食源性致病菌PCR檢測(cè)中常用的靶基因及其參考引物

宋 艷李建林鄭鐵松!（南京師范大學(xué)金陵女子學(xué)院江蘇南京!"##$%）摘要()方法檢測(cè)食宋 艷李建林鄭鐵松!（南京師范大學(xué)金陵女子學(xué)院江蘇南京!"##$%）摘要()方法檢測(cè)食源性致病菌在敏感性特異性與速度上都具有很大優(yōu)勢(shì)在其應(yīng)用過(guò)程中選擇的靶基因和由此設(shè)計(jì)的引物序列直接影響方法的特異性和靈敏性。綜述了大腸桿菌沙門氏菌金黃色葡萄球菌志賀氏菌及其他常見的食源性致病菌在()檢測(cè)中常用的靶基因及其參考引物以供相關(guān)研究者借鑒。關(guān)鍵詞()食源性致病菌靶基因引物)*)*,.)),**.2)*%46**-22)%*-"$&’()*+&’*,+’-./$0+1*34!（,-.,-/(0..1/123-4,-/2053.7-,815,:;23-4,-/!"##$%(<,-3）8,*)&*#$&’((,--’./#0(2,3/0’/(#30-)’33(5=6/(/2(3’0/8/3*33(’’--((#30-(,’33(5(9-$&’((,’/(=#00//5’(#3(’3,(#8/(/2(3’0/8/3*33(’-/(#$&’((,-!"&(’+,(，+./0"&"+2(’(/-’./#0(2,"’.#12/(07--/8(,/3/3(+3(30-)(/2(3-/(#$&’((=9:),$&-’./#0(2,8/(/2(0/8/3中圖分類號(hào)!#""文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼@文章編號(hào)"##!*#A#（!#""#"*#A%"*#B(（0;131(<3-13E0-即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或@序列的方法。利用()方法對(duì)食品致病菌進(jìn)行檢測(cè)在敏感性特異性與速度上都具有很大優(yōu)勢(shì)。隨著對(duì)一些主要食品微生物遺傳性質(zhì)了解的逐漸深入許多致病菌的遺傳背景進(jìn)一步明了()技術(shù)在食品檢測(cè)中也更加顯示出其應(yīng)用前景。()技術(shù)檢測(cè)食源性致病菌的特異性取決于所選擇的擴(kuò)增靶序列是否為其待檢菌高度保守的特異性片斷。因此選擇靶序列和由此設(shè)計(jì)的引物序列直接影響方法的特異性和靈敏性隨著()技術(shù)在食源性致病菌中的廣泛應(yīng)用對(duì)此也就提出了更高的要求。本文綜述了在食源性致病菌()檢測(cè)中常用的靶基因及其參考引物以供相關(guān)實(shí)驗(yàn)工作者借鑒。因組@特異性保守序（檢測(cè)靶點(diǎn)而設(shè)計(jì)出來(lái)的寡核苷酸序列。()原理是首先將靶@雙鏈加熱變性為單鏈加入兩段人工合成的引物引物與互補(bǔ)的@單鏈堿基互補(bǔ)結(jié)合后在有@聚合酶和D種G’底物存在的情況下引物沿模板@按HA自動(dòng)合成新的@雙。新合的@重復(fù)以上的@過(guò)HJH可將靶@靶點(diǎn)所對(duì)于)檢測(cè)的準(zhǔn)確性和敏實(shí)踐中不強(qiáng)是導(dǎo)致其)檢測(cè)結(jié)果。=>引物在6中的作用引物對(duì)()擴(kuò)增的特異性起著關(guān)鍵的作用引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到()擴(kuò)增的特異性和成功與否。靶序列的選擇是決定()結(jié)果的關(guān)鍵因素選擇是否準(zhǔn)確則取決于對(duì)所檢測(cè)對(duì)象的遺傳背景的了解。