曹曉云課件(藥典)

《中國藥典》2015年版微生物內(nèi)容

增修訂概況及執(zhí)行中的問題

天津市藥品檢驗(yàn)所抗生素室曹曉云xiaoyuncao@126.com1當(dāng)前1頁，總共63頁。1101無菌檢查法1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法：微生物計(jì)數(shù)法1106非無菌產(chǎn)品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法1107非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)1121抑菌效力檢查法

（用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在研發(fā)制劑中抑菌劑濃度的確定）1421滅菌法2015年版微生物相關(guān)內(nèi)容收載情況1、6個(gè)通則2、制劑通則中9201藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則9202非無菌藥品微生物限度檢查指導(dǎo)原則9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則9204微生物鑒定指導(dǎo)原則（新增）9205藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（新增）9206無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則（新增）3、6個(gè)指導(dǎo)原則制劑通則中各制劑項(xiàng)下【無菌】、【微生物限度】及抑菌劑效力檢查4、品種正文（原料、輔料、制劑）品種正文中的【無菌】或【微生物限度】（檢查方法和限度，或指向通則）5、制藥用水滅菌注射用水【無菌】注射用水、純化水【微生物限度】6、藥包材【無菌】或【微生物限度】2當(dāng)前2頁，總共63頁?！吨袊幍洹?015年版微生物內(nèi)容增修訂概況2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題相關(guān)通則主要內(nèi)容制藥用水、藥包材微生物檢測(cè)內(nèi)容3當(dāng)前3頁，總共63頁。1101無菌檢查法(修訂)1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法：微生物計(jì)數(shù)法（修訂）1106非無菌產(chǎn)品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法（修訂）1107非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（修訂）1121抑菌效力檢查法（修訂）1421滅菌法(未修訂)9201藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則（未修訂）9202非無菌藥品微生物限度檢查指導(dǎo)原則（修訂）9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則（修訂）9204微生物鑒定指導(dǎo)原則（新增）9205藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（新增）9206無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則（新增）《中國藥典》2015年版微生物內(nèi)容增修訂概況

4當(dāng)前4頁，總共63頁。《中國藥典》2015年版微生物內(nèi)容增修訂概況

一、整合2010年版一、二、三部合一1101無菌檢查法1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法：微生物計(jì)數(shù)法1106非無菌產(chǎn)品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法1107非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)1421滅菌法2010年版一、二部合一9201藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則9202非無菌藥品微生物限度檢查指導(dǎo)原則9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則5當(dāng)前5頁，總共63頁?！吨袊幍洹?015年版微生物內(nèi)容增修訂概況

二、檢驗(yàn)方法與國際接軌，涵蓋標(biāo)準(zhǔn)和方法的整體變化

無菌檢查法

非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法：微生物計(jì)數(shù)法

非無菌產(chǎn)品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法

非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)

抑菌效力檢查法（2010版為指導(dǎo)原則）

藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則2010年版微生物限度6當(dāng)前6頁，總共63頁?！吨袊幍洹?015年版微生物內(nèi)容增修訂概況

三、新理念1、微生物限度的檢查結(jié)果為不符合規(guī)定時(shí)，不得復(fù)試。2、加強(qiáng)檢驗(yàn)過程控制，增訂相關(guān)指導(dǎo)原則微生物鑒定指導(dǎo)原則（新增）藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（新增）無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則（新增）7當(dāng)前7頁，總共63頁?！吨袊幍洹?015年版微生物內(nèi)容增修訂概況2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題相關(guān)通則主要內(nèi)容制藥用水、藥包材微生物檢測(cè)內(nèi)容8當(dāng)前8頁，總共63頁。2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題1、試驗(yàn)環(huán)境要求

2010年版2015年版無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品微生物的檢出。無菌檢查應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無菌檢查的要求，檢驗(yàn)全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。9當(dāng)前9頁，總共63頁。無菌檢查的試驗(yàn)環(huán)境要求？通則9203—藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則

“環(huán)境”

