淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)

淋巴瘤基因克隆性重排和

IGHV體細(xì)胞超突變檢測(cè)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)血液腫瘤形態(tài)學(xué)（Morphology）聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)毛細(xì)管凝膠電泳(CE)熒光實(shí)時(shí)定量PCR(RTQT-PCR)一代測(cè)序(Sanger)二代測(cè)序(NGS)分子生物學(xué)（Molecular）免疫組化（IHC）流式細(xì)胞術(shù)（FCM）免疫學(xué)（Immunology）熒光原位雜交（FISH）細(xì)胞遺傳學(xué)（Cytogenetics）輔助診斷預(yù)后分析指導(dǎo)用藥MRD檢測(cè)血液腫瘤（常規(guī)腫瘤）檢測(cè)方案-MICM綜合分子檢測(cè)(旌準(zhǔn)方案)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)分子檢測(cè)檢測(cè)基因方法IG/TCR基因重排IGH，IGK，IGL，TRB，TRD，TRGGEL(PAGE)ABI(CE)NGSIGHV超突變IGHGEL(PAGE)ABI(CE)NGS基因突變EZH2,DNMT3A,IDH2…SangerNGSMoffitt,A.B.andS.S.Dave(2017).JClinOncol35(9):955-962.分子檢測(cè)-淋巴瘤淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)最豐富的陽(yáng)性對(duì)照5BIOMED-2唯一授權(quán)的商品化試劑1全面涵蓋各種T\B細(xì)胞重排類型可疑淋巴組織增生性疾病克隆性分析的“金標(biāo)準(zhǔn)”超過400例的臨床樣本驗(yàn)證，反應(yīng)體系穩(wěn)定，結(jié)果可靠324淋巴細(xì)胞克隆性基因重排檢測(cè)產(chǎn)品特點(diǎn)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)B-CellReceptors(BCR)/Immunoglobulins(Ig)T-CellReceptor(TCR)蛋白基因染色體定位Ig重鏈IGH14q32Ig輕鏈IGK2p12Ig輕鏈IGL22q11蛋白基因染色體定位TCRαTRA14q11TCRβTRB7q32TCRγTRG7p15TCRδTRD14q11.2淋巴細(xì)胞克隆性基因重排檢測(cè)的目標(biāo)分子Ig和TCR--單一基因重排，即惡性淋巴細(xì)胞淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)IGH,TRB&TRD:V,D,andJIGK,IGL,andTRG:VandJregions正常淋巴細(xì)胞成熟過程/良性病變多克隆性多種形式的基因重排惡性淋巴瘤發(fā)生的過程單克隆性突出單一形式的基因重排多樣性與克隆性淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)鑒別診斷：明確是淋巴組織反應(yīng)性還是淋巴細(xì)胞惡性增殖輔助診斷：少見類型淋巴瘤，如肝脾T細(xì)胞淋巴瘤亞類分析：明確是B淋巴惡性增殖還是T細(xì)胞惡性增殖區(qū)分同一患者兩種淋巴細(xì)胞惡性腫瘤，包括復(fù)發(fā)與繼發(fā)淋巴瘤微小殘留病灶監(jiān)測(cè)，評(píng)估治療效果或復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)（NGS方法）細(xì)胞免疫治療監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)回輸T細(xì)胞增殖狀況和淋巴組織來源腫瘤細(xì)胞清除效果（NGS）5%～15%的病例表現(xiàn)復(fù)雜，即使做了大量的免疫標(biāo)志也可能難以鑒別其良惡性，需要進(jìn)一步的手段區(qū)分。利用分子生物學(xué)手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公認(rèn)為該疾病診斷手段的重要補(bǔ)充。淋巴細(xì)胞克隆性基因重排檢測(cè)的臨床意義淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)基于PCR檢測(cè)技術(shù)，簡(jiǎn)便、快速、成本較低，所需DNA量少，對(duì)DNA質(zhì)量要求不高。靈敏度高于10%，需配制膠，安全清潔性較差?；赑CR-毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)，敏感性高，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，結(jié)果更加直觀可靠目前市場(chǎng)最被接受的檢測(cè)方法。靈敏度無法滿足MRD要求，難以定量和得到序列。新興技術(shù)，更高靈敏度（10-6），更高分辨率，更高的通量，更廣泛的應(yīng)用。但成本高，儀器貴，操作復(fù)雜，時(shí)間長(zhǎng)。（IGH,IGK,）（IGL）（TRB,TRD,）（