引物序列則決定()產(chǎn)物的大小位置產(chǎn)量以及擴(kuò)增區(qū)域的6值和擴(kuò)增產(chǎn)量有關(guān)的重要物理參數(shù)。好的引物設(shè)計(jì)可以避免背景和非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生得到的引物產(chǎn)量也可接近反應(yīng)指數(shù)期的產(chǎn)量理論值而差的引物可能會(huì)很少產(chǎn)生目的產(chǎn)物甚至概述<=< 6及引物(（0;131(<3-13E0-是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或@序列的方法又稱為基因的體外擴(kuò)增法。()用到的引物是根據(jù)目標(biāo)細(xì)菌基收稿日期!##$*"!*#C!通訊聯(lián)系人作者簡(jiǎn)介宋（"$CD*女在讀碩士研究生主要從事食品生物技術(shù)及食品安全方面的研究。!"#沒(méi)有也可能會(huì)產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物。顯然靶序列的選擇和引物的設(shè)計(jì)是"#檢測(cè)實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵。據(jù)目前研究報(bào)道來(lái)看引物基本上是根據(jù)沒(méi)有也可能會(huì)產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物。顯然靶序列的選擇和引物的設(shè)計(jì)是"#檢測(cè)實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵。據(jù)目前研究報(bào)道來(lái)看引物基本上是根據(jù)待檢測(cè)菌的一段已知序列設(shè)計(jì)的并且大多數(shù)是根據(jù)屬特異靶序列設(shè)計(jì)的。"#引物選擇設(shè)計(jì)的原則"#引物設(shè)計(jì)的目的是為了找到一對(duì)合適的核苷酸片斷使其能有效擴(kuò)增模板&。靶基因的選擇原則包括各菌（或?qū)俚臄U(kuò)增靶基因應(yīng)具有種屬特異性即（或?qū)俟灿卸ɑ驅(qū)匍g特異各個(gè)靶基因應(yīng)沒(méi)有或有很小的同源性因?yàn)榘谢蛴休^長(zhǎng)同源序列的片段在退火時(shí)形成的非特異性互補(bǔ)會(huì)降低多重"#擴(kuò)增效率。引物設(shè)計(jì)遵循以下原則(引物長(zhǎng)度特異性一般通過(guò)引物長(zhǎng)度和退火溫度控制。引物長(zhǎng)度太短會(huì)降低序列的特異性引物越長(zhǎng)則擴(kuò)增退火時(shí)被引發(fā)的模板越少而且錯(cuò)配的可能性也會(huì)增加。引物長(zhǎng)度通常在)*+),-.。(引物與引物之間避免成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)否則將導(dǎo)致引物雙鏈體產(chǎn)物和天然模板之間的競(jìng)爭(zhēng)從而影響擴(kuò)增成功。("的合理含量和2值2值在,,+3,4合理的"含量一般為5*6+3*6。(引物位點(diǎn)的選擇也很重要對(duì)于同源性不高的基因來(lái)說(shuō)不同菌株內(nèi)的目的基因序列可能不同所以要選取各基因序列的相同序列來(lái)設(shè)計(jì)引物。的產(chǎn)毒或不產(chǎn)毒株都能擴(kuò)出此段序列其他非8,>?>株均為陰性。