—

1、實(shí)驗(yàn)室的布局與運(yùn)行微生物實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)工作應(yīng)在專屬的區(qū)域進(jìn)行，以降低交叉污染、假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)。無菌檢查應(yīng)在B級(jí)背景下的A級(jí)單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。

2010年版2015年版萬級(jí)下的局部百級(jí)（A+C）A+B或隔離器（建議D級(jí)）

1、試驗(yàn)環(huán)境要求2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題10當(dāng)前10頁，總共63頁。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。通則9205藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則通則9206無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則1、試驗(yàn)環(huán)境監(jiān)控11當(dāng)前11頁，總共63頁。2、無菌檢查法首選薄膜過濾法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。一般應(yīng)采用封閉式薄膜過濾器。3、進(jìn)行產(chǎn)品的無菌檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查和方法適用性試驗(yàn)。4、檢驗(yàn)數(shù)量和檢驗(yàn)量采用薄膜過濾法時(shí)，只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)容物過濾。2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題12當(dāng)前12頁，總共63頁。4、檢驗(yàn)數(shù)量和檢驗(yàn)量檢驗(yàn)數(shù)量檢驗(yàn)量指一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品按表1規(guī)定；上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗(yàn)按表2規(guī)定。表1、表2中最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽性對(duì)照試驗(yàn)的供試品用量。供試品每個(gè)最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量（g或ml）。除另有規(guī)定外，供試品檢驗(yàn)量按表3規(guī)定。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩種培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時(shí)，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部?jī)?nèi)容物過濾。13當(dāng)前13頁，總共63頁。4、檢驗(yàn)數(shù)量和檢驗(yàn)量（表1-1）14當(dāng)前14頁，總共63頁。4、檢驗(yàn)數(shù)量和檢驗(yàn)量

（表1-2）15當(dāng)前15頁，總共63頁。5、保留生物制品無菌檢查的特點(diǎn)

除陰性對(duì)照外藥品生物制品樣品檢測(cè)130～35℃硫乙

硫乙

220～25℃/硫乙

320～25℃TSBTSB陽性對(duì)照430～35℃硫乙

硫乙

16當(dāng)前16頁，總共63頁。6、培養(yǎng)基體系的修訂7、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和偏差調(diào)查的要求8、無菌檢查結(jié)果一次檢出為準(zhǔn)，不得復(fù)試。僅在充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效后方可重新試驗(yàn)。

17當(dāng)前17頁，總共63頁。

供試品的檢查培養(yǎng)基適用性檢查試驗(yàn)菌液制備方法適用性試驗(yàn)

18當(dāng)前18頁，總共63頁。《中國藥典》2015年版微生物內(nèi)容增修訂概況2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題相關(guān)通則主要內(nèi)容制藥用水、藥包材微生物檢測(cè)內(nèi)容19當(dāng)前19頁，總共63頁。

通則1105--非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法

1、微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基與定義的修訂2010年版2015年版細(xì)菌數(shù)：--生長在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落需氧菌總數(shù)：--生長在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上的所有菌落（細(xì)菌、霉菌和酵母菌菌落數(shù)）霉菌和酵母菌數(shù)：--生長在玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的菌落霉菌酵母菌總數(shù)：--生長在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的所有菌落（包括細(xì)菌菌落）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌使霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行測(cè)定）。2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題20當(dāng)前20頁，總共63頁。

2、試驗(yàn)環(huán)境

2010年版藥典：

環(huán)境潔凈度萬級(jí)下的局部潔凈度百級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。

2015年版藥典：微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。

21當(dāng)前21頁，總共63頁。2、試驗(yàn)環(huán)境微生物限度檢查的試驗(yàn)環(huán)境要求？通則9203—藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則

“環(huán)境”

—

1、實(shí)驗(yàn)室的布局與運(yùn)行

微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級(jí)背景下的B級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。

2010年版2015年版萬級(jí)下的局部百級(jí)（A+C）D級(jí)背景下的B級(jí)(B+D）22當(dāng)前22頁，總共63頁。2、試驗(yàn)環(huán)境

單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

新增通則9205-藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則23當(dāng)前23頁，總共63頁。

3、培養(yǎng)基及檢驗(yàn)方法適用性試驗(yàn)

