓋子蓋上8步驟81、把蓋子蓋上后，檢查位置對不對1439步驟91、標記“維護：更換菌種”2、開始進程“開始菌種培養(yǎng)（2x25ml）”4.4添加鹽水鹽溶液的配制：用去離子水溶解200gNaCl，最后定容到1L。（20%的鹽溶液）。1步驟11、小心的把整個鹽水供給模塊取出來（先拔掉溢流管）2步驟21、把瓶子從模塊上擰下來2、把鹽水瓶上面的鹽結(jié)晶用純水清洗干凈3、把模塊洗干凈4、再加滿20%的鹽水3步驟31、再把模塊擰上2、擰緊模塊后，再把鹽水瓶倒轉(zhuǎn)過來3、現(xiàn)在可以把整個模塊放入儀器中，每次測試消耗的鹽水的量是2ml，整個瓶子的容量是1L4、將狀況頁面中“鹽水的體積”改為1L1444.5添加控制液控制液是儀器在測量中，加入正控測試所需的標準參考毒性試劑?？刂埔号渲茫簩?117mgZnSO4*7H2O溶于100ml去離子水中。溶液中Zn濃度即為2500mg/L每次做控制測試時，使用控制液的量為40μl。往前面的小瓶中添加6.5ml的控制液，后面的小瓶可以加入?yún)⒈人畼樱箖晌汗芪胂嗤w積的液體。4.6取出和清理所有模塊

控制液瓶將模塊從儀器中取出，清洗所有模塊內(nèi)的容器，并用紙巾擦干。清潔所有模塊的外表面。警告：取出菌種模塊與反應(yīng)模塊前必須關(guān)閉電源。注意：使用酒精清洗后，用清水把酒精沖洗干凈。4.7清理儀器內(nèi)部用濕布清潔儀器內(nèi)部，然后擦干凈。4.8清潔并給取樣臂的定向桿上油145潤滑油用紙巾清潔定向桿，然后在不同方位滴3滴油。4.9清潔并給進樣器馬達軸上油用紙巾清潔所有的螺紋，然后滴上2滴潤滑專用油。每三個月維護（季度維護）。4.10更換取樣軟管06TCBSK001維護包（包括：取樣軟管、吸液頭和密封圈）1連接在測光暗室上的軟管1、取下舊的軟管2、將新的軟管連接到測試暗室的底板上3、左邊為參比水樣通道4、右邊為待測水樣通道2連接在吸液頭上軟管1、將軟管連接到吸液頭上2、后面連接參比水樣管3、前面連接待測水樣管4、檢查吸液頭的高度（可閱讀“更換吸液頭”）1464.11更換吸液頭1卡緊螺絲1、松開旋鈕，把加緊吸液頭的夾片去下2、取出吸液頭，斷開與軟管的連接3、插入新的吸液頭，并使其與軟管正確連接2調(diào)節(jié)高度1、開始程序“校正吸液頭的高度”2、檢查吸液頭是否在反應(yīng)槽的正確位置3、吸液頭應(yīng)該非常接近但不接觸反應(yīng)槽右側(cè)圓孔的底部4.12更換密封圈1取下底板1、使用2.5毫米的六角螺絲刀，打開底板2取出舊的密封圈1、使用六角螺絲刀取出密封圈147注意：不要重新使用舊的密封圈，因為密封圈可能在取出的過程中被損壞3放入新的密封圈1、清潔底板和嵌入孔2、裝入新的密封圈3、用手將密封圈推入孔內(nèi)4重新固定底板1、裝上底板并連接好軟管2、開始進程“更換注射器”3、開始進程“清洗儀器”，檢查兩個管道是否有氣泡4、如果有氣泡，檢查密封圈和注射器4.13更換參比和待測水樣管取下參比水樣和待測水樣的進水管，并更換新的管子。4.14檢查散熱風扇檢查風扇是否平穩(wěn)轉(zhuǎn)動。檢查風扇和風扇罩上是否有鹽粒和水滴。如有，則清潔風扇和風扇罩。4.15空調(diào)的維護清理空調(diào)內(nèi)所有的過濾網(wǎng)。4.16維護保養(yǎng)項目及時間日常維護明細表序號周期維護事項備注清潔各個模塊擦洗1每周清潔黑色膠管和吸頭手揉搓黑管，注射器沖洗吸頭。添加參比水148更換注射器更換注射器添加鹽溶液添加毒性控制液清洗水路管道揉搓2每兩周添加發(fā)光菌將所有模塊取下清潔請勿沖洗清潔檢測器內(nèi)部擦洗3每月清潔滑動桿并滴加潤滑液擦掉油污清潔PMT內(nèi)傳動桿并滴加潤滑液同上清潔空調(diào)濾網(wǎng)取下濾網(wǎng)輕輕拍打更換黑色膠管和吸頭半年更換一次維護包即可更換PMT內(nèi)密封墊圈同上更換樣品水管路以管路老化時間為準檢查風扇4

每三個月5．故障排除5.1故障信息及處理序號常見問題異常描述處理方法備注1參比水使用純水CF值比較低更換參比水可根據(jù)各地實際情況來使用參比水，更換之后讓儀器執(zhí)行參比水、毒性兩項測試2POS和NEG數(shù)值數(shù)值偏大或偏小清洗水路，更換樣水或控制液該數(shù)值反應(yīng)的是樣水的水質(zhì)情況，以及菌種對毒性物質(zhì)的適應(yīng)性3菌種模塊冷凝水菌室內(nèi)液體體積增加更換為夏天模式的菌盒（17cm）冷凝水等于稀釋了菌種濃度，對結(jié)果無影響4工控觸發(fā)儀器失敗工控機不能觸發(fā)儀器將儀器程序調(diào)節(jié)到“正常毒性測試”項觸發(fā)只針對“正常毒性測試”一項，進行完其他操作后必須調(diào)回到該選項149序號常見問題異常描述處理方法備注5TOX為負值毒性數(shù)值為負，且數(shù)值較大查看菌種發(fā)光量，檢查參比水供應(yīng)。6CF值偏大和偏小檢查菌種活性及參比水、樣水、鹽水供應(yīng)CF值的最終結(jié)果滿足ISO11348相關(guān)要求7空調(diào)不能升溫CF值偏小保證室內(nèi)溫度該情況一般出現(xiàn)在冬季TOXcontrol同時滿足下列要求時，得出的數(shù)據(jù)視為正常：1、修正系數(shù)在0.6～1.8之間（根據(jù)ISO11348，測試才是有效的）。2、細菌的發(fā)光量必須大于50000（當發(fā)光量低于此值時，誤差會變大）。3、控制樣的毒性測試大于等于60%