若利用-<基因"基因和AC，設(shè)計(jì)H對(duì)引物在檢測(cè)其血清分型的同時(shí)也可以檢測(cè)菌株能否產(chǎn)生高致病性的志賀毒素在食品安全的監(jiān)測(cè)與控制方面會(huì)具有更重要的意義。:是編碼糖胺合成（D))5:D.D:的序列。糖胺合成酶是大腸桿菌8,>?>型合成=型抗原的重要因素一旦其基因菌>?>的=合成中菌>?>。EG&是<<"的溶血素基因位于一)), EG&個(gè)3*$的大質(zhì)粒上而幾乎所有的8,>?>菌株都有一個(gè)這樣的質(zhì)粒。通過(guò)對(duì)EG的"#檢測(cè)除常見的8,>?>血清型外也可檢出其他血清型大腸埃希菌。常用到的檢測(cè)靶基因及參考引物見表8。表8檢測(cè)大腸桿菌的靶基因及其參考引［HN3］目的片段大?。?）序號(hào)靶基因引物序列""01&""0""0000"01"&&018CO)<OH"P檢測(cè)大腸桿菌的靶基因及其參考引物%5D5"!大腸桿菌及其類型大腸桿菌是人和動(dòng)物腸道的正常菌群當(dāng)機(jī)體抵抗力下降或其侵入腸外組織器官時(shí)可作為條件致病菌而引起腸道外感染食品衛(wèi)生學(xué)意義上的大腸桿菌嚴(yán)格稱為致病性大腸埃希菌常被作為衛(wèi)生監(jiān)督的指示菌。致腹瀉大腸桿菌其致病機(jī)制幾乎均與毒力島基因或獲得性質(zhì)粒有［8基因和質(zhì)粒攜帶的基因可編碼產(chǎn)生毒素和致病因子。按其產(chǎn)生特異性毒力因子的能力以及引起腹瀉的類型等可分為四類腸出血性大腸桿菌腸致病性大腸桿菌腸產(chǎn)毒素大腸桿菌腸侵染性大腸桿菌此外還有腸聚集性大腸桿菌和彌散粘附性大腸桿菌。"%檢測(cè)常用靶基因))8-<-<是編碼大腸桿菌8,>?>菌體抗原特異合成酶并參與=抗原脂多糖的生物合成的基因與ACD’DEG&等其它毒力基因相比-<特異性更強(qiáng)。所有的8,>?>產(chǎn)毒或不產(chǎn)毒株進(jìn)行"#擴(kuò)增后此片段都可擴(kuò)出其他非8,>?>株都為陰性有較好的特異［)。)))ACAC是<<"的志賀樣毒素基因。此基因也被作為檢測(cè)大腸埃希菌8,>?>的靶基因是因?yàn)榻^大多數(shù)的大腸埃希菌8,>?>菌株都具有志賀樣毒素基因。此基因可以檢測(cè)所有的產(chǎn)志賀毒素的菌株而不產(chǎn)生志賀毒素的大腸埃希菌如腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌和腸侵襲性大腸埃希菌均不能擴(kuò)增出相應(yīng)的"#產(chǎn)［5。))H""是>鞭毛抗原基因所有8,>?>!"#,&5385>:3O:HP&)*D>8 <P 0 沙門氏菌常用的靶基因及參考引物在食物中毒中沙門氏菌屬是最常見的致病菌，在公共衛(wèi)生食品衛(wèi)生畜牧獸醫(yī)和出入境檢驗(yàn)檢疫中有著十分重要的意義常污染各種肉魚蛋乳類食品而引起食物中毒其中以肉類占多數(shù)。沙門氏菌抗原構(gòu)造包括菌（=抗原鞭（@抗原和I抗原分型主要依靠=@抗原。用來(lái)設(shè)計(jì)"#引物的基（見表)主要分三類即屬特異性基因血清群特異性基因和血清型特異性基因。"! (LR基因序列是一組基因包括LR&LRSLR"、LR$LR<等它編碼吸附和侵襲上皮細(xì)胞表面蛋白。其中LR&是編碼沙門氏菌的侵襲蛋白的基因，侵襲基因使細(xì)菌具有侵襲宿主上皮細(xì)胞的能力只#存在于致病性沙門菌中的獨(dú)特的保守基因序列"#$基因也是毒力島%’’基因之一沙門菌的粘附和穿入宿主細(xì)胞就是由其介導(dǎo)的。)*"［+根據(jù)"#$基因設(shè)計(jì)引物,(檢測(cè)沙門氏菌均得到特異存在于致病性沙門菌中的獨(dú)特的保守基因序列"#$基因也是毒力島%’’基因之一沙門菌的粘附和穿入宿主細(xì)胞就是由其介導(dǎo)的。)