培養(yǎng)基和供試品檢測(cè)所選方法的適用性須經(jīng)確認(rèn)。①方法適用性試驗(yàn)（方法驗(yàn)證）②試驗(yàn)組菌落數(shù)與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)。③加菌步驟提前，加菌量為供試品體積的1%，難度更大。

4、陰性對(duì)照如果陰性對(duì)照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。

24當(dāng)前24頁，總共63頁。5、菌種和菌液的制備菌株中國藥典協(xié)調(diào)案枯草芽孢桿菌BacillussubtilisCMCC(B)63501ATCC6633金黃色葡萄球菌StaphylococcusaureusCMCC(B)26003ATCC6538銅綠假單胞菌PseudomonasaeruginosaCMCC(B)10104ATCC9027白色念珠菌CandidaalbicansCMCC(F)98001ATCC10231黑曲霉AspergillusnigerCMCC(F)98003ATCC1640425當(dāng)前25頁，總共63頁。5、菌種和菌液的制備

原則：《中國藥典》2015年版通則9203-藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則菌種

“藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株”。標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。26當(dāng)前26頁，總共63頁。6、培養(yǎng)條件2010版2015版細(xì)菌30～35℃培養(yǎng)3天霉菌和酵母菌23～28℃培養(yǎng)5天，必要時(shí)可適當(dāng)延長7天。除另有規(guī)定外，需氧菌總數(shù)

30～35℃，培養(yǎng)3～5天；霉菌和酵母菌總數(shù)20～25℃培養(yǎng)，5天～7天。27當(dāng)前27頁，總共63頁。

各品種項(xiàng)下要求執(zhí)行的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)解釋如下：101cfu：可接受的最大限度為20；102cfu：可接受的最大限度為200；103cfu：允許的最大限度為2000：依此類推。7、結(jié)果判斷28當(dāng)前28頁，總共63頁。關(guān)于限度標(biāo)準(zhǔn)的表述方式①微生物限度標(biāo)準(zhǔn)以10的指數(shù)形式表示：101cfu：可接受的最大限度為20；102cfu：可接受的最大限度為200；103cfu：允許的最大限度為2000：依此類推。

②問題3×104cfu可接受的最大限度為③標(biāo)準(zhǔn)表述為數(shù)字的，按數(shù)字執(zhí)行，如，純化水。取本品不少于1ml，經(jīng)薄膜過濾法處理，采用R2A瓊脂培養(yǎng)基，30～35℃培養(yǎng)不少于5天，依法檢查（通則1105），1ml供試品中需氧菌總數(shù)不得過100cfu。

29當(dāng)前29頁，總共63頁。

限度標(biāo)準(zhǔn)與檢驗(yàn)結(jié)果的書寫限度標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果10的n次冪可接受的最大菌數(shù)為2倍按科學(xué)計(jì)數(shù)法

6.9×102cfu具體數(shù)字表示即為具體數(shù)字

690cfu兩種表示方式≠

兩種表示方式相等例，內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)1000cfu/g書寫方式①5×102700cfu/g合格？②100030當(dāng)前30頁，總共63頁。8、不得復(fù)試，無相關(guān)內(nèi)容31當(dāng)前31頁，總共63頁。通則1106--非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法

1、培養(yǎng)基變化

在增菌過程，使用無選擇性增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)。疑似菌增加，工作量加大。

2、結(jié)果判斷方式變化

在各控制菌項(xiàng)下：改為“較少的生化實(shí)驗(yàn)”，以及“應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)”。

——較大變動(dòng)

3、以“耐膽鹽革蘭陰性菌”，取代“大腸菌群”。2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題32當(dāng)前32頁，總共63頁。通則1107--非無菌藥品微生物標(biāo)準(zhǔn)

1、需氧菌總數(shù)限度放寬，部分霉菌和酵母菌限度提高

2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題33當(dāng)前33頁，總共63頁。非無菌不含藥材原粉的中藥制劑微生物限度標(biāo)準(zhǔn)