TRG）BIOMED-2方案，唯一授權(quán)）IGHV（依據(jù)ERIC指南）IGH,IGK,TRB,TRGIGHV基于不同方法的產(chǎn)品系列-Invivoscribe公司淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)Invivoscribe公司的IdentiCloneTM系列產(chǎn)品是基于PCR的克隆性檢測(cè)產(chǎn)品，是BIOMED-2唯一授權(quán)的商品化試劑，獲得CE認(rèn)證，以其高度的靈敏性和特異性，成為可疑淋巴組織增生性疾病克隆性分析的“金標(biāo)準(zhǔn)”。IdentiCloneTM系列產(chǎn)品具有精心優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)化試劑組成，具有最豐富的陽(yáng)性對(duì)照，涵蓋各種T\B細(xì)胞重排類型，經(jīng)過了超過400例的臨床樣本驗(yàn)證，按照臨床產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)檢和質(zhì)控，反應(yīng)體系穩(wěn)定，結(jié)果可靠。從Biomed-2到Invivoscribe-唯一授權(quán)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)Biomed-2研究項(xiàng)目淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)Biomed-2研究項(xiàng)目（IGH為例）vanDongen,J.J.M.,etal.(2003).Leukemia17:2257.淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)Biomed-2研究項(xiàng)目（IGH為例）vanDongen,J.J.M.,etal.(2003).Leukemia17:2257.淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)結(jié)果分析（單）克隆性：擴(kuò)增產(chǎn)物電泳在預(yù)期大小范圍內(nèi)一或雙條帶（峰）送檢組織中，淋巴細(xì)胞抗原受體基因的重排方式為單一性。表明組織中存在單克隆性增生的細(xì)胞群。多克隆性：擴(kuò)增產(chǎn)物電泳呈彌散涂抹狀(smear)或階梯狀(高斯分布）送檢組織中，淋巴細(xì)胞抗原受體基因的重排方式為多樣性。表明組織中不存在單克隆性增生的細(xì)胞群。

無擴(kuò)增產(chǎn)物：PCR擴(kuò)增后電泳未見產(chǎn)物送檢組織中的細(xì)胞，抗原受體基因無重排（NK，非淋巴細(xì)胞）或DNA質(zhì)量過差。Productsareheterodulex-treatedfollowedbyPAGEon6%gel250bp-300bp-400bp-IGHB(250-295bp)200bp-500bp-175bp-150bp-markerPMH2OS1S1S2S2淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)淋巴瘤應(yīng)用基因重排檢測(cè)進(jìn)行輔助/鑒別診斷的方案淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)檢測(cè)到克隆性重排未必一定發(fā)生惡性病變某些良性增生也可呈克隆性重排，如CD8+T細(xì)胞淋巴增生性病變、良性單克隆性丙種球蛋白病、皮膚淋巴瘤樣丘疹病、免疫缺陷患者嚴(yán)重的EB病毒感染等；檢測(cè)不到克隆性重排也不能排除惡性病變某些明確惡性病變的免疫缺陷患者中偶爾檢測(cè)不到克隆性重排，NK/T細(xì)胞淋巴瘤中IG和TCR基因呈胚系結(jié)構(gòu)，即也無克隆性重排。IG或TCR基因的重排不一定是譜系的標(biāo)志特別是大多數(shù)前驅(qū)淋巴細(xì)胞性腫瘤中存在譜系交叉，如血管免疫母細(xì)胞學(xué)淋巴瘤（AITL）。單一發(fā)生可反映譜系，同時(shí)陽(yáng)性只表示克隆性增生，不能判斷譜系來源。假陽(yáng)性和假陰性技術(shù)，引物，反應(yīng)條件分子克隆性結(jié)果分析，應(yīng)結(jié)合臨床、形態(tài)學(xué)和免疫表型特征，方可做出淋巴瘤的最終診斷和分類。注意事項(xiàng)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)對(duì)以下疾病提供重要預(yù)后信息:

慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)前提：IGH克隆性重排為單克隆例外：

V3-21重排區(qū)表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)，與IGHV突變狀態(tài)無關(guān)。SHM判斷標(biāo)準(zhǔn)：IGHV突變比例<2%≥2%SHM狀態(tài)為突變突變PFS1-5年9.2-18.9年OS3.2-10年17.9-25.8年預(yù)后不良良好IGHV區(qū)的SHM狀態(tài)檢測(cè)被推薦為新診斷CLL患者預(yù)后分析的生物標(biāo)志物。PFS：無進(jìn)展生存期（Progressionfreesurvival）OS：總生存期（Overallsurvival）中國(guó)CLL/SLL的診斷與治療指南（2018版）IGHV區(qū)體細(xì)胞超突變檢測(cè)的臨床意義淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)基于PCR檢測(cè)技術(shù)，簡(jiǎn)便、快速、成本較低，所需DNA量少，對(duì)DNA質(zhì)量要求不高。靈敏度高于10%，需配制膠，安全清潔性較差?；赑CR-毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)，敏感性高，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，結(jié)果更加直觀可靠目前市場(chǎng)最被接受的檢測(cè)方法。靈敏度無法滿足MRD要求，難以定量和得到序列。新興技術(shù)，更高靈敏度（10-6），更高分辨率，更高的通量，更廣泛的應(yīng)用。但成本高，儀器貴，操作復(fù)雜，時(shí)間長(zhǎng)。IGH,IGK,IGL,TRB,TRD,TRG（BIOMED-2方案，唯一授權(quán)）IGHV（依據(jù)ERIC指南）IGH,IGK,TRB,TRGIGHV基于不同方法的產(chǎn)品系列-Invivoscribe淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)結(jié)合Leader和FR1區(qū)域的引物在5’端連接有通用的測(cè)序片段，這種設(shè)計(jì)，配合JH反向測(cè)序引物，能夠?qū)崿F(xiàn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的雙向測(cè)序。目前，歐洲慢性淋巴細(xì)胞性白血病研究機(jī)構(gòu)（EuropeanResearchInitiativeonCLL，ERIC）的指南即使用雙向測(cè)序判斷IGHV區(qū)體細(xì)胞超突變（SomaticHypermutation，SHM）狀態(tài)。IGHVSHM的檢測(cè)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)WM/LPLHCLMCLFLBLTLGLNKTCLTPLLDLBCLAITLALCLcHLLyP基于NGS技術(shù)一次性分析51基因鑒別診斷DLBCL基因分型CLL/CLLFLTLGLMCLALCLPTLDDLBCLSMZLWM/LPL預(yù)后分層DLBCLFLMCLCLL/SLLWMBLHCLAITLNKTCLALCL靶向治療按細(xì)胞起源的基因分型：GCB型和ABC型《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》最新基因分型：MCD型、N1型、BN2型、EZB型淋巴瘤51基因突變NGS檢測(cè)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)淋巴瘤51基因突變NGS檢測(cè)淋巴瘤基因克隆性重排檢測(cè)

針對(duì)臨床應(yīng)用設(shè)計(jì)

全面覆蓋WHO、NCCN、中國(guó)指南和專家共識(shí)中涉及的相關(guān)基因遵循臨床常規(guī)診斷流程，同其它診斷技術(shù)協(xié)同使用全方位