*"［+根據(jù)"#$基因設(shè)計(jì)引物,(檢測(cè)沙門氏菌均得到特異擴(kuò)增片斷而非沙門氏菌則無(wú)特異擴(kuò)增。"#傷寒沙門菌鞭毛抗（%’）鞭毛是細(xì)菌重要的毒力因子之一它為細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)提供動(dòng)力可以作為在細(xì)胞表面的黏附素決定了細(xì)菌在細(xì)胞表面吸附及以后的侵入和定居過(guò)程?？梢杂?$基（編碼鞭毛的抗原設(shè)計(jì)引物用,(進(jìn)行套式(氏而包括副傷寒沙門氏沙門氏以及非沙門氏菌屬的其他細(xì)無(wú)法擴(kuò)。3等根據(jù)沙門菌屬隨機(jī)克隆序的,基因和腸炎沙門菌的$基因重(結(jié)果可特異性檢出傷達(dá)6［8。表9沙門氏菌常用的靶基因及參考引［’;6］2編碼A抗原的N基編碼O!抗的,碼O’9的G三性(［D。金黃色葡萄球菌檢測(cè)常用的靶基因金黃色葡萄球菌是一群常堆積成葡萄串狀革蘭氏陽(yáng)性球菌。金黃色葡萄球菌引起的食物中毒主要是由其在繁殖過(guò)程中分泌到菌體細(xì)胞外的腸毒素引起的其食物中毒常發(fā)生在春秋季節(jié)。引起食物中毒的食品主要為肉奶魚蛋類及其制品等動(dòng)物性食品為主。"- 0"1Q是編碼金黃色葡萄球菌的耐熱核酸酶基因。目前認(rèn)為金黃色葡萄球菌的熱穩(wěn)定性核酸酶由葡萄球菌核酸酶編碼其產(chǎn)物是耐熱核酸酶。為).*采用多重,(通過(guò)擴(kuò)增金黃色葡萄球菌的"1Q和)4基因可以將其從牛奶中檢測(cè)出［’E。"# %*%1%0%2%&.).<.Q.R..是其編碼腸毒素的基［’+，腸毒素可分為$G,IS及E種血清型是食物中毒導(dǎo)致急性胃腸炎的主要因素。有’TB金黃色葡萄球菌產(chǎn)生此蛋白質(zhì)性毒素。"! *金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶它是一種能使含有枸椽酸鈉或肝素抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質(zhì)致病菌株多能產(chǎn)生此類物質(zhì)常作為鑒別葡萄球菌有無(wú)致病性的重要標(biāo)［’8。其他如能增強(qiáng)金黃色葡萄球菌的耐藥性的輔助基因.$金黃色葡萄球菌編碼表皮剝脫毒素表皮剝落毒素.).<也常用到見表B。表B金黃色葡萄球菌檢測(cè)常用的靶基因及參考引［8;B］,目的片段（=）序號(hào)靶基因引物序列?$$,@$,,??@,@@??’,89)%AB)6A)D6/8E)G5目的片段（=）序號(hào)靶基因引物序列+)G+?,$$,$$$$$?@@,?@,,@,@’Q$D8-隨的斷A9U5$@55BQA?@D$DA)’"!+致病的傷寒沙門菌都具有!抗原!多糖抗原6)’為H;乙酰半乳糖胺糖醛酸多聚物!抗原產(chǎn)物由染色體中)$和)G兩組基因所控制其中)G基因被認(rèn)為是!抗原表達(dá)的特異結(jié)構(gòu)基因。除此以外主要編碼菌毛亞單元的$沙門氏菌侵襲基因正調(diào)節(jié)蛋白*$質(zhì)粒毒力相關(guān)的%F基因編碼組氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)操縱子*13基因沙門菌外膜蛋白基因0=,腸毒素基因"基因質(zhì)粒編碼菌毛的=./基因染色體復(fù)制起點(diǎn)的$序列’E%J9B%$沙門氏菌(檢測(cè)靶點(diǎn)*等［5則提利用K基因進(jìn)行檢測(cè)具有很好動(dòng)性和非運(yùn)動(dòng)性的沙門氏菌都能得到E)$5+=$98Q95)8D<’’ Q’ , !"