非無菌化學(xué)藥品及生物制品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)(表1)制劑類型需氧菌霉菌、酵母菌控制菌口服給藥固/液體①103102102101不得檢出大腸埃希菌；含臟器提取物的制劑還不得檢出沙門菌口腔黏膜/齒齦/鼻用102101不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌耳用/皮膚102101不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌呼吸道吸入102101不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、耐膽鹽革蘭氏陰性菌陰道/尿道102101不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、梭菌（中藥制劑）直腸給藥固/液體103102102102不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌其他局部給藥102102不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌局部用藥注①化學(xué)藥品制劑和生物制品制劑若含有未經(jīng)提取的動(dòng)植物來源的成分及礦物質(zhì)還不得檢查沙門菌。34當(dāng)前34頁，總共63頁。非無菌含藥材原粉的中藥制劑微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（表2）制劑類型需氧菌霉菌、酵母菌控制菌固體口服給藥-含豆豉神曲等發(fā)酵原粉-不含豆豉神曲等發(fā)酵原粉105104（丸劑3×104）5×102102大腸埃希菌，沙門菌，耐膽鹽的陰性菌應(yīng)小于102個(gè)液體口服給藥-含豆豉神曲等發(fā)酵原粉-不含豆豉神曲等發(fā)酵原粉1035×102102102大腸埃希菌，沙門菌，耐膽鹽的陰性菌應(yīng)小于101個(gè)固體局部給藥-表皮或黏膜完整-表皮或黏膜不完整104103102102金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌，陰道&尿道給藥制劑不得檢出白色念珠菌、梭菌。液體局部給藥-表皮或黏膜完整-表皮或黏膜不完整102102金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌，陰道&尿道給藥制劑不得檢出白色念珠菌、梭菌。NationalInstituteofFoodandDrugControlHttp://35當(dāng)前35頁，總共63頁。不得檢出沙門菌：口服制劑①含臟器提取物②含有未經(jīng)提取的動(dòng)物、植物及礦物質(zhì)來源的成分③含生粉的中藥制劑耐膽鹽革蘭陰性菌：口服制劑表1：①呼吸道吸入給藥制劑不得檢出（定性）表2：②固體制劑＜102cfu/g（定量）

③

液體制劑＜101cfu/g（定量）36當(dāng)前36頁，總共63頁。指數(shù)形式表示標(biāo)準(zhǔn)放寬固體：不易繁殖，標(biāo)準(zhǔn)最低。局部：粘膜系統(tǒng)或易感部位—特殊用藥途徑較高（霉酵提高）液體：易繁殖，標(biāo)準(zhǔn)較高（霉酵提高）37當(dāng)前37頁，總共63頁。非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)原輔料、飲片-限度.doc中藥飲片：中藥研粉口服用貴細(xì)飲片、直接口服及泡服飲片38當(dāng)前38頁，總共63頁?！吨袊幍洹?015年版微生物內(nèi)容增修訂概況2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題相關(guān)通則主要內(nèi)容制藥用水、藥包材微生物檢測(cè)內(nèi)容39當(dāng)前39頁，總共63頁。相關(guān)通則主要內(nèi)容---通則1121抑菌效力檢查法1、將原指導(dǎo)原則，修訂為檢查法。對(duì)抑菌劑的選擇和抑菌效力的監(jiān)控更加重視。2、用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在研發(fā)階段制劑中抑菌劑濃度的確定。3、分三類，每類分A和B標(biāo)準(zhǔn)。

①注射劑、眼用制劑、用于子宮和乳腺的制劑。②耳用制劑、鼻用制劑、皮膚給藥制劑、吸入制劑。③口服制劑、口腔黏膜制劑、直腸給藥制劑。40當(dāng)前40頁，總共63頁。相關(guān)通則主要內(nèi)容