!志賀氏菌檢測(cè)常用的靶基因及引物志賀菌屬是主要的腸道病原菌之一屬革蘭氏陰性桿菌是人類細(xì)菌性痢疾最常見的病原菌通稱痢志賀氏菌檢測(cè)常用的靶基因及引物志賀菌屬是主要的腸道病原菌之一屬革蘭氏陰性桿菌是人類細(xì)菌性痢疾最常見的病原菌通稱痢疾桿菌。志賀氏菌作為侵襲性病原菌其致病性主要由毒力質(zhì)粒所介導(dǎo)。它主要的致病因素有侵襲力內(nèi)毒素和"$毒素。志賀菌的致病性主要與其毒力基因的表達(dá)產(chǎn)物相關(guān)其中福氏志賀氏菌的侵襲性質(zhì)粒抗原%的基因’(%編碼侵襲性質(zhì)?；?)志賀菌腸毒素*基因+,-./*和志賀菌腸毒素0基因+,-./0是已確定的一組與疾病相關(guān)的致病基因。馬宏［01人建立了同時(shí)檢測(cè)+,-./*2+,-./0’(%和(1種毒力基因的多重45檢測(cè)方法。經(jīng)對(duì)601株志賀菌毒力基因的鑒定認(rèn)為該方法具有靈敏特異穩(wěn)定的特點(diǎn)。此外志賀氏菌中(72的表達(dá)受多種調(diào)節(jié)因子的調(diào)節(jié)最主要的為75抑制子與耐多（(#）操縱子。通過(guò)45檢測(cè)調(diào)控基因(75(5的突變與志賀菌耐多藥之間的關(guān)系為防治志賀菌耐多藥產(chǎn)生提供依［0;也可以作為志賀氏菌的靶基因。表1志賀氏菌檢測(cè)常用的靶基因及參考引［06/=］等多種真核細(xì)胞結(jié)合繼而進(jìn)入寄居細(xì)胞。"G(則以9的F)作為靶基因進(jìn)行45擴(kuò)增發(fā)現(xiàn)該基因是9所特有的基因片段其他的李斯特菌則不具這個(gè)基因片段同時(shí)選取了金黃色葡萄球菌大腸桿菌和沙門氏菌作對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰［0C。此外，編碼一種侵襲性蛋白6A的基因(’也具有李斯特種屬特異性相對(duì)保守高度特［0D?！? 霍亂弧菌類霍亂的病原在出入境的食品包括毒居因主要毒素有霍亂腸毒小帶聯(lián)結(jié)毒。檢測(cè)霍亂弧菌的常用的靶基因主要亂腸毒素的I基毒力調(diào)節(jié)基因5、編碼.和3的基編碼外膜蛋白的L協(xié)同調(diào)節(jié)菌毛編碼基因8編碼小帶聯(lián)J碼3的3?！? 副溶血弧菌副溶血性弧菌是一種嗜鹽性弧菌常呈多形態(tài)性有鞭毛無(wú)莢膜和芽孢常存在于海產(chǎn)品及鹽漬食品中。目前認(rèn)為副溶血弧菌的致病因子主要有三種分別為不耐熱溶血毒素%耐熱直接溶血毒素%和相對(duì)耐熱直接溶血毒素［B*。位于染色體上編碼%的基因據(jù)推測(cè)是副溶血弧菌的特異性基因還有編碼副溶血弧菌$K5蛋白的基因及其開放閱讀框序列O。2"P等人根據(jù)副溶血性弧菌編碼不耐熱溶血素的,基因耐熱直接溶血素的G,基因和相對(duì)耐熱直接溶血素的,基因設(shè)計(jì)引物利用多重45檢測(cè)***份樣品中的副溶血性弧菌其敏感性高特異性強(qiáng)而且能區(qū)分產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株，遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)方［B0?！? 化膿鏈球菌通過(guò)分析化膿鏈球菌編碼Q抗原蛋白"9基因的高變區(qū);R末端序列45技術(shù)以及基于核酸序列分析方法突破了傳統(tǒng)Q分型系統(tǒng)的限制。對(duì)于化膿鏈球菌具有種特異性的基因還有+"S及目的基因?yàn)?’E0;C轉(zhuǎn)錄調(diào)控序［B1。!