---通則9202非無菌藥品微生物限度檢查指導(dǎo)原則1、控制菌檢查法沒有規(guī)定進(jìn)一步確證疑似致病菌的方法。若供試品檢出疑似致病菌，確證方法應(yīng)選擇已被認(rèn)可的菌種鑒定方法，如，細(xì)菌鑒定一般依據(jù)《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》。2、用于手術(shù)、燒傷及嚴(yán)重創(chuàng)傷的局部給藥制劑應(yīng)符合無菌檢查法要求。對(duì)創(chuàng)傷程度難以判斷的如沒證據(jù)證明藥品不存在安全性風(fēng)險(xiǎn)那么該藥品應(yīng)符合無菌檢查要求。3、在制定原輔料微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)原輔料的微生物污染特性、用途、相應(yīng)制劑的生產(chǎn)工藝及特性等因素，還需控制具有潛在危害的致病菌。41當(dāng)前41頁，總共63頁。相關(guān)通則主要內(nèi)容

---通則9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。1.名稱“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則”修訂為“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”42當(dāng)前42頁，總共63頁。相關(guān)通則主要內(nèi)容

---通則9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則2.整體框架修訂前：人員、培養(yǎng)基、菌種、實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行、設(shè)備、文件、實(shí)驗(yàn)記錄、結(jié)果的判斷修訂后：人員、培養(yǎng)基、試劑、菌種、環(huán)境、設(shè)備、樣品、檢驗(yàn)方法、污染廢棄物處理、檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證和檢測(cè)過程質(zhì)量控制、實(shí)驗(yàn)記錄、結(jié)果的判斷和檢測(cè)報(bào)告、文件。43當(dāng)前43頁，總共63頁。相關(guān)通則主要內(nèi)容

---通則9204微生物鑒定指導(dǎo)原則為非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查中控制菌的鑒定，以及藥物原料、輔料、制藥用水、生產(chǎn)環(huán)境、中間體和終產(chǎn)品中檢出微生物的鑒定提供指導(dǎo)。

1、微生物的鑒定結(jié)果以《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第二版(《Bergey＇sManualofSystematicBacteriology》SecondEdition)為準(zhǔn)。

2、鑒定程序：分離純化、初篩試驗(yàn)、表型鑒定、基因型鑒定。

3、溯源分析44當(dāng)前44頁，總共63頁。相關(guān)通則主要內(nèi)容

---通則9205藥品潔凈室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)用潔凈室等受控環(huán)境微生物污染情況的監(jiān)測(cè)和控制。

1、人員要求

2、初次使用的潔凈實(shí)驗(yàn)室參數(shù)確認(rèn)

3、監(jiān)測(cè):微生物檢測(cè)方法、監(jiān)測(cè)頻次及監(jiān)測(cè)項(xiàng)目、監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、警戒限和糾偏限、數(shù)據(jù)分析及偏差處理、微生物鑒定

4、微生物控制45當(dāng)前45頁，總共63頁。相關(guān)通則主要內(nèi)容

---通則9206無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則是為藥典要求無菌的藥品、生物制品、原料、輔料、及其他品種無菌檢查用隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證提供指導(dǎo)。無菌隔離系統(tǒng)從根本上避免了操作人員與實(shí)驗(yàn)用物品的直接接觸。

1、隔離器的結(jié)構(gòu)

2、隔離器的安裝位置的選擇

3、隔離系統(tǒng)驗(yàn)證

4、隔離器的應(yīng)用46當(dāng)前46頁，總共63頁?！吨袊幍洹?015年版微生物內(nèi)容增修訂概況2015年版無菌檢查法執(zhí)行中的問題2015年版微生物限度執(zhí)行中的問題相關(guān)通則主要內(nèi)容制藥用水、藥包材微生物檢測(cè)內(nèi)容47當(dāng)前47頁，總共63頁。制藥用水是藥品生產(chǎn)中用量最大、使用最廣的一種輔料，貫穿于生產(chǎn)的全過程。藥典所收載的制藥用水，根據(jù)因其使用的范圍不同而分為飲用水、純化水、注射用水及滅菌注射用水。制藥用水的原水通常為飲用水。制藥用水微生物檢驗(yàn)方法的修訂主要涉及純化水及注射用水。制藥用水微生物檢驗(yàn)方法與標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)前48頁，總共63頁。

1、美國藥典和歐洲藥典方法情況美國藥典通則〈1231〉制藥用水中，彈性標(biāo)準(zhǔn)，推薦方法給出的是高營養(yǎng)類型的培養(yǎng)基TSA。歐洲藥典明確規(guī)定的是R2A培養(yǎng)基。

當(dāng)前49頁，總共63頁。2、制藥用水微生物檢驗(yàn)方法課題研究結(jié)果課題研究框架

課題組通過對(duì)13家制藥企業(yè)的純化水系統(tǒng)共計(jì)90個(gè)水樣，采用不同的培養(yǎng)基體系、培養(yǎng)條件以及檢測(cè)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，共取得了5000多個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。13家制藥企業(yè)涵蓋了國內(nèi)制藥企業(yè)、中外合資制藥企業(yè)、外資制藥企業(yè)以及醫(yī)院制劑室，且地域分布適宜，具有較好的代表性。

當(dāng)前50頁，總共63頁。

課題研究重點(diǎn)考察內(nèi)容（培養(yǎng)體系、方法、國產(chǎn)進(jìn)口不同廠家培養(yǎng)基）

1）培養(yǎng)體系的三要素培養(yǎng)基3種TSAR2A營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)溫度2個(gè)20～25℃30～35℃

培養(yǎng)時(shí)間4個(gè)48h72h96h120h當(dāng)前51頁，總共63頁。

課題試驗(yàn)結(jié)果考察培養(yǎng)體系的三要素的結(jié)果：從統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，3要素中對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果起主導(dǎo)作用的是培養(yǎng)時(shí)間，無論哪種培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度，只要延長培養(yǎng)時(shí)間，都能使計(jì)數(shù)結(jié)果數(shù)值增大，但相同培養(yǎng)時(shí)間，不同培養(yǎng)要素（培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)溫度）的兩兩組合對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍有影響。將134組有效數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明，R2A，30～35℃，120hr表觀累加計(jì)數(shù)結(jié)果數(shù)值最高。

當(dāng)前52頁，總共63頁。20組有效數(shù)據(jù)采用Excel作配對(duì)t檢驗(yàn)（顯著性水平為0.05），統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，2種檢測(cè)方法的計(jì)數(shù)結(jié)果均無顯著性差異（P＞0.05）。平皿法和薄膜過濾法結(jié)果無顯著差異（高污染水平）平皿法相具有費(fèi)用低、檢測(cè)方法簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)薄膜過濾法相比平皿法的優(yōu)勢(shì)在于檢測(cè)更大的樣本量，以保證所得到的數(shù)據(jù)更具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。平皿法薄膜過濾法R2A，30～35℃，120hrR2A，30～35℃，120hrTSA，30～35℃，72hrTSA，30～35℃，72hr2）考察不同的檢測(cè)方法計(jì)數(shù)結(jié)果差異當(dāng)前53頁，總共63頁。

水系統(tǒng)微生物監(jiān)測(cè)的目的，是要持續(xù)提供足夠的有關(guān)制藥用水中微生物監(jiān)控的數(shù)據(jù)，來制訂微生物污染的警戒限和行動(dòng)限水平，并用于趨勢(shì)分析，使得水系統(tǒng)的微生物數(shù)量可以控制在一定的水平。因此，認(rèn)為在低污染水平的水系統(tǒng)則更適合選擇樣本量大的薄膜過濾法，持續(xù)跟蹤水系統(tǒng)的微生物狀態(tài)。當(dāng)前54頁，總共63頁。新修訂方法及在執(zhí)行過程中可能遇到的問題

純化水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂

修訂前

修訂后取本品，采用薄膜過濾法處理后，依法檢查（附錄ⅪJ），細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個(gè)。取本品不少于1ml，經(jīng)薄膜過濾法處理，采用R2A瓊脂培養(yǎng)基，30-35℃培養(yǎng)不少于5天，依法檢查（通則1105），1ml供試品中需氧菌總數(shù)不得過100cfu。當(dāng)前55頁，總共63頁。新修訂方法及在執(zhí)行過程中可能遇到的問題

純化水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂

R2A瓊脂培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)照非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)（通則1105）中“計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查”的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查方法進(jìn)行，試驗(yàn)