目的片段（’）序號(hào)靶基因引物序列..848.@4@.@.4@4...@4*%A0%0B,A1)A;51651=./*2=C./0C結(jié)語(yǔ)引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到45的特異性與成功與否是45反應(yīng)成功擴(kuò)增的一個(gè)關(guān)鍵。隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展各種微生物的基因序列的逐漸明了使得引物設(shè)計(jì)有了更多選擇。例如近年發(fā)現(xiàn)由于轉(zhuǎn)錄調(diào)控子代表了細(xì)菌在適應(yīng)環(huán)境和進(jìn)化過(guò)程中的關(guān)鍵分子成分因此轉(zhuǎn)錄調(diào)控子序列很有可能具有種特異性和群特異性。有學(xué)者選擇轉(zhuǎn)錄調(diào)控子序作為目的序列建立能特異性地檢測(cè)包括化膿鏈球、無(wú)害李斯特氏菌單核增生李斯特菌出血敗血性巴的5研究陸致病相關(guān)的基這些基因大多都是該外一些編碼獨(dú)特酶或其他代謝產(chǎn)物的現(xiàn)和研5測(cè)病原細(xì)菌的靶基因會(huì)有更多選必將。,D%0A)A其他食源性致病菌&引物設(shè)計(jì)中用到#的目的基因及其參考引物見表;?！? 單核細(xì)胞增生性李斯特菌單核細(xì)胞增生性李斯特菌是一種重要的人獸共患和食品衛(wèi)生病原菌該菌主要通過(guò)肉乳及其制品引起人的感染發(fā)病能引起人和動(dòng)物腦膜炎敗血癥及孕婦流產(chǎn)等。,E編碼溶血素:的基因溶血素為李斯特菌的主要致病因子由,E基因編碼。,E基因在李斯特菌中是保守的片段。F)是李斯特菌的內(nèi)化基因內(nèi)化素是李斯特菌的表面蛋白是侵襲性蛋白能與上皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞肝細(xì)胞單核吞噬細(xì)胞!"#其他食源性致病菌%引物設(shè)計(jì)中用到的目的靶基因及參考引［’()!*(&)(!］表!菌種靶基其他食源性致病菌%引物設(shè)計(jì)中用到的目的靶基因及參考引［’()!*(&)(!］表!菌種靶基因引物序列目的片（,）1$$0022$0$111D$021$00$$000副溶血弧菌.外膜脂蛋白表達(dá)基因5;!!綠膿桿菌8化膿鏈球菌7霍亂弧菌=>副溶血性弧菌@7霍亂弧菌B8蠟樣芽孢桿菌溶血素基因!單增性李斯特菌:3單增性李斯特菌2C單增性李斯特菌:)單增性李斯特菌,7單增性李斯特菌2),L6OO4AO.9［NJ??IM;:’>：3(J［7LEOX.EAJ;BOGG:/OGI(./［NJONA9)C：&(J［&JH&J;@JJGI2OGM.L9:%;M［N］J??I:O!（>：3(J［’楊平楊迎伍陳偉J食品中8種致病微生物的多重%快速檢測(cè)技術(shù)研［NJ西南大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版3*（!J［)李永新J微流控芯(激光誘導(dǎo)熒光快速檢測(cè)8種食源性致?。跱J分析化學(xué)研究報(bào)告>（’J［8段瑩陶景玉盧行安等J%方法檢測(cè)食品中致病菌常用的靶基因及其引［NJ中國(guó)微生物雜志C>（>J［!王艷君張春暉王玉芬等J多重%檢測(cè)冷卻肉中的)種致病［NJ分析與檢測(cè)3（)J［C2@]#.2JGI.A2GMMB%/OAGI99M..GY9NJ;/M/9，（C3(J［3MJ?G9I?MU9M:%GONJM;?’，（&(’&(J!"#參考文獻(xiàn)［&朱慶義J致腹瀉大腸埃希菌及其毒力島研究進(jìn)［$J全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)細(xì)菌鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集’：C(J［’EANIEQAJ(’3S3M3SE9A4AO.G：KMKGI99M@.MKK［NJNG;?，*（&&(J［)段瑩陶景玉盧行安等J%方法檢測(cè)食品中致病菌常用的靶基因及其引［NJ中國(guó)微生物雜志C（>J［8趙金毅J食品中常見致病菌的可視芯片檢測(cè)技術(shù)研究［V（CJ［!許一平成煒邵彥春等J沙門菌大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的多重%檢［NJ微生物學(xué)報(bào)C（CJ［C］VG5M，NJ;/GMGIG9GK.H:;B［NJ?I?;:**(J［3GX92O$AJGIG2OOI(,:OGG9.KMIGI.［NJ;/M/9’（8&(J［>$A0?-OAJG:B%(M:I(,M("9L?9I:9［NJ9?;4**&(J［*］@X<G1J%GIO(［"王英杰王長(zhǎng)法#&擴(kuò)增血漿凝固酶基因［"王英杰王長(zhǎng)法#&擴(kuò)增血漿凝固酶基因檢測(cè)致病性金黃色葡萄球［’#生物技術(shù)通報(bào)（*#［,010501737#=1<<B>@B?0@>==［’#<GD?=:（K#［)李博陳福生王小紅等#多重&檢測(cè)食品中的金黃色葡萄球菌志賀菌和沙門［’#衛(wèi)生研究"J（L#［!/M:N3PA#:=@>==0?CBDE1:［’#’AG?3*JJ1#［(楊宏軍高運(yùn)東王長(zhǎng)法#雙重&檢測(cè)奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌粘附素/U和;U基［’#中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)"（"#［K彭國(guó)華胡主花薛琳等#食物中毒樣品中金黃色葡萄球菌及腸毒素檢［’#現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)"（)#［L馬宏王建麗黃麗莉等#志賀菌毒力基因的多重&鑒［’#中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志+（,#［*呂銳利段廣才宋春花#志賀菌臨床分離株耐多藥與調(diào)控基因突變關(guān)［’#中國(guó)公共衛(wèi)生"（*#［+.#:A#0@>’%:!?##=2:=0.：:GB=@>E/==E=［’#??EGD（"#［J.2/#0@>’D/&D7:[:=?:@>［’#E@>EGD，（*#［"$9/&%%#U&7:=/A>@B<0@>*’#?@（!J1#［,楊興國(guó)#多重&檢測(cè)肉及肉制品中四種食源性致病菌的研［F（+#［)李盛豐趙姣鐘名華等#單增李斯特菌不同&快速檢測(cè)方法比［’#中國(guó)公共衛(wèi)生"（"#［!呂海滄#食品中五種主要的致病性弧菌的多重&檢測(cè)方法研［F（L#［(]P0$BWA#0@>E?017@0.7^&0@>E.?［’#’GEG=,（K*1#［K范宏英寇曉霞張菊梅等#水體污染中常見致病菌的多重&分子檢測(cè)研［’#現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)JL（J#［L楊學(xué)明巢強(qiáng)國(guó)葛宇等#食品中化膿鏈球菌的&檢測(cè)方法的建［’#食品工業(yè)（*#［*焦像良#六種食品致病的多重&檢［F*#"""""""""""""""""""